广西医疗卫生重点科研课题(200912)
- 作品数：3 被引量：7H指数：1
- 相关作者：王晓通谢玉波肖强苑汐子李雷更多>>
- 相关机构：广西医科大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广西医疗卫生重点科研课题广西壮族自治区科学研究与技术开发计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 应用酵母双杂交系统筛选E2F1相互作用蛋白
- 2012年
- 目的:应用酵母双杂交系统从人正常胃黏膜细胞的cDNA文库中筛选E2F1转录因子的相互作用蛋白。方法:以pGBKT7-E2F1为诱饵质粒筛选人正常胃黏膜细胞的cDNA文库,得到阳性克隆,反复验证,并对验证后的阳性克隆进行测序及同源性分析。结果:从人正常胃黏膜细胞的cDNA文库中筛选得到20个阳性克隆,经测序和同源性分析,筛除假阳性克隆,最终得到18个不同的候选基因序列。其中,17个为可知基因序列,它们分别是:组织蛋白酶B、SIVA1、干扰素调节因子7、鸟苷酸激酶1、ATP酶抑制因子1、核糖体蛋白SA、纤溶酶原激活物抑制剂1 mRNA结合蛋白、精氨琥珀酸合酶1、卵泡抑素类似物3、金属硫蛋白2A、内质网钙结合蛋白1、WNT1可诱导信号通路蛋白2、CDC42效应蛋白1、可溶性半乳糖凝集素结合蛋白1、中胚层发育候选2、外切酶体成分7和含EGF腓骨蛋白样胞外基质蛋白1,尚有一未知基因片段。结论:应用酵母双杂交系统成功筛选出18种E2F1相互作用蛋白,为进一步探讨E2F1影响胃癌细胞生物学行为的分子机制奠定了基础。
- 廉超王晓通谢玉波肖强
- 关键词：酵母双杂交系统胃肿癌相互作用蛋白
- E2F-1截短体的诱饵载体的构建及检测被引量：1
- 2011年
- 目的构建E2F-1截短体的诱饵载体,并进行自激活活性和诱饵蛋白毒性检测,为应用酵母双杂交系统筛选与E2F-1相互作用蛋白建立实验基础。方法设计引物,PCR扩增E2F-1截短体,引入酶切位点EcoRⅠ和BamHⅠ,将E2F-1截短体连接至载体pGBKT7中,将构建成功的诱饵表达载体pGBKT7-E2F-1截短体转化到酵母菌AH 109中,采用选择性培养皿和β-半乳糖苷酶分析等方法分析检测重组质粒的自激活活性和细胞毒性。结果成功扩增了E2F-1截短体,并连接至载体pGBKT7中,测序比对结果正确,成功转化到酵母菌AH 109中,经检测无自激活活性和细胞毒性。结论成功构建了E2F-1截短体的诱饵载体,经检测无自激活活性和细胞毒性,可应用于酵母双杂交系统筛选与E2F-1相互作用的蛋白。
- 孔凡彪王晓通谢玉波肖强
- 关键词：酵母双杂交自激活
- RNA干扰E2F-1表达对胃癌MGC803细胞生物学行为的影响及其机制被引量：6
- 2009年
- 目的利用基因表达谱芯片技术探讨E2F-1小分子干扰RNA（E2F-1-siRNA）影响胃癌细胞MGC803生物学行为的分子机制。方法分别抽取E2F-1-siRNA转染组和对照组（negative control—siRNA）的细胞总RNA，分离纯化mRNA并逆转录合成荧光分子（Cy3／Cy5）标记cDNA探针，与含有21522条人类22k基因表达谱芯片进行杂交。采用LuxScan 10K／A双通道激光扫描仪扫描芯片上两种信号，应用LuxScan3．0图像分析软件对芯片图像进行处理和分析。结果在21522条基因中，两组胃癌细胞间差异性表达基因为18条，其中上调基因8条，下调基因10条，下调的基因中有1条功能信息不明。结论体外干扰E2F-1基因表达后，胃癌MGC803细胞生物学行为的变化是多基因相互作用、多种信号通路相互调节的结果，其中的关键基因和信号传导通路值得进一步研究。
- 苑汐子尹永硕李雷谢玉波王晓通肖强
- 关键词：胃癌RNA干扰基因芯片基因表达
