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基因重组rAAV-TK治疗膀胱癌被引量：2: 2008年; 目的探讨基因重组rAAV-TK基因治疗膀胱癌的效果。方法（1）通过rAAV—EG—FP转染膀胱肿瘤T24细胞，来确定重组腺相关病毒对该细胞的转染情况及转染效率；（2）通过rAAV—TK体外转染T24膀胱肿瘤细胞，MTT、流式细胞仪等方法来检测对T24细胞凋亡的诱导作用；（3）构建裸鼠膀肮肿瘤模型，分析rAAV—TK基因治疗膀胱癌的体内效果。结果（1）在T24细胞中可以表达携带的外源基因EGFP；（2）rAAV-TK可以稳定感染T24细胞；（3）rAAV—TK转染T24细胞72h后，流式细胞仪检测结果显示，细胞凋亡率是34．12％，明显高于空病毒转染组和空白对照组；（4）瘤内注射rAAV-TK大约9d后，肿瘤生长受到显著抑制，治疗结束后：各组肿瘤的体积分别是：rAAV—TK组（0．71±0．11）cm^3、rAAV-MCS组（1．27±0．13）cm^3和空白对照组（1．24±0．17）cm^3（P〈0．05）。结论体外和体内实验表明rAAV—TK可有效抑制膀胱肿瘤的生长，能够有效基因治疗膀胱肿瘤。; 潘建刚周兴韩瑞发; 关键词：膀胱肿瘤腺相关病毒自杀基因

含TK-IES-ES非融合基因重组腺相关病毒的构建及其功能的初步鉴定: 2009年; 目的探讨重组腺相关病毒(rAAV)-胸苷激酶(TK)-核糖体插入位点(IRES)-内皮抑素(ES)(简称rAAVTIE)非融合载体的构建及每个目的基因相应生物学效应的初步鉴定。方法(1)用PCR分别扩增IRES、TK、ES序列至pMD-19T simple载体,构建pAAV-TK-IRES-ES;(2)分别采用AAV-Helper Free System包装系统、"氯仿-PEG/NaCl沉淀-氯仿抽提"及冰乙醇沉淀法进行AAV的包装、纯化和浓缩。(3)用T24细胞及人脐静脉内皮细胞(HUVEC)对rAAV-TIE生物学效应进行初步鉴定。结果(1)成功构建pAAV-TIE非融合载体,并经酶切、PCR及测序证实;(2)rAAV病毒颗粒滴度达2×1010v.p/mL,浓缩后可达到2×1011-12v.p/mL;(3)rAAV-TIE可以分泌内皮抑素,诱导T24细胞及HUVEC凋亡。结论成功构建rAAV-TIE腺相关病毒,体外实验表明每个基因片段均能发挥相应的生物学功能。; 潘建刚周兴韩瑞发陈志光李江婷; 关键词：腺相关病毒自杀基因内皮抑素

重组腺相关病毒-胸苷激酶-核糖体插入位点-内皮抑素双靶点基因治疗裸鼠膀胱癌的实验研究: 2009年; 目的探讨重组腺相关病毒（rAAV）-胸苷激酶（TK）-核糖体插入位点（IRES）-内皮抑素（ES）（简称rAAV-TIE）双靶点基因治疗膀胱癌的动物实验效果。方法膀胱癌T24细胞悬液接种于27只Balb／c裸鼠右侧肩胛区皮下，观察成瘤情况；取已成瘤裸鼠25只，随机分为对照组、rAAV-多克隆位点（MCS）组、rAAVTK组、rAAV—ES组、rAAV—TIE组，每组5只，瘤内分别注射生理盐水、rAAV—MCS、rAAVTK、rAAV—ES、rAAVTIE，4周后颈椎脱臼处死裸鼠，取出移植瘤，HE染色、计算微血管密度（MVD）；采集裸鼠血液标本，双夹心酶联免疫吸附试验检测血清中ES浓度。结果①T24细胞接种3周后，接种部位肿瘤形成25只，成瘤率93％；②瘤内注射rAAVES、rAAVTK、rAAV-TIE 9d后，肿瘤生长明显抑制。治疗4周后rAAV—ES、rAAVTK、rAAV-TIE、rAAVMCS和对照组肿瘤体积分别为（0．75±0．08）、（0．71±0．11）、（0．52±0．09）、（1．27±0．13）、（1．24±0．17）cm^3；rAAV—ES组与rAAV—TK组间比较差异无统计学意义，其余组间比较差异均有统计学意义（P值均〈O．05）；③5组裸鼠移植瘤MVD分别为（18．72±2．53）、（21．74±4．62）、（12．73±1．78）、（52．38±6．46）和（49．94±7．17）个／HP，治疗组显著低于空白对照组和空病毒组（P〈0．05）。结论重组rAAV—TIE腺相关病毒被成功构建，体外实验表明rAAV-TIE能抑制膀胱癌的血管生成和肿瘤生长，可有效双靶点基因治疗膀胱肿瘤。; 潘建刚周兴韩瑞发; 关键词：腺相关病毒自杀基因内皮抑素

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博士科研启动基金(0706068)

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