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小鼠泛素结合酶UBE2W的抗体制备及组织表达谱分析被引量：6: 2008年; 泛素结合酶(E2)是蛋白泛素化修饰所需的第二个连接酶,在泛素转移和底物特异性识别过程中发挥着重要作用。UBE2W是一种新发现的E2酶,其果蝇属同源蛋白可能在光转导或视网膜变性过程中发挥作用,鼠和人同源蛋白功能未见报道。生物信息学分析UBE2W鼠源氨基酸序列,发现UBE2W具有典型的UBC结构域并在多种物种高度保守。通过构建UBE2W原核表达质粒,在大肠杆菌中表达并纯化了GST-UBE2W融合蛋白。以此纯化蛋白作为抗原免疫新西兰白兔制备抗UBE2W多抗血清,并利用制备的UBE2W抗原柱亲和纯化UBE2W多抗。为了检测纯化抗体特异性,在真核细胞中瞬时表达了myc-UBE2W融合蛋白,分别用myc单抗和UBE2W多抗进行Western blotting分析,结果表明获得了特异性的UBE2W抗体。利用此特异性抗体在小鼠脑、心脏、肾脏、肝脏、肺、肌肉、脾脏和睾丸等组织中均检测到了UBE2W的表达,且在小鼠睾丸中成年期表达最高。; 张莹莹朱恒奇赵莉霞周晓巍黄培堂; 关键词：泛素结合酶抗体组织表达谱

应用H1-U6双启动子RNAi载体筛选人泛素结合酶hUBE2W的RNAi有效靶点被引量：6: 2008年; hUBE2W是新近鉴定出的一种I型泛素结合酶,可能在肿瘤发生和DNA损伤修复过程中起重要作用。RNA干涉是指通过形成局部双链RNA进而特异性地降解细胞内同源基因mRNA的机制,目前已成为基因功能研究的有力工具。通过构建H1-U6双启动子RNAi载体,可以在体内直接转录出针对hUbe2w基因的两段互补小RNA,更接近于生理状态下小干涉RNA的作用。利用RT-PCR方法从293FT细胞总RNA中扩增出hUbe2w基因,分别将其连接至质粒pGL3-Control、pCMV-myc和pDsRed-express-C1中,以便在mRNA水平和蛋白水平检测RNA干涉效果。RNA干涉载体分别与上述报告载体共转染293FT细胞,测定萤光素酶活性和hUBE2W蛋白表达水平,结果显示靶点125和259能够在mRNA水平和蛋白质水平显著降低hUbe2w的表达。; 张莹莹李朝杨志新许龙朱恒奇周晓巍黄培堂; 关键词：泛素结合酶 RNA干涉

范可尼贫血与泛素化(英文)被引量：1: 2007年; Fanconi贫血是一种罕见的隐性遗传性疾病,临床常以先天性畸形、进行性骨髓衰竭和遗传性肿瘤倾向为主要表现而确诊。FA病人细胞对DNA交联剂如丝裂霉素C (MMC)高度敏感。目前已经发现至少12种FA基因的缺失或突变能够引起FA表型的出现,其中10种相应的编码蛋白形成FA复合物共同参与FA/BRCA2 DNA损伤修复途径—FA途径。FA核心复合物蛋白FANCL具有泛素连接酶活性,在结合酶UBE2T共同作用下,催化下游蛋白FANCD2单泛化,泛素化FANCD2与BRCA2形成新的复合物,修复DNA损伤。去泛素化酶USP1在DNA修复完毕后移除FANCD2的单体泛素,使因损伤修复而阻滞的细胞周期继续进行。机体很可能在不同信号通路对FANCD2泛素化/去泛素化的精细调节下,调控FA途径参与不同的DNA修复过程。; 张莹莹周晓巍黄培堂; 关键词：FANCONI贫血泛素化 DNA损伤修复

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国家自然科学基金(30470379)