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苎麻4CL和CCR基因家族成员的克隆、表达及功能研究: 苎麻是中国特有的以纺织为主要用途的农作物,而其茎中的木质素严重影响其纤维品质。近年来,通过基因工程手段调控木质素生物合成途径中的关键酶基因活性,来改变木质素含量的研究以模式植物较多,以韧皮收获部位植物的研究较少。目前仍然...; 唐映红; 关键词：苎麻木质素肉桂酰辅酶A还原酶酶活性

苎麻小分子G蛋白Rac1基因的克隆及表达分析被引量：1: 2013年; 植物Rac是植物中特有的小分子G蛋白,我们从苎麻转录组中获得一个小分子G蛋白基因cDNA的部分序列,设计引物后采用RT-PCR结合RACE技术克隆了该基因的cDNA。序列分析表明,所克隆的Rac1 cDNA全长为1 043 bp,包括594 bp开放阅读框、214 bp的3′端非编码区和235 bp的5′端非编码区,能编码一个197氨基酸的推导蛋白。该蛋白包含G蛋白典型的效应因子结合位点、GTP/GDP结合位点和碱性氨基酸区,C末端具有保守的异戊烯基化位点CSIL。采用半定量RT-PCR分析了该基因在5个苎麻品种及不同组织器官中的表达情况,结果表明Rac1基因在苎麻根、茎、叶中均有表达,其中在叶中的表达量最高。纤维木质素含量不同的品种中,Rac1基因的表达量存在明显差异。木质素含量高的品种具有较高的Rac1基因表达,表明该基因可能在苎麻木质素合成过程中发挥作用。; 黄丽华胡超陈建荣郭清泉张学文; 关键词：苎麻克隆

苎麻纤维素合成酶基因BnCesA4 cDNA序列的克隆与表达分析被引量：8: 2014年; 利用本地BLAST工具,从先期获得的苎麻转录组数据中发掘出与多种植物纤维素合成酶基因有较高同源性的序列CL6473。以苎麻(Boehmeria nivea)栽培种湘苎3号为材料,根据CL6473设计引物,先采用PCR扩增克隆了苎麻一个纤维素合成酶基因cDNA的核心片段,再运用5'及3'RACE获得该基因全长cDNA,序列分析表明该cDNA为一个新的苎麻纤维素合成酶基因cDNA,命名为BnCesA4。BnCesA4 cDNA序列全长4 008 bp,其中编码区全长3 270 bp,编码一个含1 090 aa的多肽,具有植物纤维素酶的保守结构域及特征氨基酸序列。根据该cDNA高可变区序列设计其特异性引物,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对BnCesA4基因在几个代表性苎麻品种:湘苎3号、湘苎1号、湘潭大叶白及城步青麻的木质部和韧皮部两种组织中的表达情况进行了定量分析。qRTPCR显示BnCesA4基因在不同品种苎麻的木质部及韧皮部均有表达,表达量差异不大。; 刘昱翔陈建荣彭彦黄妤赵燕黄丽华郭清泉张学文; 关键词：苎麻克隆

苎麻C3H基因的克隆、生物信息学分析及表达分析被引量：5: 2017年; 旨在为后期验证C3H基因编码蛋白功能并最终实现低木质素优良苎麻品种的基因工程育种奠定基础。基于苎麻高通量测序信息,利用RACE技术克隆C3H基因全长序列,对其进行生物信息学分析;并利用荧光定量技术对苎麻C3H的表达模式进行研究。获得了全长为1940 bp的苎麻C3H基因c DNA序列Bn C3H-1(Gen Bank登录号为KY078743)。Bn C3H-1基因编码蛋白理化性质和结构的分析表明,该基因编码一个含511个氨基酸,分子量为57.80 k D的亲水性蛋白,它可能定位在内质网上。氨基酸序列和结构分析显示Bn C3H-1有一个保守区域,即P450结构域。系统进化分析表明,该基因与巨桉和苦荞C3H基因具有很高的同源性。; 袁有美陈建荣刘芳郭清泉; 关键词：苎麻生物信息学分析木质素细胞色素P450

苎麻木质素合成酶CAD基因的cDNA克隆及表达分析被引量：3: 2014年; 采用PCR结合RACE技术克隆苎麻栽培种湘苎3号CAD基因全长cDNA序列;再运用qRT–PCR技术对木质素含量不同的代表性苎麻品种湘苎1号、湘苎3号、湘潭大叶白和城步青麻的CAD基因在其茎秆韧皮部和木质部的表达进行定量分析;使用1%间苯三酚和25%盐酸对4种苎麻茎横切片进行特异染色,观察品种间木质素染色度。结果表明,获得的苎麻CAD基因cDNA序列全长为1 378 bp(GenBank登录号,KF758396),编码359个氨基酸,推导为苎麻肉桂醇脱氢酶(BnCAD)。该推导蛋白质与已报道的几种植物木质素合成酶CAD的同源性均达90%以上,其中与蒺藜苜蓿的同源性达97%。运用qRT–PCR方法对BnCAD基因表达的定量分析结果显示,苎麻CAD基因在湘苎1号和湘苎3号的韧皮部表达水平明显高于其在木质部的表达水平,而在城步青麻木质部的表达水平高于其在韧皮部的表达水平,该基因在湘潭大叶白的韧皮部和木质部表达量接近。4种苎麻茎横切片的木质素染色结果表明,品种间木质素染色度与CAD基因在其韧皮部的表达量成正相关。; 朱伟溢陈建荣彭彦张学文郭清泉赵燕; 关键词：苎麻克隆

两种苎麻纤维素合酶基因cDNA序列的克隆及表达被引量：6: 2014年; 从苎麻转录组数据出发,利用 Blast 工具从中分析出与多种植物纤维素合酶高度相似的片段 CL789和Unigene 20360。根据片段信息设计特异性引物,从苎麻[Boehmeria nivea （Linn.） Gaud.]栽培种湘苎3号中克隆纤维素合酶核心片段,并利用5′及3′RACE技术获得2个片段的全长cDNA。两者都具有典型的纤维素合酶特征结构域,表明为2个苎麻纤维素合酶基因 CesA的 cDNA序列,分别命名为 BnCesA2和 BnCesA3。BnCesA2基因编码区全长度3240 bp,编码1079氨基酸多肽；BnCesA3基因编码区全长3120 bp,编码1039氨基酸多肽。对BnCesA2和BnCesA3基因在湘苎1号、湘苎3号、湘潭大叶白和城步青麻苎麻品种木质部和韧皮部荧光定量PCR分析显示,2个基因在不同品种苎麻的木质部及韧皮部都有表达,但表达量存在着一定差异,整体而言 BnCesA2具有更高的表达水平,其木质部和韧皮部的表达都为BnCesA3的2-5倍。推测BnCesA2和BnCesA3均参与了苎麻细胞壁的次生合成。; 刘昱翔陈建荣彭彦黄妤赵燕黄丽华郭清泉张学文; 关键词：苎麻 CDNA克隆

苎麻香豆酸–3–羟化酶基因的原核表达被引量：1: 2018年; 以湘苎3号为材料,采用RT–PCR克隆,获得苎麻香豆酸–3–羟化酶(Bn C3H)基因的开放阅读框(ORF)序列,测序正确后将该基因片段连接到原核表达载体p ET–22b中,将构建成功的重组子p ET–22b–C3H转入BL21并诱导表达。结果显示:Bn C3H基因ORF区大小为1 536 bp,编码511个氨基酸,推测蛋白相对分子质量为57 800,理论等电点为8.61,编码的蛋白质为亲水性蛋白质;重组子在IPTG浓度为1 mmol/L时,融合蛋白的表达量在诱导2 h后达到最高,经IPTG诱导和SDS–PAGE检测,获得的融合蛋白与预期蛋白相符。; 袁有美郭清泉; 关键词：苎麻基因克隆原核表达

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国家自然科学基金(31071457)