公共文化服务平台

共 8 条记录，以下是 1-8

全选清除导出

排序方式：

猪戊型肝炎病毒swCH189株衣壳蛋白基因CP239片段的表达、纯化及抗原性分析被引量：1: 2012年; 根据已克隆的戊型肝炎病毒株swCH189株结构蛋白基因(ORF2)的抗原性及水溶性分析,在其序列上设计套式引物,采用RT-PCR技术扩增猪戊型肝炎病毒(HEV)结构蛋白基因ORF2主要抗原基因片段,长度为728bp,将其克隆于PMD18-T载体,测序结果表明插入的片段属于猪戊型肝炎病毒结构蛋白基因ORF2部分;将该片段插入pet32a表达载体,经酶切、测序鉴定证实获得了带有目的基因的重组表达质粒。将重组质粒转化Rosetta菌,经0.3mmol/L IPTG诱导得到融合表达,得到相对分子质量为45 000的重组蛋白,以包涵体形式存在。Western blot分析表明,该蛋白可以与猪戊型肝炎阳性血清反应,表明该蛋白具有良好的反应原性。并用SDS电泳切胶纯化和透析浓缩方法进行纯化,用纯化的蛋白免疫兔子,经每2周免疫1次,连续3次免疫后,对免疫组和对照组,分别在45,60,90d采血,每只兔子采集1份。用夹心ELISA法测定免疫血清抗体,结果表明免疫组在45d后均产生具有HEV抗原结合活性的抗体。本试验对猪swCH189株CP239基因的克隆和表达研究,为进一步研究结构蛋白基因ORF2的生物学功能奠定了基础。; 郝宝成梁剑平兰喜刑小勇项海涛温峰琴胡永浩柳纪省; 关键词：猪戊型肝炎病毒克隆原核表达纯化抗原性分析

散养产蛋鸡群感染前殖吸虫的诊治: 2011年; 1发病情况 2010年4月，兰州市红古区某蛋鸡养殖户745只甘肃本地柴鸡中，有135只蛋鸡突然出现产薄壳蛋，并间隔伴有软壳蛋，产蛋率下降症状。养殖户疑为缺钙，及时用维生素D、钙制剂等药物添加到饲料中进行治疗。20d后，蛋鸡产蛋停止，出现不食，腹部膨大等症状，并间歇有11只鸡陆续死亡。经过临床观察、病理解剖、粪便检查，; 郝宝成王学红郭文柱郭志廷朱银萍胡永浩梁剑平; 关键词：产蛋鸡群蛋鸡养殖户诊治吸虫散养

猪戊型肝炎病毒ORF2部分片段原核表达载体的构建被引量：3: 2011年; 利用Protean软件对猪戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)swCH189株的ORF2进行潜在抗原位点分析,选取381aa-623aa段作为表达片段,运用PCR方法从ORF2全长质粒中扩增出目的片段cp239,经纯化、连接等,成功构建了表达载体pET32a(+)-cp239,为下一步进行基因原核表达及其生物学活性分析奠定了基础。; 郝宝成兰喜胡永浩柳纪省梁剑平; 关键词：戊型肝炎病毒 ORF2 表达载体构建

单核增生性李氏杆菌溶血素的原核表达及可溶性分析: 2012年; 对单核增生性李氏杆菌的主要毒力基因hlyA进行大肠杆菌原核表达,分析其表达蛋白的可溶性并纯化。根据hlyA基因设计特异性引物,细菌煮沸破裂提取基因组,PCR扩增出目的条带。连接转化至克隆载体pMD18-T,测序正确后连接表达载体pET-30a(+),酶切和PCR鉴定正确后转化至BL21(DE3),构建重组质粒pET-30a-hlyA。IPTG诱导表达蛋白,并分析其可溶性。PCR扩增的hlyA基因全长约1 600 bp,成功构建了重组质粒pET-30a-hlyA,转化大肠杆菌诱导表达了溶血素蛋白,SDS-PAGE分析表达产物,结果显示表达的蛋白分子量约为60 kD,以可溶性和包涵体2种形式存在,且以可溶性为主要形式。成功克隆和表达了单核细胞增生性李氏杆菌hlyA基因和溶血素蛋白,并得到纯化蛋白。; 杜丽娟李克生杜惠芬付宝权连晓雯胡永浩; 关键词：溶血素原核表达可溶性蛋白

猪戊型肝炎病毒双重RT-PCR检测诊断方法的建立及其应用被引量：3: 2011年; 猪戊型肝炎（HE）是近年来颇受人们关注的一种人畜共患传染病。人普遍易感。急性戊型肝炎病情较重,病死率为2.5%,明显高于甲型（0.1%）和乙型（0.9%）肝炎,孕期妇女死亡率可高达15%~20%[1],尤其是怀孕最后3个月的孕妇病死率更高。; 郝宝成兰喜胡永浩柳纪省梁剑平; 关键词：戊型肝炎病毒 RT-PCR检测人畜共患传染病病死率

猪戊型肝炎病毒甘肃分离株衣壳蛋白基因序列分析被引量：1: 2011年; 为进行国内猪戊型肝炎病毒(HEV)衣壳蛋白基因特征研究,参照GenBank中已发表的戊型肝炎病毒核苷酸序列,设计了1对扩增HEV衣壳蛋白(Y)基因的引物,利用RT-PCR等方法成功克隆出HEV甘肃分离株swCH189的Y基因cDNA片段,并与国内其他9株典型HEV分离株进行序列分析,用DNAstar软件进行序列同源性分析,PHYLIP软件绘制基因进化树。结果表明,swCH189株的Y基因与国内9株典型HEV分离株间的核苷酸序列同源性为79.6%～91.8%,推导的氨基酸序列同源性为91.4%～98.85%。基因进化树显示swCH189与基因Ⅳ型swCH25株亲缘关系最近,在同一分支上,属于基因Ⅳ型。; 郝宝成梁剑平兰喜刑小勇项海涛温峰琴胡永浩柳纪省; 关键词：猪戊型肝炎病毒衣壳蛋白基因

猪戊型肝炎病毒swCH189株衣壳蛋白基因CP239片段原核表达条件的优化: 2011年; 为了提高猪戊型肝炎病毒swCH189株衣壳蛋白基因CP239片段在大肠杆菌中的表达量,研究了载体、温度、转速、诱导时间以及诱导剂IPTG浓度等不同条件对衣壳蛋白基因CP239片段融合蛋白表达量的影响。结果表明,用LB培养基于37℃培养3.5 h后,采用终浓度为0.3 mmol/L的IPTG在37℃、200r/min诱导培养4 h,pET32a-CP239融合蛋白表达量最大;SDS-PAGE检测结果表明pET32a-CP239融合蛋白的分子质量与预期大小一致,约为45.3 ku;Western blotting结果表明,pET32a-CP239融合蛋白可以与抗-HEV阳性血清发生特异性反应,并具有良好的反应原性,说明衣壳蛋白基因CP239片段蛋白得到正确表达。; 郝宝成梁剑平兰喜刑小勇项海涛温峰琴胡永浩柳纪省; 关键词：猪戊型肝炎病毒衣壳蛋白原核表达

鸡球虫病的防治: 2010年; 球虫病是鸡常见且危害十分严重的寄生虫病,是由一种或多种球虫引起的急性流行性寄生虫病,也是雏鸡的最严重的疾病之一。鸡球虫病分布极广,发生普遍,; 郝宝成王学红郭志廷郭文柱胡永浩梁剑平; 关键词：鸡球虫病寄生虫病流行性雏鸡

全选清除导出

共1页<1>

中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(BRF090402)