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Canstatin-N基因在Pichia pastoris中表达及产物活性分析被引量：2: 2010年; 目的:应用P.pastoris的pAOX1表达系统胞内表达canstatin-N蛋白。方法:通过PCR DNA合成技术以及DNA的酶切和连接技术,除去pPIC9K分泌型表达载体的信号肽,并使其载体的多克隆位点的3′端融合his6纯化标签,获得新的载体pPIC9Ki。以含canstatin N端序列的pET-CTN质粒为模版,PCR法扩增1～89个氨基酸的267bp的canstatin的N端基因片段,将其连接于pPIC9Ki的多克隆位点,获得重组表达质粒pPIC9Ki-CTN-N,用电转法将pPIC9Ki-CTN-N转化P.pastorisGS115,通过G418抗性筛选获得工程菌GS115(pPIC9Ki-CTN-N)。通过摇瓶发酵甲醇诱导表达Canstatin-N蛋白。用蜗牛酶裂解P.pastoris细胞,SDS-PAGE分析蛋白表达情况,在鸡胚中进行活性分析。结果:在pAOX1的调控下,canstatin-N基因能在P.pastoris中经甲醇诱导表达,摇瓶发酵表达量为65mg/L,纯化的目的蛋白具有显著的抑制鸡胚尿囊膜血管生成的作用。结论:实现应用P.pastoris表达Canstatin-N蛋白,为Canstatin-N蛋白的规模化生产和进一步的药用研究奠定了基础。; 潘英文张爱联屈直张添元罗进贤; 关键词：P.PASTORIS 基因表达

血管生成抑制素治疗血管瘤的研究被引量：1: 2015年; 目的观察血管生成抑制素治疗血管瘤的效果。方法发酵毕赤酵母工程菌组成型表达重组血管生成抑制素,用SP-Sepharose Fast Flow(阳离子交换剂)柱进行蛋白纯化;通过抑制鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成试验和诱发血管内皮细胞凋亡试验,分析重组血管生成抑制素的生物学活性,在血管瘤模型(公鸡肉垂)中注射血管生成抑制素,分析血管生成抑制素对血管瘤的药效。结果血管生成抑制素在毕赤酵母中高效表达,经过纯化,收获达98%的重组血管生成抑制素;重组血管生成抑制素具有抑制CAM血管生成和诱发血管内皮细胞凋亡的活性;重组血管生成抑制素与血管瘤模型作用14 d后,瘤体血管生长抑制率为51%(P<0.01),血管瘤增殖抑制率为39%(P<0.05)。结论成功制备重组血管生成抑制素药物,血管生成抑制素对于血管瘤模型具有显著的药效。; 符策奕张泽华张爱联罗进贤; 关键词：血管生成抑制素血管瘤

Pichia pastoris表达系统提高表达量的几个关键点被引量：3: 2008年; Pichia pastoris是近年来迅速发展的一种真核生物表达宿主,有着广阔的应用前景.本文从提高P.pastoris表达重组蛋白产量的角度,就启动子、高拷贝重组子、密码子偏爱、宿主菌和高密度发酵等方面的优化进行了综述.; 周细南张爱联张添元罗进贤谭燕华; 关键词：PICHIA PASTORIS

钙网蛋白-N58在毕赤酵母中的表达及活性分析: 2008年; 目的:利用毕赤酵母表达系统表达Calreticulin-N58蛋白。方法:利用重叠延伸PCR方法合成Calreticulin-N58基因,构建成分泌型的重组表达载体pPIC9K-CRT-N58。该重组表达载体经SacⅠ线性化后,电激转化入毕赤酵母GS115,经MD板和不同浓度G418筛选得到多拷贝重组菌株。经甲醇诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE分析重组蛋白的表达情况,在鸡胚中进行活性分析。结果:重组质粒pPIC9K-CRT-N58在毕赤酵母中经甲醇诱导能分泌表达CRT-N58蛋白,摇瓶表达量大约为60mg/L,纯化的目的蛋白有显著的血管生成抑制作用。结论:实验成功地在毕赤酵母表达系统中实现了Calreticulin-N58的分泌表达。为Cal-reticulin-N58蛋白的进一步药用研究奠定了基础。; 周细南苏东晓潘英文张添元张爱联; 关键词：毕赤酵母分泌表达生物活性

血管生成抑制因子抗癌研究进展: 2009年; 血管生成抑制因子是近年来迅速发展的一类具抑制血管新生和抗癌作用的蛋白质,它在人体内能安全使用,并且不产生抗药性,有着广阔的应用前景.笔者综述了血管生成抑制因子的抗癌作用及其机理等的研究进展.; 苏东晓张爱联屈直; 关键词：血管生成抑制因子抗癌

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海南省重点科技计划项目(05204)