浙江省医药卫生科学研究基金(2009A003)
- 作品数：6 被引量：36H指数：3
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- 壳聚糖-丝素复合支架材料与骨髓间充质干细胞相容性的研究被引量：9
- 2010年
- 目的:探讨壳聚糖-丝素复合支架材料与骨髓间充质干细胞(BMSCs)的细胞相容性。方法:冻干法制备壳聚糖-丝素共混多孔支架,其孔径在100μm～160μm之间,孔隙率为84.2%。将骨髓间充质干细胞与支架复合进行体外培养。倒置相差显微镜与扫描电镜观察BMSCs细胞与支架复合生长、基质形成以及细胞与支架结合的情况,计算细胞黏附率。并于培养2 d、4 d、6 d、8 d、10 d后,用MTT法检测细胞增殖率情况。以不加支架只接种细胞为对照组。结果:BM-SCs在壳聚糖-丝素支架上培养24 h时的黏附率达94.3%,表明具有良好的黏附作用。MTT法检测结果表明BMSCs在壳聚糖-丝素支架上能良好地生长、增殖,细胞生长曲线相似于对照组。相对于对照组,实验组的相对增殖率在86.1%～98.2%之间。倒置相差显微镜及扫描电镜观察显示BMSCs在壳聚糖-丝素支架上能良好地生长、增殖及分泌基质,以及维持细胞的正常形态。结论:壳聚糖-丝素支架与骨髓间充质干细胞具有良好的细胞相容性,壳聚糖-丝素复合支架是一种很有潜力的组织工程支架材料。
- 张文元杨亚冬房国坚
- 关键词：骨髓间充质干细胞细胞相容性
- 壳聚糖-丝素支架材料的细胞毒性检测被引量：5
- 2010年
- 目的:对壳聚糖-丝素(chitosan-silk fibroin)共混多孔支架体外进行细胞毒性实验,探讨壳聚糖-丝素支架对骨髓间充质干细胞的细胞毒性作用情况,为该材料临床应用提供依据。方法:制备壳聚糖-丝素共混多孔支架,并制备该支架材料的浸提液。通过MTT法检测25%、50%、100%浓度的壳聚糖-丝素浸提液对兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)的细胞毒性作用,以第1,3,5,7天为检测时间点,观察细胞生长状况,计算细胞相对增殖率,并对材料的细胞毒性进行分级。以正常培养基为阴性对照组,含0.64%苯酚的培养液为阳性对照组。结果:BMSCs在不同浓度实验组及阴性对照组中生长均好,细胞呈长梭形等形态,细胞形态饱满有光泽,MTT法结果表明同一时间点各浓度实验组与阴性对照组间之间差异均无统计学意义(P>0.05),各时间点各浓度浸提液对BMSCs细胞的相对增殖率均在95%以上,毒性分级为0级或1级,基本上无毒性。结论:壳聚糖-丝素多孔支架材料细胞相容性良好,基本上无细胞毒性,符合生物材料细胞毒性试验的安全标准,是一种很有潜力的组织工程支架材料。
- 张文元杨亚冬房国坚
- 关键词：壳聚糖丝素骨髓间充质干细胞细胞毒性试验MTT法
- 壳聚糖-丝素复合材料的降解性测定
- 2011年
- 目的:观察壳聚糖-丝素复合支架材料的体内外降解性能。方法:①体外降解实验:冻干法制备壳聚糖-丝素复合多孔支架材料,将制备好的壳聚糖-丝素复合材料置于37℃恒温的PBS、1.5 mg/ml溶菌酶溶液中进行体外降解实验。定期测定壳聚糖-丝素复合材料的降解百分率,并观察材料降解的形貌变化及液体变化情况。②体内降解实验:将壳聚糖-丝素复合材料埋植于ICR小鼠脊柱两侧皮下,定期取出,测定壳聚糖-丝素复合材料的降解百分率,并观察试件周围组织反应情况。了解壳聚糖-丝素复合材料在体内外的降解性,以及组织相容性的初步情况。结果:壳聚糖-丝素复合材料在体外PBS中能较稳定地降解,8周降解百分率为67%,溶菌酶对复合支架的降解具有明显的促进作用。壳聚糖-丝素复合材料体内8周降解百分率为73%,降解趋势相似于体外,体内降解速率快于体外PBS组,但慢于溶菌酶组。埋植材料周围皮下组织无充血、水肿、化脓等现象,无组织坏死发生,植入早期局部组织有轻度的炎症反应,后较快消退。表明支架材料对小鼠基本上无毒害。结论:壳聚糖-丝素复合多孔支架材料具有良好的降解性与组织相容性,是一种很有潜力的组织工程支架材料。
- 张文元杨亚冬房国坚
- 关键词：壳聚糖丝素复合材料降解性
- 丝素-壳聚糖复合制作的三维可降解多孔支架被引量：22
- 2009年
- 背景:单独使用天然材料如胶原、明胶及纤维蛋白制备的支架虽然解决了生物相容性等问题,但由于其降解太快,在作为细胞支架时往往提前塌陷而达不到诱生新组织的目的。目的:探讨应用丝素与壳聚糖复合制作生物可降解三维多孔的支架,并对其特性进行检测。设计、时间及地点:材料学观察实验,于2008-06/2009-06在浙江省医学科学院生物工程研究所完成。材料:春蚕茧由浙江省海宁市马桥镇黄墩庙村蚕农赠送,壳聚糖为上海伯奥生物科技有限公司产品。方法:通过脱胶、溶解、透析这3个主要步骤制成质量浓度为15g/L的丝素溶液,将壳聚糖溶解在2%的醋酸溶液中制成25g/L的壳聚糖-乙酸溶液,然后将两者混合,配制成丝素/壳聚糖质量比分别为10:0,5:5,4:6,3:7,2:8,0:10的6种溶液,分别吸入24孔板中,4℃排出气泡后,-20℃预冷冻12h,再冷冻干燥30h。取出后梯度乙醇水化,再用NaOH-乙醇溶液中和稳定1h,漂洗后再次冻干。主要观察指标:光镜和扫描电镜观察各种质量比配制的支架孔径、结构;采用改良的液体替代法测定各种支架的孔隙率;测定各种支架在体外4周的降解率。结果:丝素/壳聚糖质量比为10:0制成的支架孔隙粗大,非常蓬松,易碎,溶失率太高;相反仅以壳聚糖制成的支架冻干后较硬,缺乏足够的弹性;以5:5,4:6,3:7,2:8制成的复合支架冻干后,支架较松软,类似海绵,随着壳聚糖浓度增加,支架硬度增加,支架上有分布均匀且细密的小孔。光镜下各个孔形态不规则,每个孔紧密相连并联通,孔径大小均匀,孔径20～100μm,随着壳聚糖浓度增加,孔径逐渐减小。支架孔隙率测定结果显示,丝素/壳聚糖质量比为4:6组>5:5组>3:7组>2:8组,与丝素/壳聚糖质量比为2:8组比较,5:5组和4:6组的支架孔隙率均明显增大(P<0.05)。各种质量配比制成的丝素-壳聚糖复合支架吸水膨胀率无明显差异(P>0.05)。第4周时丝素/
- 杨亚冬张文元房国坚
- 关键词：丝素壳聚糖
- 皮肤干细胞复合壳聚糖-丝素支架移植修复大鼠皮肤缺损
- 2011年
- 由于皮肤组织结构的复杂性，单一来源的干细胞不能形成理想的完整皮肤，尤其不能形成皮肤附属器。于是出现了采用2种或更多种干细胞合用研制理想皮肤的方法。笔者以真皮间充质干细胞（DMSC）与毛囊干细胞（HFSC）为种子细胞，与壳聚糖一丝素支架共培养形成复合物，移植治疗大鼠皮肤缺损，为组织工程皮肤的临床应用提供实验依据。
- 杨亚冬张文元房国坚
- 关键词：皮肤干细胞皮肤缺损壳聚糖复合物丝素
- 壳聚糖-丝素支架与真皮间充质干细胞的体外复合培养被引量：3
- 2010年
- 背景：壳聚糖与丝素有各自的优点和不足,将两者共混,可取长补短,改善性能。进行壳聚糖-丝素支架与真皮间充质干细胞体外复合培养的研究,可进一步为工程化组织构建打下基础。目的：将壳聚糖-丝素支架与大鼠真皮间充质干细胞体外复合培养,探讨壳聚糖-丝素支架对真皮间充质干细胞吸附、生长及增殖的影响。方法：①壳聚糖和丝素以质量比为3︰7充分搅拌混匀,冻干制作壳聚糖-丝素海绵状支架,并测其孔径、孔隙率等指标。②将该支架与大鼠真皮间充质干细胞复合进行体外培养,倒置相差显微镜观察细胞与支架复合生长、基质形成以及细胞与支架结合的情况。分别于培养6,12,24h消化支架上的细胞,计算细胞吸附率。于培养2,4,6,8,10d后,用MTT法检测细胞增殖率情况。以无支架的细胞培养作为对照组。结果与结论：①倒置相差显微镜及扫描电镜下观察发现该支架有分布较均匀且细密的小孔,孔与孔之间相互连通,孔径大小较均匀,孔径在100~150μm之间,孔隙率为90.3%。②24h内,真皮间充质干细胞对支架的黏附率随着时间的增加而逐渐增高,24h时的黏附率为93%,表明真皮间充质干细胞可良好地黏附于壳聚糖-丝素支架上。③MTT法检测细胞增殖结果显示,于培养各检测时间点,实验组与对照组比较差异均无显著性意义。于培养早期（第2,4天）,对照组增殖细胞数略高于实验组;于培养第10天,实验组的增殖细胞数略高于对照组。倒置相差显微镜观察细胞于支架上的形态和附着良好,并有较旺盛的细胞基质分泌。表明真皮间充质干细胞在该支架上能良好地生长、增殖。提示壳聚糖-丝素支架是真皮间充质干细胞体外培养的良好支架材料。
- 张文元杨亚冬房国坚
- 关键词：真皮间充质干细胞吸附率增殖率MTT法
