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转录因子p53通过激活Ⅰ型干扰素通路抑制登革病毒感染被引量：2: 2014年; 目的：探讨转录因子p53在登革病毒感染中的作用。方法用逆转录病毒载体介导的RNA干扰技术构建p53低表达的人肝癌细胞株HepG2，并采用Western blot 进行鉴定。设定野生组和干扰组，分别用2型登革病毒感染。采用Vero细胞噬斑法检测病毒滴度；间接免疫荧光检测病毒增殖；流式细胞术检测病毒感染后细胞凋亡；酶联免疫吸附试验检测IFN-β分泌。结果与野生组比较，干扰组p53表达明显下调，表明构建p53低表达的HepG2细胞株成功。登革病毒感染24 h后，干扰组病毒滴度比野生组高100倍；免疫荧光显示干扰组发绿色荧光的细胞数明显多于野生组，说明p53抑制了登革病毒的感染。但是，登革病毒感染24 h后两组凋亡细胞的数目并没有明显差异，而野生组IFN-β分泌量增加6倍。结论转录因子p53抑制登革病毒感染可能不是通过促进细胞凋亡，而是通过激活Ⅰ型干扰素通路来发挥作用。; 李国利张俊磊胡艳玲孙厚良石中全李小山刘佳饶贤才胡福泉; 关键词：登革病毒 P53 细胞凋亡干扰素

毒性分子-抗毒性分子系统的生物学作用研究进展: 2015年; 毒性分子-抗毒性分子系统(toxin-antitoxin systems,TA systems)被发现广泛存在于细菌染色体、质粒以及古细菌基因组中。TA系统是由2个基因组成的操纵子,这2个基因分别编码稳定的毒性分子和不稳定的抗毒性分子。毒性分子总是蛋白质,抗毒性分子可能是蛋白质或RNA。因此,根据抗毒性分子的性质和作用方式的不同可将TA系统家族分为5种类型。Ⅰ型和Ⅲ型的抗毒性分子是RNA,能抑制毒性分子的合成或者与其隔离;II、IV和V型的抗毒性分子是蛋白质,能隔离、平衡毒性分子作用或抑制其合成。TA系统具有多种生物学功能。目前研究表明,TA系统可能在细菌应激应答、程序化细胞死亡、多重耐药的形成、防止DNA入侵、稳定大基因组片段等方面有重要的作用。; 李国利胡福泉; 关键词：程序化细胞死亡多重耐药

病毒介导的P53低表达HepG2细胞株的建立: 2012年; 目的构建干扰P53的逆转录病毒载体,建立稳定低表达P53的HepG2细胞株。方法合成干扰P53基因的寡核苷酸序列插入pMSCV-hyg-U6质粒,转化受体菌DH5α,经酶切测序鉴定后瞬时转染HepG2细胞,通过半定量RT-PCR方法检测P53 mRNA表达水平评估干扰效果;选择干扰效果最好的重组质粒转染PT67细胞进行病毒包装,获得逆转录病毒颗粒感染HepG2细胞,通过Hygromycin筛选获得多个细胞克隆,Western blot检测P53蛋白的表达情况;选择P53表达水平最低的细胞克隆。通过5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导凋亡实验,检测P53低表达的HepG2细胞p53通路介导的细胞凋亡情况。结果经酶切和测序验证成功构建重组病毒载体;瞬时转染HepG2细胞后P53 mRNA表达下调;病毒颗粒感染HepG2细胞后P53的mRNA、蛋白表达下调;用5-FU处理后P53低表达HepG2细胞凋亡水平明显低于对照。结论成功构建了干扰P53的逆转录病毒载体,建立了P53低表达HepG2细胞株,明显阻断了P53通路依赖的细胞凋亡。; 刘佳张俊磊李庆伟韩俊峰徐小峰王嘉丽陈炜饶贤才李国利; 关键词：逆转录病毒 P53 HEPG2

ROC曲线评价多参数对新生儿感染的诊断价值被引量：4: 2015年; 目的探讨多个实验室指标对于新生儿感染的早期诊断价值。方法选取确诊感染入院的新生儿30例,检测其血降钙素原(PCT)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞计数(WBC),并以未感染的新生儿作为对照组,比较两组受试者上述指标的水平,用ROC曲线评价这些指标对于新生儿感染诊断的临床应用价值。结果新生儿感染组各参数均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);由ROC曲线可知,PCT和hs-CRP敏感度和特异性达100.0%,TNF-α敏感度为96.7%,特异性为99.3%;IL-6和IL-8敏感度均为93.3%,但特异性分别为73.3%和80.0%,WBC则为70.0%和80.0%。结论各参数均可以用于新生儿感染诊断,但灵敏度与特异性均较高的是PCT和hs-CRP,其次为TNF-α;IL-6和IL-8敏感性虽高,但其特异性不甚满意;WBC诊断价值虽最小,但却是临床必不可少的常规观察指标。; 孟凡萍郝坡; 关键词：新生儿感染降钙素原 ROC曲线

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重庆市卫生局医学科研项目(2011-2-411)