江苏省农业科学院科研基金(6110816)
- 作品数：6 被引量：47H指数：4
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- 两个砂梨品种黑皮病敏感性的生理特性比较被引量：1
- 2010年
- 为研究早熟砂梨品种翠冠和西子绿果实黑皮病抗性差异与采后果皮生理变化的关系。在低温(2℃)贮藏条件下比较黑皮病发病情况、α-法尼烯、共轭三烯、超氧阴离子(O.2-)、过氧化氢(H2O2)以及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)、过氧化氢酶(CAT)等果皮生理指标的变化。结果表明:贮藏于低温条件下的翠冠果实,14 d出现明显的黑皮病症状,42 d病情指数达到了66.3;而西子绿果实无黑皮病症状出现。低温贮藏期间,翠冠果皮中α-法尼烯和共轭三烯含量、共轭三烯的增加速度、O.2-生成速率和H2O2含量均明显高于西子绿。翠冠和西子绿果皮抗氧化酶SOD、POD、APX和CAT的活性变化规律相同,但变化幅度存在差异。2品种SOD、POD和APX活性都在贮藏14 d时达到峰值,随后开始下降;在此过程中,2品种SOD活性相近,POD和APX活性差异逐渐减少。同时2品种CAT活性贮藏14 d后持续下降,翠冠CAT活性低于西子绿,且下降速度远远快于后者。早熟砂梨不同黑皮病敏感性品种果皮中O2.-的生成速率和H2O2含量、POD和CAT活性存在显著差异,而α-法尼烯和共轭三烯含量、共轭三烯的氧化速度是决定果实黑皮病发生与否的关键因素。
- 李慧丛郁盛宝龙蔺经常有宏
- 关键词：砂梨黑皮病Α-法尼烯抗氧化酶活性
- 早熟砂梨两品种对黑皮病敏感性差异的生理生化特性研究
- 比较低温贮藏条件下早熟砂梨品种‘西子绿’和‘翠冠’果实黑皮病抗性差异与采后果皮生理生化特性的关系,为‘西子绿’ב翠冠’杂交组合抗黑皮病后代的筛选和鉴定奠定基础。2008年7月在江苏省农业科学院砂梨种质资源圃采摘规格一致...
- 李慧丛郁盛宝龙蔺经王中华常有宏
- 关键词：砂梨黑皮病生理指标
- 文献传递
- 豆梨半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因的克隆及胁迫表达被引量：2
- 2011年
- 采用RT-PCR结合RACE技术,从中国梨砧木——豆梨成熟种子中克隆获得豆梨半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因（PcCPI）的cDNA全长序列,并通过半定量RT-PCR分析不同胁迫处理对该基因表达水平的影响.结果表明：（1）PcCPIcDNA序列长度为980 bp,开放阅读框78~812 bp,编码的多肽由信号肽（29个氨基酸）和成熟肽（216个氨基酸）组成,具有3个植物半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因家族的高保守特征序列模式——LARFAVQEHN、QX-VXG和YQAKVWVKPW.（2）该蛋白与蔷薇科植物的CPI蛋白处于系统发育树的同一分支,且与苹果CPI蛋白的一致性最高（95.9%）.（3）半定量RT-PCR结果显示：PcCPI基因在豆梨叶片中为诱导型表达,在人工模拟逆境条件下（包括喷施50μmol/L MeJA或100μmol/L ABA、刀片2次机械损伤2、00 mmol/L NaCl胁迫、4℃低温或30℃高温胁迫）处理4 h后,豆梨叶片中PcCPI基因表达量明显上升,表明该基因参与了豆梨对生物或非生物胁迫的防御机制.
- 李慧丛郁常有宏蔺经盛宝龙
- 关键词：豆梨半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因克隆
- 番茄植物络合素合酶基因全长cDNA的克隆及其表达特点被引量：11
- 2010年
- 为从分子水平上揭示PCS基因在番茄重金属螯合解毒过程中的作用机制，该研究以番茄（Lycopersicon esculentum Mill．）品种苏红2003幼苗eDNA为模板，根据NCBI上登录的其他植物的植物络合素合酶基因保守区设计简并引物，利用RT—PCR和RACE技术，克隆番茄植物络合素合酶基因cDNA全长，进一步利用半定量RT—PCR，探讨不同重金属处理后该基因在番茄不同器官中的表达情况。结果显示：番茄植物络合素合酶基因（LePCSl）的eDNA序列长度为1878bp，5’非编码区长113bp，3’非编码区长256bp。推导该基因编码503个氨基酸组成的蛋白，其相对分子质量为55600，等电点6．66。NCBI蛋白质比对结果显示：LePCS1由2个典型的植物络合素亚家族结构域组成，并具有19个可与金属离子结合的半胱氨酸（Cys）残基位点，其中包括4个相邻的Cys—Cys元件（90～91位、350～351位、368～369位和416～417位氨基酸）和11个单一Cys残基（56位、109位、113位、138位、144位、231位、332位、393位、396位、424位和489位氨基酸）。进化树分析表明，LePCS1与马铃薯、烟草、粉蓝烟草等茄科植物的PCS蛋白处于系统发生树的同一分支，且与马铃薯StPCS1蛋白的同源性最高（98．01％）。用含有不同浓度CdCl2·2．5H2O或CuSO4·5H2O的1／2Hoagland营养液[pH（5．8＋0．1）]处理番茄幼苗12h，结果表明：随着CdCI2·2．5H2O浓度的提高，LePCS1基因表达量迅速上升，且其在根中的表达量高于叶片，但CuSO4·5H2O对其表达并无明显促进作用。因此认为LePCS1为番茄植物络合素合酶基因，其表达受Cd^2＋诱导而上升，但不受Cu^2＋影响，并且该基因在根中的表达量高于叶片。
- 李慧丛郁常有宏
- 关键词：番茄基因克隆
- 砂梨RuBisCO小亚基基因cDNA的克隆和分析
- 根据GenBank上登录的苹果(L24497、X65494)、白桦(Y07779)、莴苣(D14001)、大豆(AF303941)和人参(AB236868)等植物的1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(RuBisCO)的小...
- 李慧盛宝龙丛郁蔺经李晓刚杨青松王中华常有宏
- 关键词：砂梨RBCS
- 文献传递
- 豆梨叶片对镉胁迫的生理响应
- 梨为多年生大宗水果,如果长期生长在被镉(Cd)等重金属污染的土壤中,会比一年生作物积累更多的重金属。梨生产多采用砧术嫁接方式,因此砧木吸收、积累和转运重金属的能力可直接决定地上部果实重金属的含量。研究镉胁迫下梨砧木的生理...
- 李慧丛郁常有宏盛宝龙蔺经
- 关键词：豆梨砧木镉胁迫生理响应
- 文献传递
- 杜梨CPI基因的克隆、序列分析及表达被引量：8
- 2011年
- 植物半胱氨酸蛋白酶抑制剂(Cysteine proteinase inhibitor,CPI)在植物的抗逆基因工程中发挥着越来越重要的作用,分离和克隆植物CPI基因进而研究该基因的功能是植物抗逆基因工程研究的热点。为从分子水平上揭示CPI基因在杜梨防御机制中所起的作用,利用RACE和PCR方法,从杜梨种子中克隆CPI基因的cDNA和DNA序列,并采用跨内含子表达引物进行半定量RT-PCR来分析该基因在不同胁迫条件下的表达情况。结果表明:PbCPI基因cDNA长度为987 bp,开放阅读框包含738个核苷酸,编码1个由信号肽(26个氨基酸)和成熟肽(219个氨基酸)组成的多肽。该多肽预测的等电点为6.68,估计的相对分子质量为27 190。其对应基因组DNA序列由3个外显子(1～302 bp,401～772 bp,1 615～1 897 bp)和2个内含子(303～400 bp,773～1 614 bp)组成。通过PSORT进行亚细胞定位分析发现PbCPI蛋白位于内质网上。PbCPI基因编码的多肽具有植物CPI产生抑制活性所必需的一级结构:2个甘氨酸残基(Gly46-Gly47)、假定的反应域QXVXG(Q90-V91-V92-A93-G94)和A/PW基序(P120-W121);并包含植物CPI家族高度保守的特征序列模式LARFAVQEHN、QVVAG和YQAKVWVKPW。进化树分析表明PbCPI和蔷薇科植物CPI蛋白位于分子进化树的同一发育分支上,并且与苹果MdCPI(AAO19652)蛋白具有较高的一致性(95.92%)。杜梨叶片中PbCPI为诱导型表达,高温(30℃)、低温(4℃)、NaCl、机械损伤、MeJA或ABA处理4 h后其表达量明显上调,即其对温度胁迫、盐碱、机械损伤和外源激素处理均存在转录响应,这表明该基因参与了杜梨对生物或非生物胁迫的防御机制。
- 李慧丛郁常有宏蔺经盛宝龙
- 关键词：杜梨半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因克隆
- 镉对草莓幼苗根尖氧化系统和基因组DNA损伤的影响被引量：17
- 2010年
- 采用随机扩增多态性DNA（RAPD）技术和生理生化方法检测镉胁迫对草莓幼苗根尖氧化系统和DNA多态性的影响。结果表明,用5、10和15mg·L^-1镉（CdCl2·2.5H2O）处理6d后,草莓幼苗根伸长及根系中可溶性蛋白质含量均受到抑制,根尖活性氧爆发（超氧阴离子产生速率升高和过氧化氢含量增加）,超氧化物歧化酶、过氧化物酶和过氧化氢酶活性下降,DNA增色效应减少。选用8条寡核苷酸引物（10bp）对草莓幼苗根尖细胞中基因组DNA进行RAPD扩增,对照组图谱中可分辨出88条RAPD谱带,其分子量为150-3500bp,处理组与对照组RAPD图谱之间存在明显差异,且与镉浓度之间存在剂量效应关系。镉影响草莓幼苗根尖细胞中基因组模板的稳定性,活性氧爆发和DNA交联是根尖DNA损伤的主要原因,利用RAPD技术获得的DNA多态性变化可作为检测草莓根尖DNA损伤的指标。
- 李慧丛郁王宏伟常有宏盛宝龙蔺经王中华
- 关键词：镉胁迫活性氧抗氧化酶系统DNA多态性
- 豆梨植物络合素合酶PcPCS1基因克隆及其表达分析被引量：13
- 2010年
- 以梨砧木豆梨(Pyrus calleryana Dcne.)为试材,克隆其植物络合素合酶基因(PcPCS1)的cDNA全长序列,并研究该基因的表达特点。结果表明PcPCS1 cDNA序列长度为1970bp,编码497个氨基酸,推导的氨基酸序列由两个典型的植物络合素亚家族结构域组成,具有3个相邻的Cys-Cys元件(331-332、351-352和369-370位氨基酸)和植物络合素合酶蛋白的特征位点(Cys-56、Cys-90/91和Cys-109)。它与豆科植物的PCS1蛋白处于系统发生树的同一分支,且与百脉根LjPCS1蛋白的同源性最高(84%)。荧光定量RT-PCR分析结果显示:PcPCS1基因为组成型表达,各器官表达量存在差异,在20μmol·L-1CdSO4胁迫条件下,其表达量迅速上升,并且在豆梨叶中的表达量高于根;不同重金属离子对其上调表达的诱导能力为Cd2+>Zn2+>Cu2+。200μmol·L-1γ–谷氨酰半胱氨酸合成酶抑制剂丁胱亚磺酰亚胺能够显著抑制该基因的表达,补充200μmol·L-1谷胱甘肽后,其相对表达量恢复或超过单一重金属离子处理的表达水平,即豆梨植物络合素以谷胱甘肽为底物,通过γ–谷氨酰半胱氨酸合成酶途经合成。
- 李慧丛郁王宏伟盛宝龙蔺经常有宏
- 关键词：豆梨基因克隆丁胱亚磺酰亚胺
