国家教育部博士点基金(20100001110046)
- 作品数：6 被引量：8H指数：2
- 相关作者：张宏权战军牛苗苗唐岩马博更多>>
- 相关机构：北京大学深圳市康道生物有限公司第三军医大学更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金北京市与中央在京高校共建项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 灵芝孢子油及灵芝提取物孢子油对乳腺癌血管生成调节因子的作用被引量：5
- 2014年
- 目的探讨灵芝孢子油及灵芝提取物孢子油对人源高恶性乳腺癌血管生成调节因子的作用。方法不同剂量的灵芝孢子油、灵芝提取物孢子油分别刺激体外培养的人源高恶性乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞及MDA-MB-231细胞制作的荷廇小鼠,Western blotting检测表皮生长因子受体(EGFR)的蛋白表达变化,Real-time PCR检测肿瘤血管生成相关因子EGFR、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶(MMPs)、血小板反应素-1(TSP-1)、血小板衍生因子(PDGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)转录水平的基因表达变化。结果灵芝孢子油、灵芝提取物孢子油均可在体内和体外抑制人源高恶性乳腺癌细胞MDA-MB-231的EGFR蛋白表达,且有剂量依赖性;均可在体内和体外抑制VEGF RNA表达,增强血管生成抑制因子TSP-1 RNA表达;灵芝提取物孢子油比灵芝孢子油的作用更为显著。结论灵芝孢子油、灵芝提取物孢子油均有抑制肿瘤血管生成因子表达和促进血管生成抑制因子表达的作用,其中灵芝提取物孢子油比灵芝孢子油的作用更为显著。
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- 关键词：灵芝孢子油表皮生长因子受体血管内皮生长因子血小板反应素-1免疫印迹法
- 肿瘤细胞成瘤模型的建立与制片的体会
- 2013年
- 裸鼠体内成瘤实验是检验肿瘤细胞系成瘤能力的金标准，通过培养肿瘤细胞株建立裸鼠荷瘤模型是研究肿瘤生长、转移生物学特性及其分子调控机制，以及寻找治疗新药、新方法的重要手段。目前用于建立模型的肿瘤细胞株种类较多，如大肠癌、胃癌、宫颈癌、黑色素瘤、卵巢癌、肺癌、乳腺癌、肾癌、鼻咽癌，但对不同成瘤模型的建立、成瘤特点、取材、固定及制片应注意的细节等报道较少。
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- 关键词：肿瘤细胞系成瘤能力制片肿瘤细胞株分子调控机制生物学特性
- 细胞分选蛋白17多克隆抗体的制备和鉴定及在小鼠体内的表达
- 2012年
- 目的制备细胞分选蛋白家族成员细胞分选蛋白17(SNX17)的多克隆抗体,为深入研究SNX17奠定基础。方法 PCR扩增编码人SNX17C端270个氨基酸的cDNA片段,DNA重组入原核表达载体pGEX-4T-1和pMal-C2x,转化大肠杆菌BL-21(DE3)菌株,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导分别表达GST-SNX17C端和MBP-SNX17C端融合蛋白。采用电泳纯化的GST-SNX17C端融合蛋白于第1天,第28天,第42天3次免疫新西兰白兔。采用亲和层析和分子筛纯化的MBP-SNX17C端融合蛋白,酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清中多克隆抗体的效价,于第56天取兔全血,析出血清,纯化IgG。免疫印迹法检测SNX17兔多克隆抗体的有效性和特异性,免疫印迹法检测小鼠30种器官中SNX17的表达。结果成功构建了pGEX-4T-1/SNX17C端和pMal-C2x/SNX17C端的表达质粒,成功诱导表达纯化了GST-SNX17C端和MBP-SNX17C端融合蛋白,纯化后的IgG可识别COS-7细胞中外源转入的GFP-SNX17,并与GFP抗体识别的条带在同一位置上,通过SNX17C端多克隆抗体检测了SNX17在小鼠子宫、卵巢和乳腺中表达高而在睾丸、前列腺和输精管中表达低。结论成功制备特异而有效的兔抗人SNX17C端多克隆抗体,此抗体可用于免疫印迹法分析,初步确定了SNX17在小鼠器官中的表达谱。
- 程媛牛苗苗马博唐岩李枫战军
- 关键词：多克隆抗体免疫印迹法小鼠新西兰大白兔
- 人同源异形盒基因HOXB9多克隆抗体的制备和活性鉴定
- 2013年
- 目的制备兔抗人同源异形盒基因HOXB9的多克隆抗体,为后续深入研究HOXB9蛋白的功能提供工具。方法采用聚合酶链反应(PCR)和DNA重组技术,构建HOXB9基因5'端7-458碱基片段到原核表达载体pGEX-4T-1和pMal-C2x中,热休克法转化及异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷诱导表达谷胱甘肽转移酶标签的HOXB9 N端融合蛋白和麦芽糖结合蛋白标签的HOXB9 N端融合蛋白。纯化GST-HOXB9 N端融合蛋白免疫新西兰白兔,ELISA鉴定效价后,颈动脉放血,收集血清,纯化抗体。免疫印迹法及免疫沉淀法鉴定抗体有效性及特异性。结果本实验制备的抗体能够特异识别目标分子的单一条带,并且具有较强的免疫沉淀天然构象的HOXB9蛋白的能力;采用所制备的抗体检测发现,HOXB9蛋白在小鼠免疫器官、胰脏、结肠、肺、小脑、雌性生殖系统及睾丸中表达较高,其他器官表达较低或无表达。结论成功制备了特异而有效的兔抗人HOXB9蛋白多克隆抗体,此多克隆抗体可用于免疫印迹法分析及免疫沉淀实验。
- 牛苗苗马博唐岩李枫战军张宏权
- 关键词：多克隆抗体免疫印迹法新西兰白兔
- kindlin-1在人牙龈上皮的分布特点及其临床意义
- 2013年
- 目的探讨kindlin-1在人健康牙龈上皮与慢性炎症性牙龈上皮分布特点的差异,从而建立kindlin-1与牙周疾病的临床相关性。方法应用免疫组织化学和免疫印迹法,分别检测10例正常牙龈上皮以及8例慢性炎症性牙龈上皮中kindlin-1的分布。结果免疫组织化学结果显示,kindlin-1在正常牙龈上皮中主要分布于基底层细胞与上层颗粒层细胞,且在颗粒层细胞胞质中表达呈强阳性,而在基底上层细胞核内散在出现弱阳性表达;同时,kindlin-1在牙龈沟内上皮的表达明显高于游离龈上皮(P<0.05);慢性炎症性牙龈上皮中kindlin-1较正常牙龈上皮分布更加广泛,表达也增强(P<0.05)。免疫印迹的结果进一步证实慢性炎症性牙龈的kindlin-1表达较正常牙龈上皮更加强烈(P<0.05)。结论 Kindlin-1在人牙龈上皮中的分布和表达与牙龈上皮分化和炎症状态均密切相关。
- 谢婷婷梅芳钟金晟唐岩张宏权
- 关键词：牙龈上皮免疫印迹法
- LGR5在肝癌细胞及肝癌组织中的表达及意义被引量：3
- 2011年
- 目的探讨LGR5在4个肝癌细胞系、癌旁组织及肝癌组织中的表达,及在肝癌中的作用。方法免疫印迹法及实时定量RT-PCR检测正常细胞和4种肝癌细胞中LGR5的表达;采用免疫组织化学检测36例肝癌及癌旁组织中LGR5及β-catenin的表达;利用免疫细胞化学检测HepG2细胞中LGR5的表达。结果免疫印迹法及实时定量RT-PCR证实,与正常肝脏细胞相比,LGR5除了在HepG2细胞中等表达外,在另外3种肝癌细胞Hep3B、Huh7、PLC中呈弱表达或不表达(P<0.05),免疫细胞化学结果进一步证实LGR5在HepG2细胞膜上表达。免疫组织化学结果显示,与癌旁组织相比,LGR5在肝癌组织中表达明显减少,而β-catenin的表达显著增加。结论与正常肝脏细胞及癌旁组织相比,LGR5在多种肝癌细胞及肝癌组织中的表达明显减少。
- 宋竹雯魏潇凡高建超白莉张宏权
- 关键词：LGR5肝癌免疫印迹法
