国家自然科学基金(30370070)
- 作品数：8 被引量：25H指数：3
- 相关作者：端青朱虹何君檀华何诚更多>>
- 相关机构：军事医学科学院中国农业大学中央民族大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技攻关计划北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 猪流产衣原体CP/12株omp-1基因的克隆与表达被引量：4
- 2005年
- 为观察重组MOMP蛋白的免疫活性,揭示omp1基因(编码MOMP蛋白)在猪流产衣原体诊断和防治中的作用,用PCR法扩增猪流产衣原体omp1基因,将特异性扩增片段克隆入pMD18T载体,测序比较分析序列后确认为目的基因,与GenBank中4株流产衣原体omp1基因和氨基酸序列的相似性均达99%,与其他各型衣原体代表株的相似性为71%～88%,氨基酸序列也有较大差异。将omp1基因亚克隆到pET32a表达载体上,再对重组表达载体转化BL21(DE3)表达宿主菌,以IPTG诱导该重组菌,结果显示该重组菌表达了融合蛋白;用猪流产衣原体多克隆抗体对表达的重组MOMP蛋白进行Westernblot试验,结果显示该重组MOMP蛋白具有结合特异性抗体的活性。
- 杨琪何诚雷鸣杨利朱虹端青
- 关键词：主要外膜蛋白克隆
- 鹦鹉热衣原体HSP60基因克隆及其表达产物抗原性的实验研究被引量：1
- 2006年
- 目的验证新获得的鹦鹉热衣原体HSP60基因在E.coli中高效表达的产物是否具有足够的抗原活性,为进一步研究其在鹦鹉热衣原体感染检测上的应用奠定基础。方法根据GenBank鹦鹉热衣原体Hsp60基因序列X51404,设计一对特异性引物,扩增了鹦鹉热衣原体HSP60全长基因,克隆入pET32a(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,利用IPTG诱导获得高效表达。结果扩增了鹦鹉热衣原体HSP60全长基因,表达产物分子量约为68kD,经Western blotting和胶体金免疫层析技术检测,表明表达产物具有较好的抗原性。结论扩增了鹦鹉热衣原体HSP60全长基因,并对其表达产物的抗原性进行免疫印记分析和免疫层析初步检测,表明具有较好的抗原性,为进一步研究其在鹦鹉热衣原体感染检测上的意义打下了基础。
- 裴杰萍朱虹何君檀华张美玲端青
- 关键词：鹦鹉热衣原体HSP60克隆
- 鹦鹉热衣原体重组主要外膜蛋白免疫肉鸡效果观察被引量：12
- 2004年
- 利用鹦鹉热衣原体重组主要外膜蛋白 (MOMP)在大肠杆菌中的表达产物 ,纯化后与白油佐剂乳化成疫苗。对 3批疫苗物理性状、无菌试验、安全试验、最小保护剂量、效力检验、免疫期、保存期和田间试验等各项技术指标进行了测定。重组MOMP疫苗为乳白色油包水型疫苗 ,黏度为 8s·0 4mL-1;细菌培养阴性 ;10d肉鸡分别以5 0和 10 0 μg注射免疫后 ,观察 14d ,免疫鸡群除一过性发蔫外 ,临床采食、饮水 ,注射部位剖检无异常变化 ;以 2 5 ,5 0 ,10 0和 2 0 0 μg分别免疫肉鸡后 ,30d龄攻毒 ,发现 5 0 μg免疫组可以抵抗病原的攻击 ;选择每只 5 0 μg免疫肉鸡 ,分别在 4 0 ,5 0和 6 0d攻毒 ,其保护率分别为 94 % ,95 %和 84 %。疫苗 2～ 8℃可储存 2 4 0d ,室温 ( 2 1～ 2 5℃ )、37℃不要超过 30d ;利用本疫苗免疫肉鸡 4 0 0 0 0只 ,保护率达 93% ,对照组为 85 %。本疫苗安全性高、保护率高、无副作用 ,能有效控制鹦鹉热衣原体的侵害。
- 何诚朱虹王传武何君张浩杰檀华端青
- 关键词：鹦鹉热衣原体重组疫苗主要外膜蛋白肉鸡基因工程疫苗免疫效果
- 鹦鹉热衣原体重组主要外膜蛋白诱导肉鸡免疫应答观察被引量：1
- 2004年
- 用鹦鹉热衣原体 (Chlamydiapsittaci,Cps)重组主要外膜蛋白 (RecombinentMajorOuter Membraneprotein ,r MOMP)制作成油佐剂疫苗 ,经颈部皮下免疫 5d肉鸡。在免疫前 1d、免疫后 14d、2 1d和 30d分别翅静脉采血 ,以常规血凝抑制试验检测抗体效价 ;用MTT法检测全血淋巴细胞对r MOMP的特异性增殖反应 ;免疫 30d使用鹦鹉热衣原体强毒株(BJF5株 )攻毒 ,观察临床症状 ,计算病变程度和保护率。结果表明免疫 14d后产生抗体 ,效价达 4 .2 (log2 ) ,免疫后 30d效价达到 5 .0 (log2 ) ;免疫组血液T淋巴细胞对r MOMP的增殖指数明显高于对照组 (P <0 .0 5 )。试验表明r MOMP在肉鸡体内可诱导对Cps特异性的体液免疫和细胞免疫应答 ,并能抵抗Cps强毒的攻击 ,显示r MOMP免疫肉鸡具有良好的免疫原性和保护性。
- 郝永新何诚赵德明武艳朱虹端青
- 关键词：鹦鹉热衣原体肉鸡免疫应答
- 猪流产嗜性衣原体omp-1基因的重组质粒与重组蛋白免疫组合效果被引量：3
- 2007年
- 为增强猪流产嗜性衣原体omp-1基因的免疫措施进而筛选出高效新型分子疫苗,本实验将猪流产嗜性衣原体omp-1基因克隆入pcDNA3.1(+)载体构建DNA疫苗,初次和二次免疫分别以核酸/重组蛋白(DNA/r-MOMP)、重组蛋白/核酸(r-MOMP/DNA)、重组蛋白+核酸/重组蛋白+核酸(r-MOMP+DNA/r-MOMP+DNA)、核酸+核酸(DNA/DNA)和重组蛋白+重组蛋白(r-MOMP/r-MOMP)5种组合接种BALB/c小鼠,同时以载体和弱毒为对照。二次免疫后14 d以ELISA和T淋巴细胞增殖实验检测特异性体液免疫和细胞免疫应答水平。结果显示核酸与重组蛋白同时免疫可以诱导产生较高的体液免疫和细胞免疫水平,而DNA/r-MOMP组合的细胞免疫和体液免疫水平高于r-MOMP/DNA组合,单独免疫DNA组或r-MOMP都不能获得好的细胞和体液免疫。
- 杨琪李建平杨建民李军杨利何诚
- 关键词：重组质粒重组蛋白免疫小鼠
- 支原体肺炎快速诊断试纸的研制及初步应用被引量：2
- 2006年
- 目的研制支原体肺炎免疫胶体金法快速诊断试纸,用于支原体肺炎血清抗体的检测,以诊断肺炎支原体感染。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,并标记金黄色葡萄球菌蛋白A；用支原体肺炎可溶性蛋白抗原致敏硝酸纤维素膜；组装成免疫色层析法诊断试纸,用于临床血清标本检测。结果用该试纸检测了88份肺炎患者血清标本和80份正常人血清标本,结果与两个国外公司、一个国内公司生产的ELISA血清学实验结果一致。结论该诊断试纸具有较好的特异性和敏感性,简便快速,适合基层单位使用。
- 张美玲檀华朱虹何君端青
- 关键词：肺炎支原体支原体肺炎胶体金免疫层析技术
- 支原体肺炎快速诊断试纸的研制及初步应用被引量：3
- 2008年
- 目的研制支原体肺炎免疫胶体金法快速诊断试纸,用于支原体肺炎血清抗体的检测,从而诊断肺炎支原体感染。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,并标记金黄色葡萄球菌蛋白A;用支原体肺炎可溶性蛋白抗原致敏硝酸纤维素膜;组装成免疫层析法诊断试纸,用于临床血清标本检测。结果用该试纸检测了88份肺炎血清标本,与两家国外公司、1家国内公司生产的ELISA血清学实验结果一致。结论该试纸具有较好的特异性和敏感性,并且更简便快速,适合基层单位使用等特点。
- 张美玲檀华朱虹何君端青李艳
- 关键词：肺炎支原体支原体肺炎胶体金免疫层析技术
- 免疫胶体金法提取环境标本中细菌DNA技术被引量：1
- 2005年
- 将抗DNA单克隆抗体标记在胶体金颗粒上制成免疫胶体金试剂,提取标本中DNA,直接用于PCR检测,从而建立一种简单、快速、高效的免疫胶体金方法提取环境标本中的DNA。结果表明:应用免疫胶体金试剂可有效去除环境标本中PCR抑制剂,浓缩模板,提高PCR检测敏感度3～4个数量级。操作步骤简单,无需使用有机溶剂,避免环境污染,吸附了DNA的免疫胶体金可直接用于PCR扩增。研制了免疫胶体金试剂并确定其最佳反应条件,有效提高PCR技术在检测现场环境标本中的敏感性和实用性。
- 裴杰萍何君檀华朱虹端青
- 关键词：DNA提取PCR
