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CDR3导向抗体库法人源化抗膀胱癌Fab的鉴定: 2008年; 目的:对通过CDR3导向抗体库法筛选到的3株人源化膀胱癌噬菌体抗体进行进一步分析鉴定。方法:用ELISA方法对筛选特异性克隆进行特异性鉴定、抗原表位的核实;采用硫氰酸盐洗脱ELISA法评估其亲和力;选用活性较高的克隆进行膀胱癌组织的免疫组化实验。结果:3株阳性克隆可溶性表达后能够与膀胱癌EJ细胞特异性结合;与鼠源噬菌体抗体(BDI)相比,2株克隆的亲和指数比较低,均为0.25mol/L,1株克隆的亲和指数为0.7mol/L,略低于鼠源的亲和指数(0.9mol/L)的水平。选择活性较高的克隆进行膀胱癌组织的免疫组化实验,显示该克隆能够与癌组织特异性结合。结论:用CDR3导向库法获得的人源抗体片段基本保持了原鼠源单克隆抗体(mAb)BDI的特性。; 周丽君王欲晓王琰; 关键词：噬菌体抗体库

抗TNF-α人单链抗体的分离纯化及鉴定被引量：2: 2008年; 目的对通过大容量抗体库中筛选到的4株抗TNF-人单链抗体进行分离纯化及鉴定。方法采用硫氰酸盐洗脱ELISA法评估阳性克隆的亲和力;亲和层析柱纯化抗体;通过ELISA检测抗体的特异性结合活性;用L929细胞检测其体外中和TNF-α的活性。结果用硫氰酸盐洗脱法测定4个噬菌体抗体的相对亲和力与其相应的可溶性抗体相对亲和力相一致;SDS-PAGE电泳结果表明,单链抗体得到成功纯化;ELISA结果表明,纯化的抗体能够特异性结合人TNF-α;体外中和试验证明筛选到的单链抗体能中和TNF-α对L929细胞的毒性。结论从人源大容量噬菌体抗体库中能够筛选到具有中和活性的抗TNF-α人单链抗体。; 王欲晓周丽君王大鹏乔媛媛王琰; 关键词：单链抗体纯化

从大容量抗体库中筛选抗TNF-α人单链抗体被引量：9: 2008年; 目的:从天然的单链大容量噬菌体抗体库中筛选特异性的抗TNF-α的人单链抗体(scFv)。方法:以TNF-α为抗原,通过"吸附-洗脱-扩增"过程从大容量抗体库中筛选特异性抗体,对其抗原结合活性和序列进行分析鉴定。结果:经过4轮筛选,获得62个与TNF-α结合的阳性克隆,其中27个特异性结合的克隆,指纹分析有7种不同的可变区片段;其中5种获得可溶性表达;基因序列分析表明其轻重链分属VλⅠ和VHⅣ亚群。结论:利用单链大容量抗体库技术可以不经免疫制备获得特异性抗TNF-α的scFv,为今后的研究和应用提供依据。; 王欲晓乔媛媛周丽君王琰; 关键词：TNF-Α 噬菌体抗体

通过随机突变提高抗TNF-α单链抗体的亲和力被引量：5: 2005年; 目的:提高抗TNFα单链抗体(scFv)的亲和力。方法:应用错配PCR技术在抗TNFαscFv基因中引入随机突变,再通过DNA交换(shuffling)使引入的点突变进一步重排组合,构建突变噬菌体抗体库。采用硫氰酸盐洗脱法对抗体库进行淘筛。挑选活性得到改良的克隆,用斑点ELISA法及硫氰酸盐洗脱ELISA法评估其亲和力的改善。结果:对PCR错配的突变库筛选未得到亲和力明显改善的抗体变种,经DNA交换进一步构建变种库后,筛选获得1个亲和力提高的克隆,其相对亲和指数为1.37mol/L,较亲本抗体的相对亲和指数0.48mol/L有明显提高。结论:通过错配PCR和DNA交换引入随机突变构建抗体库,可有效地提高scFv的亲和力。; 汪保安陈晓穗王欲晓曲佳周丽君王琰

CDR3突变提高抗TNF-αFab段的亲和力被引量：5: 2005年; 目的通过抗体库技术在CDR3区引入限定性突变以提高抗TNF-α抗体Fab的亲和力.方法首先合成含CDR3区突变的寡核苷酸,限定突变率以保持50%～70%的亲本序列,通过重叠延伸PCR的方法引入突变,构建突变库,再以硫氰酸铵溶液作洗涤液,筛选亲和力得到提高的特异性克隆,用非竞争性ELISA法测定亲和常数.结果从轻链突变库中筛选得到1个活性提高的特异性克隆K8,在第93位发生N→R突变,其亲和常数为2.8×108 L/mol,较亲本抗体(0.1×108 L/mol)提高了近28倍;从重链突变库中筛选得到多个活性增高的克隆,部分克隆测序显示96、97和100 d位置发生R→K、Y→Q、M→L突变的几率最高,且对亲和力提高贡献大.测定了10个变种的亲和常数,分别为0.2×108、0.22×108、1.8×108、3.2×108、3.3×108、3.5×108、3.7×108、4.0×108、 6.3×108和6.5×108 L/mol,最大的提高了近65倍.结论 CDR3区的限定性突变可显著提高抗体亲和力.; 汪保安陈晓穗王琰王欲晓曲佳周丽君; 关键词：肿瘤坏死因子Α

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