浙江省医药卫生科学研究基金(2009A047)
- 作品数：6 被引量：32H指数：3
- 相关作者：严力行朱发明吕杭军和艳敏何俊俊更多>>
- 相关机构：浙江省血液中心更多>>
- 发文基金：浙江省医药卫生科学研究基金浙江省卫生高层次创新人才培养工程项目国家自然科学基金更多>>
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- ABO血型新等位基因O61的分子生物学研究被引量：6
- 2010年
- 本研究探讨ABO新等位基因O61的分子机制。利用单克隆抗体检测标本红细胞ABO血型抗原,标准A、B、O红细胞检测标本血清中的ABO抗体。采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术扩增ABO基因的第5至7外显子序列,PCR产物经双酶切后直接测序分析6和7外显子。1例B表型标本采用基因组单链抽提技术分离杂合基因型标本的2条单体型,对分离的单体型扩增后进行ABO基因测序分析。结果表明,在417例标本中发现3个标本743位碱基发生突变,其中2例表型为O型,1例为B型。2例O型直接测序分析显示,6和7外显子有261G缺失及743G/C杂合。1例B型直接测序结果为261G/缺失及297A/G、526C/G、743G/C、657C/T、703G/A、796C/A、803G/C、930G/A杂合。采用基因组单链抽提技术将B型标本的两条单体型进行分离,对分离的单体型扩增后进行ABO基因测序分析,结果显示,2条链分别为B101和突变的O型。将突变的新O型基因提交血型抗原基因突变数据库,被正式命名为O61。结论:ABO基因7号外显子743G>C为1个新的突变点,发现1个ABO新等位基因O61。
- 陶苏丹和艳敏应燕玲洪小珍许先国朱发明吕杭军严力行
- 关键词：ABO基因测序
- HLA-B新等位基因B＊9534的测序分析及其单链扩增技术的建立
- 2010年
- 目的分析HLA—B新等位基因HLA—B＊9534的核苷酸序列，并建立HLA—B＊9534单链扩增技术。方法采用商品化快速抽提试剂盒抽提标本基因组DNA，采用PCR技术扩增先证者HLA-B基因的第1—8外显子序列，PCR产物经双酶切后直接测序分析第2、3、4外显子。应用序列特异性引物PCR建立HLA-B＊9534单链扩增技术，获得HLA—B＊9534等位基因的单链产物，并对单链产物进行第2、3、4外显子测序分析。结果先证者标本存在2个HLA—B等位基因，直接测序结果经软件分析显示与最接近的HLA—B＊1518和B＊4601组合存在1个碱基不匹配，即第593位A／G杂合。单链扩增技术将先证者等位基因分离后，测序得到两个等位基因为HLA—B＊4601和HLA—B＊9534。与最接近的HLA—B＊1518的第2—4外显子序列相比，HLA—B＊9534仅在第3外显子存在一个碱基的不同，即第593位A→G的改变，导致第174位氨基酸天冬酰胺改变为丝氨酸，该等位基因序列已递交GenBank（EU046491），并经世界卫生组织HLA命名委员会正式命名为HLA-B＊9534。结论发现一个新的HLA—B＊9534等位基因，建立的HLA—B＊9534单链扩增技术是可行的。
- 何俊俊章伟王炜韩浙东和艳敏朱发明严力行
- 关键词：人类白细胞抗原测序分析聚合酶链反应
- 人类白细胞抗原A和C座位基因重组二个家系分析被引量：3
- 2011年
- 目的探讨2个家系人类白细胞抗原（humanleukocyteantigen，HLA）座位的重组情况。方法采用聚合酶链反应一序列特异寡核苷酸探针技术检测2个家系成员HLA—A、-C、-B、-DRB1和-DQB1位点，应用测序分型方法进行HLA高分辨基因分型，然后通过家系遗传分析确定HLA基因重组相关位点，检测短串联重复序列位点确定其家系成员亲权关系。结果2个家系HLA单倍型的重组发生在HLA—A和C位点之间，家系调查显示1例为父源、1例为母源HLA单倍型发生了交换后遗传给子代，短串联重复序列结果证实2个家系成员内具有高度的亲权关系。结论发现了2个中国汉族人群HLA—A和C基因座位间的基因重组家系，为深入研究HLA的重组机制提供了基础。
- 王炜韩浙东陈男英何俊俊章伟朱发明吕杭军严力行
- 关键词：人类白细胞抗原基因重组家系分析
- 一例ABO亚型ABx09的撒物学研究和鉴定被引量：20
- 2011年
- 目的研究1例ABO亚型ABx09的分子机制。方法应用单克隆抗体检测先证者红细胞AB0血型抗原，标准A、B、0红细胞检测先证者血清中的ABO抗体，采用聚合酶链反应（polymerase chainrea ction，PCR）技术分别扩增先证者ABO基因的第1～7外显子序列，PCR产物经酶切后直接测序分析。第5～7外显子扩增产物经TOPOTA克隆到质粒载体中获得单链，对所得克隆进行AB0基因第5～7外显子双向测序分析。家系调查采集先证者父母的标本进行血型血清学实验和ABO基因第6和7外显子直接测序分析。结果先证者红细胞有A、B抗原，同时血清中存在抗B抗体。直接测序分析发现第6外显子第261位无缺失、第297位AG，第7外显子467CT、526CG、657CT、703GA、796CA、803GC、889GA、930GA杂合，可指定为A102Bx09基因型。克隆测序得到两个等位基因A102和Bx09。与B101序列相比，Bx09第889位G—A，导致第297位谷氨酸变成赖氨酸。家系调查显示先证者Bx09等位基因从母亲遗传所得。结论α-1，3-半乳糖基转移酶基因第889位G—A突变导致产生Bx09表型，其血清中可含有抗B抗体。
- 洪小珍应燕玲许先国马开荣兰小飞刘瑛朱发明吕杭军严力行
- 关键词：ABO基因抗B抗体
- 人类白细胞抗原-DRB1第3外显子单链测序方法的建立及其多态性分析被引量：2
- 2010年
- 目的 建立人类白细胞抗原（human leukocyte antigen,HLA）-DRB1第3外显子单链测序方法,并分析其多态性.方法 采用组特异性引物扩增HLA-DRB1第2和3外显子序列,扩增产物经双酶切后进行双向测序分析,采用Assign 3.5 SBT分析软件指定等位基因型.结果 PCR产物经直接测序后得到清晰的序列冬,并向IMGT/HLA数据库提交了HLA-DRB1＊08：09和DRB1＊12：02：01第3外显子全部序列.在检测的25个等位基因中,HLA-DRB1第3外显子全长序列中存在27个单核苷酸多态性位点,占第3外显子序列碱基总数的9.56%.建立的方法可有效区分HLA-DRB1＊14∶01∶01/14∶54歧义标本,证实中国人群中存在HLA-DRB1＊14∶01∶01.结论 本实验建立的HLA-DRB1第3外显子测序方法是可行的,HLA-DRB1第3外显子存在多态性.
- 朱发明和艳敏陶苏丹章伟王炜何俊俊吕杭军严力行
- 关键词：人类白细胞抗原-DRB1测序分析遗传多态性
- PCR-SBT检测HLA-C座位1-7外显子序列鉴别HLA-C＊07：01：01G和C＊07：02：01G组等位基因被引量：1
- 2012年
- 本研究旨在探讨区分人类白细胞抗原(HLA)-C*07:01:01G和HLA-C*07:02:01G组内等位基因,并分析其与HLA-B的连锁情况。通过收集HLA-C*07:01:01G组和HLA-C*07:02:01G组标本,采用聚合酶链反应测序分析方法(PCR-SBT)检测HLA-C座位第1-7外显子编码序列,并采用PCR-SBT方法对标本进行HLA-B基因分型。结果表明,13例HLA-C*07:01:01G组标本中,4例(30.8%)标本为HLA-C*07:01:01,9例(69.2%)标本为HLA-C*07:06;连锁分析显示,HLA-C*07:06与HLA-B*44:03高度连锁。102例HLA-C*07:02:01G组标本全部为HLA-C*07:02:01;连锁分析显示,HLA-C*07:02:01与HLA-B*51:01、B*46:01、B*39:01、B*40:01、B*38:02、B*15:02高度连锁。结论:HLA-C*07:01:01G组中发现存在HLA-C*07:01:01和HLA-C*07:06,而HLA-C*07:02:01G组中以HLA-C*07:02:01为主导。
- 吕杭军章伟何俊俊和艳敏王炜韩浙东陈男英朱发明严力行
