新疆维吾尔自治区自然科学基金(200821132)
- 作品数：5 被引量：16H指数：4
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- 相关机构：新疆医科大学第一附属医院新疆医科大学更多>>
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- 细粒棘球蚴重组抗原B诱导小鼠骨髓源树突状细胞表达吲哚胺2,3-双加氧酶的研究被引量：7
- 2011年
- 目的观察细粒棘球蚴重组抗原B(rAgB)体外诱导小鼠骨髓源树突状细胞表达吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的情况。方法从小鼠股骨中分离出骨髓细胞,进行小鼠重组巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)的诱导,培养并获得CD11c+树突状细胞。应用倒置显微镜和扫描电镜观察树突状细胞形态,采用流式细胞术检测其表面标志物;用混合淋巴细胞反应(MLR)观察树突状细胞对T淋巴细胞的增殖能力。培养至第6天,收集未成熟树突状细胞进行流式细胞术检测;另向部分未成熟树突状细胞中加脂多糖(LPS)刺激24 h后,收集成熟树突状细胞,进行流式细胞术检测。在获得的未成熟树突状细胞中分别加入RPMI 1640完全培养液(为阴性对照组)、重组小鼠γ干扰素(rmIFN-γ,1 000 U/ml,为IFN-γ组)和rAgB(终浓度15μg/ml,为rAgB组),培养24 h后,通过细胞免疫组织化学和蛋白质印迹(Western blot-ting)检测各组树突状细胞IDO的表达情况。结果获得纯度为80%的CD11c+树突状细胞,在倒置显微镜和扫描电镜下均观察到典型树突状细胞。经LPS刺激的成熟树突状细胞的CD40、CD80和主要组织相容性复合体(MHC)Ⅱ类分子I-A/I-E的阳性表达率与未成熟树突状细胞的相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。MLR结果显示,诱导形成的树突状细胞具有刺激T淋巴细胞增殖的能力。细胞免疫组织化学方法检测结果显示,阴性对照组、阳性对照组和rAgB组的IDO阳性表达率分别为(4.544±1.752)%、(20.464±4.452)%和(11.148±1.966)%,3组间的差异均有统计学意义(均P<0.05)。Western blotting结果表明,3组IDO蛋白与相应甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)蛋白的灰度值之比分别为(0.229±0.085)、(0.794±0.114)和(0.573±0.129),其中rAgB组与阴性对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),与IFN-γ组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论细粒棘球蚴重组抗原B在体外具有诱导树突状细胞表达吲哚胺2,3-双加氧酶的功
- 单骄宇纪卫政吐尔洪江.吐逊李亮张传山林仁勇温浩
- 关键词：树突状细胞吲哚胺2,3-双加氧酶免疫耐受
- 人外周血树突状细胞体外稳定培养方法的建立及与磁珠法的比较被引量：1
- 2010年
- 目的 建立一种稳定的人外周血树突状细胞（DCs）体外培养的方法,并与磁珠分选法进行比较.方法 通过密度梯度离心法分离出志愿者的外周血单个核细胞（PBMC）,再分别应用磁珠分选法、贴壁法对PBMC进行培养,应用重组人集落刺激因子（rhGM-CSF）、重组人白细胞介素-4（rhIL-4）诱导获得DCs.倒置显微镜观察细胞形态变化,并分别在第3、5、6天用台盼蓝染色法进行细胞活力检测;经过1、2、5 h的贴壁培养后,应用流式细胞仪检测单核细胞表面CD14、CD1a、HLA-DR的表达以确定最佳贴壁时间;经人重组细胞因子诱导培养后,对所获得的细胞检测CD14、CD1a、CD86、CD83、HLA-DR的表达.采用同种混合淋巴细胞反应,评价DCs刺激T淋巴细胞增殖的能力.结果 经贴壁2 h后诱导培养的DCs形态较典型.磁珠分选法获得的DCs第5、6天细胞活力[（53.333±5.774）%、（38.333±7.638）%]明显低于第3天[（68.667±3.215）%,P均＜0.05];贴壁培养法获得的DCs第3、5、6天的细胞活力[（92.667±3.055）%、（94.000±1.000）%和（94.667±1.528）%]比较,差异无统计学意义（F=0.737,P＞0.05）;贴壁培养法获得的DCs第3、5、6天细胞活力均高于磁珠分选法（t值分别为9.374、12.021、12.527,P均＜0.05）.PBMC经磁珠分选前后CD14的阳性表达率分别为（32.457±12.351）%、（41.914±14.858）%,二者比较差异无统计学意义（t=1.295,P＞0.05）.单核细胞表面CD14的阳性表达率在培养2 h时[（35.267±4.658）%]高于培养1、5 h时[（15.033±6.189）%、（21.233±4.895）%,P均＜0.05].培养第6天,DCs表面CD14的阳性表达率[（2.200±1.356）%]较第1天[（32.328±14.517）%]明显下降（t=5.467,P＜0.05）,CD1a的阳性表达率[（43.371±16.250）%]较第1天[（12.300±6.223）%]显著升高（t=2.545,P＜0.05）;而CD86、CD83、HLA-DR的阳性表达率[（16.857±5.686）%、（9.343±5.230）%、（72.800±17.881）%]与第1天[（12.550±16.758）%、（6
- 单骄宇刘弓伯吐尔洪江·吐尔逊张雪阿尔孜古丽·吐逊林仁勇温浩
- 关键词：树突细胞细胞培养技术细胞因子类淋巴细胞培养试验
- 不同棘球蚴抗原诱导树突状细胞表达吲哚胺2,3-双加氧酶的实验研究被引量：7
- 2013年
- 目的检测不同的棘球蚴抗原体外诱导树突状细胞(DCs)表达吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的情况。方法从C57BL/6小鼠股骨中分离出骨髓细胞,用小鼠重组巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)诱导后,获得小鼠骨髓源树突状细胞(BMDCs)。分别用重组抗原B(rAgB,15μg/ml)、小鼠细粒棘球蚴囊液(MHF,5 mg/ml)、γ干扰素(IFN-γ,1 000 U/ml,为阳性对照)和RPMI 1640完全培养液(阴性对照)刺激DCs,于18、24和48 h后收集细胞和细胞上清。采用流式细胞术检测各组DCs的表面标志物CD40、CD80、CD86和I-A/I-E的阳性表达情况,并利用实时荧光定量PCR(FQ-RT-PCR)检测各组的IDO mRNA相对转录水平。利用高效液相色谱法(HPLC)检测各组细胞上清中的色氨酸(Try)浓度。结果流式细胞术检测结果显示,DCs受rAgB和MHF刺激后,其表面标志物CD40、CD80、CD86和I-A/I-E的阳性表达率均降低。刺激24 h后,rAgB组的CD40、CD86和I-A/I-E阳性表达率分别为(22.60±2.69)%、(35.50±4.38)%和(57.30±4.38)%,与MHF组[(38.00±3.54)%、(53.00±3.39)%和(77.10±1.70)%]和阴性对照[(37.95±3.61)%、(19.55±1.06)%和(85.45±1.63)%]的差异均有统计学意义(P<0.05)。FQ-RT-PCR结果显示,刺激18、24和48 h后,rAgB组的IDO mRNA水平[(9.20±0.01)、(29.44±0.02)和(16.48±0.04)]和MHF组的[(9.67±0.02)、(17.52±0.01)和(16.81±0.01)]均高于阴性对照组[(2.46±0.01)、(7.77±0.01)和(10.56±0.01)](P<0.01),rAgB组和MHF组IDO mRNA水平的差异均有统计学意义(P<0.05)。HPLC结果显示,刺激18、24和48 h后,rAgB组DCs上清中的色氨酸浓度[(23.65±0.64)、(13.95±1.06)和(19.05±0.64)μmol/L]均较其他3组低,刺激24 h后的色氨酸浓度与阴性对照组(22.90±0.14)和MHF组(20.65±0.35)的差异均有统计学意义(P<0.05)。结论在体外实验条件下,rAgB、MHF均可上调DCs表面IDO的表达,作用24 h后,rAgB上调IDO的能力强于MHF。
- 单骄宇李海涛李春燕肖晋李亮张雪林仁勇温浩
- 关键词：抗原免疫逃避
- 细粒棘球蚴抗原诱导树突状细胞表达吲哚胺2,3-双加氧酶的动态观察被引量：8
- 2012年
- 目的动态检测细粒棘球蚴不同抗原体外诱导树突状细胞表达吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)。方法在体外实验的条件下,获得C57BL/6小鼠骨髓来源的树突状细胞(BMDCs),分别应用15μg/ml重组抗原B(rAgB)、5mg/ml小鼠囊型包虫囊液(MHF)、1 000U/ml IFN-γ(阳性对照)刺激BMDCs,在6、18、24、48、60h采用实时荧光定量RT-PCR动态监测IDO、IL-10mRNA相对表达情况;在不同时间点收集各组DCs,应用Western blot检测IDO蛋白的表达。结果 FQ-RT-PCR显示,rAgB处理组IDO mRNA在24h时上调26.8倍,IL-10mRNA在48h时上调65.1倍,MHF处理组干预24h时IDO mRNA、IL-10mRNA表达分别上调12.6倍和3.9倍。Western blot显示IDO的表达可被rAgB、MHF上调,rAgB处理组在24h时出现IDO条带,MHF处理组于48h出现MHF条带。结论 rAgB、MHF均可上调DCs表面IDO的表达,并在一定时间内rAgB上调IDO表达的能力强于MHF。推测在CE的慢性感染过程中,IDO作为调节宿主反应的分子开关可能在Th2型反应中发挥着主导作用,棘球蚴致机体免疫逃避中可能参与抑制炎症反应。
- 单骄宇李海涛吐尔洪江·吐逊肖晋李亮林仁勇温浩
- 关键词：细粒棘球蚴抗原树突状细胞吲哚胺2,3-双加氧酶
- 囊型包虫病患者外周血单核细胞诱导的树突状细胞形态及表型特点被引量：5
- 2010年
- 目的研究囊型包虫病患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)体外诱导的树突状细胞(dendritic cell,DC)的形态及其细胞表型特点。方法囊型包虫病患者组(cystic echinococcosis,CE)15例,健康志愿者对照组(healthy donor,HD)15例,采外周血(肝素抗凝)分离单个核细胞后贴壁培养,施加重组细胞因子培养6d,诱导成DC,采用倒置显微镜和扫描电镜观察细胞形态,流式细胞术检测CD86、HLA-DR、CD1a、CD80的表达情况。结果与HD组比较,CE组PBMC诱导的DC表面的树突状突起较少,且细胞表面的CD86、HLA-DR、CD1a、CD80表达降低(P<0.05)。结论CE组患者PBMC诱导的DC形态不典型,表面分子的表达降低,细胞活力降低,对T细胞的刺激能力减弱。
- 刘弓伯邵英梅单骄宇吐尔洪江·吐逊张雪阿尔孜古丽·吐逊张志蒋铁民林仁勇温浩
- 关键词：囊型包虫病细胞表型
