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国家自然科学基金(30370081)

作品数：10 被引量：10H指数：2
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文献类型

  • 10篇中文期刊文章

领域

  • 7篇医药卫生
  • 2篇农业科学
  • 1篇生物学

主题

  • 6篇肉毒
  • 6篇肉毒毒素
  • 4篇A型肉毒毒素
  • 4篇BONT
  • 3篇抗原
  • 3篇抗原性
  • 3篇克隆
  • 3篇纯化
  • 2篇单抗
  • 2篇单克隆
  • 2篇单克隆抗体
  • 2篇肉毒神经毒素
  • 2篇肉毒梭菌
  • 2篇神经毒素
  • 2篇梭菌
  • 2篇重链
  • 2篇免疫
  • 2篇抗体
  • 2篇抗原性分析
  • 2篇基因序列

机构

  • 9篇军事医学科学...
  • 2篇湖南大学
  • 2篇内蒙古大学
  • 1篇湖南农业大学
  • 1篇武警医学院

作者

  • 9篇王景林
  • 3篇高姗
  • 3篇康琳
  • 3篇贾杨
  • 2篇杨利敏
  • 2篇贾宏丽
  • 2篇王俊虹
  • 2篇李秀山
  • 1篇刘艳华
  • 1篇孙嗣梅
  • 1篇扈庭茂
  • 1篇刘选明
  • 1篇赵李剑
  • 1篇王利春
  • 1篇张璐
  • 1篇阮承迈
  • 1篇贾扬
  • 1篇谢亮

传媒

  • 5篇军事医学科学...
  • 1篇中华微生物学...
  • 1篇国外医学（卫...
  • 1篇湖南农业科学
  • 1篇动物医学进展
  • 1篇生物信息学

年份

  • 4篇2007
  • 4篇2006
  • 1篇2005
  • 1篇2004
共 10 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
A型肉毒神经毒素(BoNT/A)基因序列分析及其B细胞表位预测被引量：1
2006年
比较GenBank中4个不同毒株的A型肉毒神经毒素（BoNT／A）的基因组序列，发现其基因序列的一致性高迭92．2％-99．9％。基于保守性高的BoNT／A氨基酸序列，根据BioSun和LaserGene软件包中的表住分析相关参数，辅以对BoNT／A蛋白的二级结构的分析，综合预测BoNT／A的B细胞表位。结果表明，BoNT／A轻链的142-150、284-292区段，轻链的284-292，重链的440-450、465-480、538-549、699-710、751-760、1087-1095、1224-1231、1263-1270区段是B细胞表位优势区的可能性较大。多参数方案井结合不同软件综合预测BoNT／A蛋白的B细胞表位，为进一步实验鉴定BoNT／A的B细胞表位及其多表位疫苗设计和研究奠定了基础。
贾杨阮承迈王景林
关键词：肉毒梭菌肉毒神经毒素B细胞表位
重组肉毒毒素E(BoNT/E)重链C端的表达、纯化及其抗原性分析被引量：1
2004年
目的 :克隆、表达并纯化肉毒毒素E重链C端 (BoNT/EHC2 )保护性抗原片段 ,为BoNT/E的抗体制备和检测方法的建立奠定基础。方法 :采用PCR扩增BoNT/EHC2基因 ,插入表达载体 pET2 8a ,转化E .coliBL2 1(DE3) pLysS获得表达工程菌株 ,并对诱导表达条件和纯化条件进行优化。利用Western印迹和间接ELISA方法鉴定rBoNT/EHC2的抗原性。结果 :表达工程菌 pET2 8a EHC2 /BL2 1(DE3) pLysS于 37℃用 0 .2mmol/LIPTG诱导 6h ,表达的目的蛋白可以达到全菌蛋白的 37.9%。经过固定化金属螯合亲和层析一步纯化 ,rBoNT/EHC2的纯度可达 95 %以上。Western印迹和间接ELISA显示其具有良好的抗原性。结论 :首次克隆、表达并纯化了BoNT/EHC2片段 ,并可被抗天然BoNT/E马血清所识别 ,为制备相应的抗体及建立快速检测方法做好了准备。
贾宏丽杨利敏王景林康琳王利春孙嗣梅
关键词：抗原性
A型肉毒毒素Hc基因的原核表达、纯化及单抗的制备
2007年
在大肠埃希菌中高效表达的重组A型肉毒毒素保护性抗原,是以包涵体形式存在。溶解后的包涵体溶液经过处理,用镍柱亲和层析法纯化,得到纯度约为90%的融合蛋白。利用纯化的重组抗原BoN-Ta免疫Balb/c小鼠,获得分泌抗BoNTa特异性的3株杂交瘤细胞株2A2、4F7和2A8,其单抗鉴定均为IgG1亚型,滴度达到1∶105。高纯度和活性单抗的获得为毒素检测试剂盒的研究奠定了基础。
李秀山刘选明赵李剑高姗王景林
关键词：A型肉毒毒素包涵体单克隆抗体
PCR合成的A型肉毒毒素重链C端结合区基因的高效表达与免疫原性分析被引量：1
2006年
目的A型肉毒毒素重链C-端结合区(BoNT/A Hc-C)的PCR拼接合成、重组表达与免疫原性分析。方法经密码子优化软件对编码基因序列重新优化设计,以16条长片段寡核苷酸引物经重叠PCR合成BoNT/AHc-C基因片段,插入表达载体pET-His,再转化大肠杆菌BL21(DE3)plys S中进行诱导表达,以金属螯合亲和层析法纯化重组蛋白,并进行鉴定和抗原性分析。结果表达工程菌裂解液经SDS-PAGE分析,重组蛋白约占细胞总蛋白的65%,为包涵体形式,经亲和层析一步纯化和柱上复性获得纯度大于95%的可溶性重组蛋白,Western blot和ELISA均证明,该重组蛋白与抗天然BoNT/A马血清抗毒素有特异性结合反应,是BoNT/AHc-C抗原,且免疫小鼠可耐受10个LD50BoNT/A的攻击。结论所获重组BoNT/AHc-C蛋白具有良好的免疫原性,为研制基因工程疫苗奠定了基础。
杨利敏王景林扈庭茂
关键词：A型肉毒毒素抗原性
A型肉毒毒素多表位串联体的设计、表达、纯化及鉴定被引量：3
2007年
目的:设计、表达两个A型肉毒毒素多表位串联体。方法:从文献报道的A型肉毒毒素(botulinum neuro-toxin type A,BoNT/A)的表位及生物信息学方法预测得到的B细胞表位中遴选表位,并加入适当的辅助性元件,设计多表位串联体A、B。对其基因进行优化后,经重叠PCR方法合成串联体A、B的全长基因。分别插入原核表达载体pQE-30,再转化E.coliM15[pREP4]感受态细胞中进行诱导表达,以金属螯合亲和层析法纯化重组蛋白,并进行鉴定。结果与结论:成功设计并构建了两个多表位串联体A、B,并在E.coli中以包涵体形式获得高效表达。Ni-NTA法纯化后分别获得纯度大于92.2%、99%的重组串联体A、B蛋白,并经透析复性法复性。Western印迹和间接ELISA显示纯化、复性后的重组蛋白与抗天然BoNT/A马血清有特异性结合反应。
贾杨王俊虹高姗康琳王景林
关键词：肉毒毒素A重叠PCR
重组肉毒毒素B重链结合区片段的表达、纯化及其抗原性分析
2006年
目的:克隆、表达并纯化肉毒毒素B重链结合区C端(BoNT/B Hc)保护性抗原片段。方法:采用PCR扩增BoNT/B Hc基因,插入表达载体pET-H is,转化E.coliBL21(pLys)细胞获得表达工程菌株,并对诱导表达条件和纯化条件进行优化。利用W estern印迹和间接ELISA方法鉴定rBoNT/B Hc的抗原性。结果:表达工程菌BL21/pETH is-BHc于37℃经0.2 mmol/L IPTG诱导6 h后,目的蛋白获得高表达,约占菌体总蛋白的24%。经过N i-NTA亲和层析柱一步纯化,rBoNT/B Hc的纯度可达96%以上。W estern印迹和间接ELISA均显示其具有良好的抗原性。结论:成功克隆、表达并纯化了BoNT/B Hc片段,并可被抗天然BoNT/B马血清所识别,为建立快速检测方法和制备相应的抗体及亚单位疫苗奠定了基础。
谢亮王俊虹康琳高姗王景林
关键词：克隆纯化抗原性
E型肉毒神经毒素(BoNT)基因序列分析及其B细胞表位预测被引量：1
2006年
目的：分析不同E型肉毒梭菌的肉毒神经毒素（BoNT）基因序列的同源性，预测E型BoNT的B细胞表位。方法：用LaserGene软件中的MegAlign程序比对GenBank中5株不同E型肉毒梭菌的BoNT基因序列；分别利用BioSun和LaserGene软件分析E型BoNT的表位参数、蛋白质二级结构及氨基酸序列保守性，利用三维结构显示软件Cn3D，分析E型BoNT可能的B细胞表位的空间定位，进而预测E型BoNT的B细胞表位。结果：5个E型BoNT基因核酸序列同源性为97．2％-100％，氨基酸序列同源性为95％-100％；E型BoNT轻链中的62-78，111-127区段，重链中443-465，661-677，693～709，727-743，853-869，1093-1109，1128-1144，1163-1179区段最有可能是其B细胞优势表位。结论：我们利用不同分析软件，结合多参数综合预测出了E型BoNT的多个B细胞表位，为进一步鉴定E型BoNer的B细胞表位及其多表位疫苗的研究奠定了基础。
刘艳华贾扬王景林
关键词：肉毒梭菌B细胞表位
肉毒中毒的主动免疫预防研究进展
2007年
肉毒毒素是目前已知的毒性最强的物质,也是一种重要的毒素战剂和生物恐怖剂。由于目前仍未有实用有效的方法治疗肉毒中毒,因而其疫苗的主动免疫预防研究就更为重要。有关肉毒中毒的各种疫苗的研究均取得了一定的进展,并且就其免疫途径也做了一些有意义的探索。其中类毒素疫苗和重组亚单位疫苗的预防效果最好,可以抵抗1×105倍LD50天然毒素的攻击,但这两种疫苗均存在着潜在的不可忽视的副作用,还有待进一步完善和改进。同时本文提出了多表位疫苗的新思路,并指出多表位疫苗有可能是今后肉毒毒素疫苗研究的一个新方向。
贾杨王景林
关键词：肉毒毒素免疫预防疫苗
A型肉毒毒素单克隆抗体的制备及初步鉴定被引量：1
2007年
制备了A型肉毒毒素（BoNT/A）单克隆抗体（mAb）,并对其免疫学特性进行了初步鉴定.用BoNT/A重组抗原（BoNT/A Hc）免疫Balb/c小鼠后,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系Sp2/0融合,经3次亚克隆建立了3个稳定分泌抗BoNT/A抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2A8、4F7和2F2,3株抗体均属IgG1亚型,效价为10^-4～10^-5,3株单抗抗相同抗原表位,交叉反应结果表明,3株单抗与BoNT/A的类似物均无交叉反应,具有较高的特异性.
张璐李秀山王景林
关键词：肉毒毒素杂交瘤细胞单抗克隆
重组肉毒神经毒素A轻链(BoNT/ALC)蛋白的表达、纯化与鉴定被引量：2
2005年
　目的:克隆、表达并纯化肉毒神经毒素A轻链(BoNT/ALC)片段,为BoNT/A的抗体制备和检测方法的建立奠定基础。方法:以PCR方法自肉毒梭菌中扩增BoNT/A轻链基因,直接插入pGEM T载体,测序正确后再与表达载体pET21a构建重组表达载体pET21a 轻链,转化E.coliBL21(pLys)感受态细胞获得表达工程菌株并进行诱导表达,用Western印迹鉴定重组BoNT/A轻链。结果:经PCR获得的BoNT/A轻链序列与GenBank中的BoNT/A轻链基因序列的一致性达 99. 9%以上。表达工程菌BL21 /pET21a ALC于 37℃经 0. 7mmol/LIPTG诱导 6h,目的蛋白获得高表达,约占菌体总蛋白的 23%。经过镍离子螯合次氨基三乙酸 (Ni NTA)亲和层析一步纯化,重组BoNT/A轻链的纯度可达 97%以上。Western印迹结果表明,重组BoNT/A轻链与抗天然BoNT/A的马血清发生特异性的抗原抗体结合反应。结论:成功克隆、表达并纯化了BoNT/A轻链片段,其抗原性良好。
贾宏丽王景林
关键词：轻链克隆表达
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