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核因子-κB及其抑制因子在肝细胞癌血管形成中的作用及机制探讨被引量：9: 2004年; 缪林季国忠刘政张平杨春; 关键词：肝细胞癌血管形成核因子-ΚB 激酶 IΚB 蛋白质分子

Smad4基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定被引量：12: 2006年; 目的:构建Smad4基因RNAi慢病毒载体.方法:针对已经筛选确定的Smad4基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的OligoDNA,退火形成双链DNA,与经MluI和ClaI酶切后的pLVTHM载体[含H1启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]连接产生LVshSmad4慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定.用LVshSmad4,pCMVdR8.74和pMD2G3质粒共转染包装细胞293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度.结果:PCR和测序证实,成功构建Smad4shRNA的慢病毒载体LVshSmad4.包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为5×1010pfu/L.结论:成功构建人Smad4基因RNAi慢病毒载体.; 季国忠张发明翟惠虹范志宁樊代明王学浩; 关键词：RNA干扰 SMAD4 肿瘤慢病毒

转化生长因子β-Smad信号转导通路在肿瘤发生中的作用被引量：13: 2005年; 转化生长因子β(TGFβ)Smad信号转导途径在肿瘤发生机制中发挥重要作用。近年来,大量研究已经揭示了TGFβ超家族配体、受体、Smad蛋白、上游和下游调节因子及多种信号通路间的交互对话在消化系统恶性肿瘤、肺癌及其他肿瘤中的作用机制。作者比较和整理近年关于TGFβSmad信号通路及Smad4在肿瘤领域的体内外研究报道,并就此作一综述。; 季国忠王学浩; 关键词：转化生长因子Β SMAD通路信号转导肿瘤

TGF-β_1、TGF-β_1RⅡ、NF-κB在肝细胞癌血管形成中的作用及机制探讨被引量：22: 2002年; 目的　探讨转化生长因子 β1(TGF - β1)、转化生长因子 β1Ⅱ型受体 (TGF - β1RⅡ )、核转录因子 -κB(NF -κB)在肝细胞癌 (HCC)血管形成中的作用及其机制。方法　用免疫组化技术 ,分别检测 36例肝癌组织和癌旁肝组织中TGF - β1、TGF - β1RⅡ及NF -κB蛋白的表达 ;以CD3 4 标记血管内皮细胞 ,观察TGF - β1及TGF- β1RⅡ蛋白与微血管密度 (MVD)的关系 ;同时观察NF -κB与TGF - β1的关系。结果　 (1)肝癌组织TGF - β1蛋白表达明显高于癌旁组织 (P <0 0 1) ;肝癌组织TGF - β1RⅡ蛋白表达明显低于癌旁组织 (P <0 0 1)。(2 )肝癌组织中MVD明显高于癌旁组织 (P <0 0 1)。(3)肝癌组织中TGF - β1蛋白阳性表达与MVD呈正相关 ;TGF -β1RⅡ蛋白阳性表达与MVD呈负相关。 (4)NF -κB蛋白阳性表达与TGF - β1蛋白阳性表达呈正相关。结论　肝癌细胞中TGF - β1、TGF - β1RⅡ、NF -κB蛋白表达异常 ,并与MVD相关 ,提示它们在肝细胞癌血管形成中发挥重要作用 ,NF -κB可能在介导TGF -; 季国忠赵志泉缪林刘政张平杨春黄坚; 关键词：血管形成 TGF-Β1 肝细胞癌

肝细胞癌组织中TGF-β_1基因mRNA和蛋白表达的研究被引量：2: 2003年; 目的　从转录和翻译两个水平探讨转化生长因子 β1(TGF β1)在肝细胞癌 (HCC)中的表达。方法　用免疫组化技术 ,分别检测 36例肝癌组织和癌旁肝组织中TGF β1及转化生长因子 β1Ⅱ型受体 (TβRⅡ )蛋白的表达 ;用原位杂交方法检测 2 6例肝癌组织和癌旁肝组织中TGF β1mRNA的表达 ,并将TGF β1蛋白与TGF β1mRNA ,TGF β1mRNA与TβRⅡ蛋白进行比较。结果　 (1)肝癌组织中TGF β1mRNA、TGF β1蛋白表达均明显高于癌旁组织 (P <0 0 1) ;肝癌组织TβRⅡ蛋白表达明显低于癌旁组织 (P <0 0 1)。 (2 )肝癌组织中TGF β1mRNA与TGF β1蛋白呈正相关 ,TGF β1mRNA与TβRⅡ蛋白表达呈负相关。结论　肝癌组织中TGF β1基因的变化发生在多个水平 ;TGF β1在肝癌发生中发挥重要作用 ;TGF β1抑制作用的减弱主要是由于TβRⅡ蛋白表达减弱引起。本研究为肝癌发病机制和基因治疗提供理论依据。; 季国忠赵志泉缪林刘政张平杨春黄坚; 关键词：肝细胞癌癌组织 TGF-Β1基因原位杂交法免疫组化技术

人肝癌及癌旁组织中Smad4、Smad7mRNA和蛋白表达研究被引量：20: 2004年; 目的 :分析Smad 4、Smad 7mRNA和蛋白在人肝癌组织中的表达并与癌旁组织比较 ,了解Smad 4mRNA和蛋白与肝癌临床病理特征之间的关系。方法 :用原位杂交和免疫组化方法检测 36例肝癌存档病理标本和其中的 2 8例癌旁组织病理标本Smad 4、Smad 7mRNA和相应的蛋白。结果 :Smad 4mRNA和其蛋白在肝癌组织中的表达低于肝癌癌旁组织 ,癌组织表达率分别为 2 8%和 19% ,癌旁组织表达率分别为 86 %和 75 % ,两者之间差别有统计学意义(P <0 .0 1)。Smad 7mRNA和其蛋白表达则相反 ,癌组织表达强 ,表达率分别为 6 6 %和 6 4 % ,癌旁组织表达率分别为14 %和 36 % ,两者之间差别有统计学意义 (P <0 .0 1和P <0 .0 5 )。Smad 4mRNA和蛋白与肝癌患者年龄、性别和肿瘤大小无关 ,但与肿瘤细胞类型、是否转移存在相关性。结论 :Smad 4和Smad 7蛋白作为转化生长因子 - β(TGF β)信号转导途径的下游分子 ,在肝癌组织中表达发生了改变 ,参与肝癌的发生、发展。; 刘政季国忠缪林杨春张平; 关键词：肝癌癌旁组织 SMAD4MRNA 蛋白表达

Smad4/DPC4基因小发夹RNA质粒表达载体的构建和鉴定被引量：2: 2006年; 目的:构建Smad4基因小发夹RNA(shRNA)表达载体。方法:设计、合成3对编码Smad4基因shRNA的寡核苷酸序列,并分别将其克隆入pGCsi-H1/Neo/GFP质粒,酶切、测序鉴定,脂质体法转染293细胞。实时荧光定量PCR检测RNA干扰(RNA i)的抑制效果。结果:在经HindⅢ和BamHⅠ双酶切分别鉴定三种重组载体后,DNA测序证实小干扰RNA(siRNA)序列正确,并被准确克隆入载体。实时荧光定量PCR检测结果表明三种重组载体psiSm ad4-1、psiSm ad4-2和psiSm ad4-3载体,分别对293细胞中Smad4基因mRNA表达的特异性抑制率为39.00%、8.80%和73.80%。结论:成功构建Sm ad 4 pGCsi-H1/Neo/GFP/shRNA质粒,为后期研究Smad4基因在肿瘤细胞中的作用机制和基因治疗打下基础。; 季国忠张发明黄曙缪林刘政喻容彬王学浩; 关键词：RNA干扰 SMAD4 小发夹RNA 293细胞肿瘤

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江苏省自然科学基金(BK2001168)