国家自然科学基金(81102024)
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- 核受体调节因子GT198选择性剪接异构体序列测定及其功能初探
- 2013年
- 目的:测定及分析GT198及其选择性剪接异构体GT198acDNA全序列并分别进行克隆,检测GT198a的功能并与GT198相比较。方法:RT-PCR及5′RACE测定GT198及GT198a的cDNA全序列;荧光素酶活性实验测定GT198a对基因转录的调控作用;免疫荧光实验检测GT198a对Rad51核聚体形成及GT198定位的影响。结果:GT198比GT198a上游多出100bp,与GT198相比,GT198a的序列包含了第一、二外显子间内含子。GT198a蛋白可使荧光素强度增加,Rad51核聚点形成受阻;而GT198蛋白则使荧光素强度减弱,对Rad51核聚点形成无明显影响。大量GT198a蛋白表达后GT198蛋白由核表达转为主要在胞质表达。结论:GT198a与GT198具有不同的5′端序列且在功能上相拮抗。GT198a可激活转录并抑制Rad51核聚点形成。GT198a蛋白的大量表达可促进GT198蛋白定位由胞核转向胞质。
- 彭敏许斌宋启斌
- 关键词：选择性剪接
- BRCA1及BRCA1△11b在P19细胞及人胚胎干细胞分化过程中的选择性剪接
- 2012年
- 目的:检测BRCA1及其剪接异构体BRCA1△11b在P19及人胚胎干细胞分化过程中的表达。方法:全反式维甲酸诱导P19细胞的分化,提取不同时间点RNA,运用RT-PCR,Real-time PCR分别检测P19细胞及人胚胎干细胞分化过程中BRCA1及其剪接异构体BRCA1△11b的表达。结果:未分化P19细胞在全反式维甲酸诱导下聚集形成拟胚体。在P19细胞拟胚体形成过程中,BRCA1△11b表达水平迅速降低,而BRCA1的表达则随P19细胞分化发生相反的变化,BRCA1表达水平迅速升高。在人胚胎细胞分化过程中,BRCA1基因同样发生选择性剪接的转换,由未分化时BRCA1△11b为主要剪接产物转换为拟胚体形成时BRCA1表达占优势。结论:BRCA1及其选择性剪接异构体BRCA1△11b在P19细胞及人胚胎干细胞分化过程中均发生选择性剪接的转换,BRCA1基因的选择性剪接可能在胚胎干细胞的分化过程中发挥重要作用。
- 彭敏张力徐斌李娜伍欣星宋启斌
- 关键词：BRCA1选择性剪接干细胞分化
