山东省医药卫生科研项目(2005JW2008)
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
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- 人疱疹病毒8型感染的间接ELISA检测方法的建立
- 2008年
- 目的建立人疱疹病毒8型(HHV-8)感染的间接ELISA检测方法,并初步探讨其应用价值。方法利用PCR技术获得HHV-8 ORF73C基因,插入到原核表达载体pGEX-6P-1中,在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导蛋白表达;以纯化的GST-ORF73C融合蛋白为包被抗原,利用方阵滴定法确定包被抗原和抗血清的最适工作浓度,并通过阻断试验、交叉试验、特异性试验、重复性试验及与Chou等建立的K8.1合成多肽-ELISA检测方法进行试验比较等评价其效果。结果SDS-PAGE及Western-blot检测结果显示,目的基因在大肠杆菌BL21(DE3)中得到高效表达,且表达产物能被KS阳性血清[HIV(+)/KS(+)血清]特异性识别;方阵滴定试验显示:包被抗原的最佳浓度为1.5μg/mL,血清抗体的最佳稀释度为1∶80;阻断试验、交叉试验、特异性试验、重复性试验等表明该方法特异性强、重复性好;对86份HIV(+)/KS(-)血清样品进行检测的结果显示,该方法与Chou等建立的K8.1合成多肽-ELISA检测方法的符合率为98.8%。结论GST-ORF73C-ELISA检测方法具有良好的特异性和重复性,可用于HHV-8感染的血清学检测及流行病学调查。
- 仇岩朱海峰张心声
- 关键词：人疱疹病毒8型酶联免疫吸附测定
