福建省卫生教育联合攻关计划项目(WKJ2008-2-42)
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
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- 人KiSS-1和p27^(Kip1)基因在骨肉瘤MG63细胞株中的共表达
- 2009年
- 目的克隆肿瘤转移抑制基因KiSS-1和细胞周期依赖性激酶抑制剂基因p27Kip1的表达序列,应用内部核糖体插入位点(IRES)序列构建共表达载体pIRES-KiSS-1-p27Kip1,测序鉴定,并获得稳定表达目的蛋白的细胞株。方法利用RT-PCR从人正常胎盘组织中获得KiSS-1和p27Kip1基因开放阅读框的cDNA序列,将两目的基因的cDNA序列重组至pIRES载体,构建共表达载体pIRES-KiSS-1-p27Kip1,应用脂质体转染骨肉瘤MG63细胞,并通过RT-PCR和Westernblot检测目的蛋白的表达情况。结果经PCR、酶切鉴定和基因序列测定,证实重组入pIRES载体上的两个片段均为目的基因开放阅读框的核苷酸序列,KiSS-1和p27Kip1蛋白在转染后的细胞中有表达。结论成功构建共表达载体pIRES-KiSS-1-p27Kip1,获得稳定表达KiSS-1和p27Kip1蛋白的细胞株,为进一步观察目的基因对骨肉瘤细胞体内外效应奠定基础。
- 白国昌林建华
- 关键词：骨肉瘤基因细胞周期蛋白质类
