博士科研启动基金(X060054)
- 作品数：8 被引量：12H指数：3
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- 犬瘟热病毒贵州株CDV-GZ1的分离与鉴定被引量：3
- 2012年
- 为丰富我国犬瘟热病(CD)的流行病学资料,同时为CDV贵州分离株主要抗原基因及结构研究奠定基础,对贵阳市某宠物医院犬瘟热病毒金标卡检测呈阳性病死犬的肝脏、肺脏、淋巴结等组织,取适量经混合研磨过滤后,同步接种于Vero传代细胞上进行病毒分离培养,并对该分离毒株进行理化特性、电镜形态、血清学和核酸检测等系列鉴定。结果表明:在Vero细胞上盲传至第6代时稳定出现特征性的CPE,该毒株为RNA囊膜病毒,电镜下可见胞浆包涵体、病毒粒子呈晶格状排列,病毒可被犬瘟热阳性血清中和,分离病毒为犬瘟热病毒并被命名为CDV-GZ1株。
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- 关键词：犬瘟热病毒
- 犬瘟热病毒贵州分离株H基因的克隆及其序列分析被引量：1
- 2011年
- 根据GenBank中犬瘟热病毒Onderstepoort株序列设计特异性引物,以犬瘟热病毒贵州分离株（CDV-GZ1）RNA为模板,应用RT-PCR对病毒H蛋白编码基因进行了扩增、克隆及序列分析。测序结果表明,CDV-GZ1 H基因ORF由1 824 bp组成,可编码607个氨基酸;与已发表23株其它CDV H基因核苷酸序列相似性在91.1%~99.6%之间,推导氨基酸序列同源性在91.0%~99.2%之间。GZ1株H蛋白含有5个潜在的N-联糖基化位点,与其他毒株相比,N-联糖基化位点的数目与位置均存在差异。系统进化树分析表明,CDV-GZ1株与德国Snyder Hill株和国内广州分离株（GZ0802）具有较高的同源性,推测这些毒株间可能具有更近的亲缘关系。
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- 关键词：犬瘟热病毒H基因克隆
- 犬瘟热病毒贵州株(CDV-GZ1)F基因的克隆及序列分析被引量：4
- 2012年
- 根据GenBank中发表的犬瘟热病毒Onderstepoort株融合蛋白基因(F)序列设计两对特异性引物,采用RT-PCR扩增犬瘟热病毒贵州分离株(CDV-GZ1)的F基因,并进行克隆与序列分析。结果显示,CDV-GZ1株F基因的ORF全长1989bp,氨基酸序列中具有5个潜在N-糖基化位点,氨基酸同源性与美国00-2601株和国内HL株较高,分别为91.6%和91.1%,表明该分离株与00-2601株和HL株具有较近的亲缘关系。
- 曾智勇周莉刘志杰
- 关键词：犬瘟热病毒F蛋白克隆
- 犬瘟热病毒H基因原核表达质粒的构建被引量：1
- 2011年
- 为H蛋白进一步表达作为诊断用抗原、建立特异的犬瘟热病毒(CDV)抗体检测方法及CDV的预防奠定基础,以已构建含有犬瘟热病毒H基因的pMD18-H质粒为模板,利用合成的特异性引物进行PCR扩增,得到1824bp的目的DNA片段,将所得H基因克隆至经相同双酶切处理后的pET32a(+)原核表达载体中,获得重组质粒pET32a(+)-H。测序结果显示,目的基因插入位置和阅读框正确,成功构建了H基因原核表达质粒。
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- 关键词：犬瘟热病毒H基因原核表达
- 犬瘟热病毒N基因原核表达质粒的构建
- 2011年
- 为了对N蛋白表达作为诊断用抗原、检测犬瘟热病毒(CDV)特异性抗体提供参考依据,以已构建的含犬瘟热病毒N基因的pMD18-N质粒为模板,利用特异性引物进行PCR扩增,得到1 572 bp的N基因开放阅读框,将所得N基因克隆至经相同双酶切处理后的pET32a(+)原核表达载体中,获得重组质粒pET32a(+)-N,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。测序结果显示,目的基因插入位置和阅读框正确,经IPTG诱导表达出分子量约为75 kDa的重组N蛋白。
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- 关键词：犬瘟热病毒N基因原核表达
- 犬瘟热病毒贵州株融合蛋白基因原核表达质粒的构建被引量：2
- 2012年
- 为了研究犬瘟热病毒贵州株(CDV-GZ1)完整融合蛋白(F),试验采用PCR方法以pMD18-F质粒为模板,利用特异性引物扩增获得大小为1 989 bp的目的 DNA,并将其克隆至pET32a(+)原核表达载体中,获得重组质粒pET32a(+)-F。结果表明:目的基因插入位置和阅读框均正确,说明F基因原核表达质粒构建成功;质粒pET32a(+)-F在BL21(DE3)中经诱导表达未获目的蛋白,说明CDV融合蛋白可能不适合在该表达系统中进行完整蛋白的表达。
- 曾智勇周莉汤德元刘志杰梁海英
- 关键词：犬瘟热病毒F基因原核表达
- 犬瘟热病毒GZ2株的分离鉴定及H基因原核表达质粒构建
- 2012年
- 对疑似CD的贵宾犬病料进行了CDV的分离和初步鉴定以及H基因的克隆和序列分析,以探讨不同分离株之间H基因的差异。结果表明:采用同步接种的方法,分离到1株犬瘟热病毒(CDV GZ2),并以其RNA为模板,扩增克隆了该病毒血凝素(H)基因,进而构建原核表达质粒pET-H。该毒株H基因ORF大小为1 824bp,可编码607个氨基酸;与国内分离株氨基酸一致性为97.4%～98.5%,与国外分离株为89.6%～95.6%,与疫苗株在89.6%～91.6%。进化分析表明:CDV的分布具有一定地域性,CDV GZ2与国内东北地区分离株亲缘关系近,而与国外分离株亲缘关系相对较远。
- 曾智勇周莉汤德元刘志杰梁海英
- 关键词：犬瘟热病毒H基因原核表达质粒构建
- 犬瘟热病毒贵州分离株N基因的克隆及序列分析被引量：3
- 2011年
- 根据GenBank中发表的犬瘟热病毒Onderstepoort株N蛋白基因序列设计两对特异性引物,采用RT-PCR扩增犬瘟热病毒贵州分离株(CDV-GZ1)的N基因,并进行克隆与序列分析。结果显示,CDV-GZ1株N基因的ORF全长1572bp,其编码氨基酸序列与国外Shuskiy株和01-2689株的同源性分别为98.9%和97.1%,与部分国内分离株同源性在95%以上,说明N蛋白是保守性较强的结构蛋白。
- 周莉刘志杰曾智勇汤德元李谦王彬张晓杰甘振磊王凤
- 关键词：犬瘟热病毒N蛋白克隆
