江苏省自然科学基金(BK2001120)
- 作品数：16 被引量：45H指数：4
- 相关作者：郭锡熔陈荣华倪毓辉王玢刘峰更多>>
- 相关机构：南京医科大学淮安市妇幼保健院南京医科大学第二附属医院更多>>
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- resistin基因过表达影响3T3-L1脂肪细胞的脂质代谢被引量：2
- 2007年
- 目的观察resistin基因过表达对3T3-L1脂肪细胞的脂质代谢、糖代谢的影响。方法构建大鼠resistin真核表达载体并转染3T3-L1前体脂肪细胞,获得稳定表达resistin基因的细胞株;采用油红O染色,观察脂肪细胞分化及脂质积聚情况;采用逆转录PCR技术,检测脂肪细胞分化标志基因及葡萄糖转运体4（glucose transporter4,GLUT4）基因表达变化;采用全自动生化仪比色法,检测脂肪细胞内甘油三酯（triglyceride,TG）、游离脂肪酸（free fatty acids,FFAs）的含量变化。结果（1）resistin基因过表达脂肪细胞中,脂滴出现时间提前,且细胞内布满了小而多的圆形脂滴;（2）resistin基因过表达脂肪细胞中,分化中、晚期标志基因C/EBPα、FAS的mRNA表达水平明显上调,分化早期标志基因Pref-1的表达则明显下调;（3）re-sistin基因过表达脂肪细胞中,胞质内TG、FFAs含量均显著增加;（4）resistin基因过表达脂肪细胞中,分化第2、4、8d的GLUT4基因mRNA表达水平间无显著变化,与正常脂肪细胞中的表达水平差异也无统计学意义。结论resistin基因过表达能够显著干扰3T3-L1脂肪细胞的脂质代谢,有助于肥胖和胰岛素抵抗的发生,而并不影响GLUT4基因的表达。
- 辜楠郭锡熔倪毓辉刘峰费莉陈荣华
- 关键词：3T3-L1脂肪细胞过表达脂质代谢葡萄糖转运体4
- Resistin基因过表达对大鼠胰岛β细胞株RINm5F基础胰岛素分泌的影响被引量：1
- 2009年
- 目的探讨Resistin基因过表达对大鼠胰岛β细胞株RINm5F基础胰岛素分泌的影响。方法体外培养大鼠胰岛β细胞株RINm5F,采用PCR法扩增大鼠Resistin基因全编码区cDNA片段,BamH和Xho双酶切后插入pcDNA3.1B表达载体,经测序验证正确后,采用脂质体转染pcDNA3.1-Resistin真核表达质粒入RINm5F细胞,筛选稳定表达株,并采用RT-PCR验证过表达Resistin的效率。在RINm5F细胞密度达到80%,缓冲液洗3遍,继续于缓冲液中生长2 h,收集上清液,采用ELISA法检测细胞培养上清中的胰岛素水平。同时Trizol一步法提取RINm5F细胞总RNA,采用RT-PCR法检测葡萄糖转运子2(Glut2)mRNA水平,并用紫外吸收剂凝胶密度扫描仪分析条带吸光度值。采用SPSS11.0软件进行统计学分析。结果观察过表达Resistin的RINm5F中ResistinmRNA表达,发现过表达Resistin的细胞株中Resistin mRNA水平为对照组的2.46倍(P<0.001)。过表达Resistin的RINm5F细胞的基础胰岛素分泌低于转染空载质粒的细胞,较对照组下降约32%(P<0.001)。过表达Resistin的RINm5F细胞中Glut2表达明显低于转染空载质粒的细胞,较对照组下降约38%(P<0.05)。结论Resistin基因过表达显著下调胰岛β细胞RINm5F的基础胰岛素分泌,其机制可能与Glut2有关。
- 刘峰邱洁张春梅季晨博陈小慧高春林赵亚萍陈荣华郭锡熔
- 关键词：RESISTIN胰岛Β细胞胰岛素分泌
- Resistin基因在肥胖易感大鼠与肥胖抗性大鼠脂肪组织中表达差异的研究被引量：6
- 2004年
- 目的探讨高脂饮食诱导下肥胖易感(Obesity鄄prone,OP)大鼠与肥胖抗性(Obesity鄄resistance,OR)大鼠白色脂肪组织中Resistin基因mRNA表达的差异。方法25只雄性SD大鼠,以高脂高能量鼠料饲养2周后,按体重增值大小分组,增重最多9只为OP组,增重最少9只为OR组,余7只为正常对照组(C组),OP、OR大鼠继续饲以高脂高能量鼠料4周,对照组改饲标准鼠料。观察各大鼠体重变化、脂肪组织湿重、血脂、血糖、血清胰岛素等,并采用NorthernBlot技术分析脂肪组织中Resistin基因的mRNA表达水平。结果①高脂高能量鼠料诱导下,OP组大鼠体重、附睾周围及腹膜后脂肪组织湿重明显高于C组,OR组则显著低于C组,但各组间血脂、血糖、血清胰岛素水平并无显著差异(P>0.05);②OP组大鼠附睾周围和腹膜后脂肪组织中ResistinmRNA表达水平均显著高于C组与OR组,OR组则低于C组,且附睾周围脂肪组织中ResistinmRNA表达水平显著高于腹膜后脂肪组织。结论OP与OR大鼠外周脂肪组织存在Resistin基因mRNA表达的差异,其差异与大鼠发生肥胖的易感程度有关。
- 郭锡熔龚海霞倪毓辉费莉王玢张敏陈荣华
- 关键词：RESISTIN肥胖易感性高脂饮食
- 抵抗素及其结合多肽对大鼠肝细胞糖原合成的影响
- 2008年
- 目的探讨抵抗素(resistin)及其结合多肽(RBP)对大鼠肝细胞糖原合成的影响。方法体外培养大鼠BRL肝细胞,分为空白对照组、抵抗素(60ng/ml)干预组、RBP(1nmol/L)干预组和抵抗素(60ng/ml)+RBP(1nmol/L)联合干预组,培养2h后筹集细胞,以蒽酮法检测胞内糖原含量,并采用RT-PCR法检测IRS2、SOCS3、GLUT2等基因mRNA的表达变化。结果与空白对照组比较,抵抗素干预组糖原含量显著下降,但RBP干预组则无显著差异;与抵抗素干预组相比,抵抗素+RBP联合干预组糖原含量明显升高。各干预组BRL细胞中GLUT2基因的mRNA水平无显著差异。抵抗素干预组SOCS3 mRNA水平显著上调、IRS2 mRNA水平显著下调;但两者在抵抗素+RBP联合干预组则无明显变化。结论RBP能拮抗抵抗素抑制肝细胞糖原合成的作用,但对正常肝细胞糖原合成功能无明显影响。
- 钱玲梅刘峰倪毓辉郭锡熔
- 关键词：抵抗素糖原肝细胞
- 抵抗素及其结合多肽对大鼠骨骼肌细胞糖摄取功能的影响被引量：2
- 2006年
- 目的探讨抵抗素及其结合多肽(RBP)对大鼠骨骼肌细胞糖摄取功能的影响。方法体外培养的大鼠骨骼肌细胞(L6)随机分为对照组,抵抗素(10 nmol/L)组,RBP(1 nmol/L)组、抵抗素(10 nmol/L)+RBP(1 nmol/L)组,培养0.5 h后,液闪计数法(LSC)观察L6细胞糖摄取功能的变化,RT-PCR、Western blot法检测葡萄糖转运载体(GLUT)4基因的表达及转位变化。结果与对照组相比,抵抗素组糖摄取功能下降,RBP组及抵抗素+RBP组糖摄取功能无明显变化(P<0.05);与抵抗素组相比,抵抗素+RBP组糖摄取功能明显上调(P<0.05)。4组L6细胞的GLUT4基因的蛋白表达及转位均无明显变化(P>0.05)。结论抵抗素能抑制骨骼肌细胞的糖摄取;但对正常骨骼肌细胞糖摄取功能无明显影响;RBP但能有效拮抗抵抗素抑制骨骼肌细胞糖摄取的作用。
- 范红旗郭锡熔陈荣华倪毓辉王玢张敏刘峰辜楠邱洁
- 关键词：抵抗素糖摄取
- PRNP基因在3T3-L1脂肪前体细胞分化过程中的表达及肿瘤坏死因子-α对其调节作用被引量：1
- 2008年
- 目的探讨3T3-L1脂肪前体细胞诱导分化过程中PRNP基因表达水平的变化及TNF-α对其调节作用。方法体外培养3T3-L1前体脂肪细胞,胰岛素加地塞米松加1-甲基-3-异丁基黄嘌呤（MDI）方案诱导3T3-L1细胞分化成熟,并收集分化前、分化0～10 d各时段细胞,采用RT-PCR技术检测诱导分化不同时段3T3-L1细胞PRNP基因表达水平;同时在成功诱导3T3-L1细胞分化成熟的基础上,应用不同水平TNF-α（0.1、1.0、10.0μg/L）干预分化后的成熟脂肪细胞（第10天）,收集TNF-α刺激前（0 h）及刺激后0.5、2.0、6.0、12.0、24.0 h的脂肪细胞,通过RT-PCR测定TNF-α干预前后不同时间点脂肪细胞中PRNP基因表达水平。采用Excel软件进行统计学分析。结果1.PRNP基因低表达于3T3-L1脂肪前体细胞中,随细胞分化成熟该基因表达水平逐渐上调,至分化第10天其表达水平最高。PRNP基因表达水平除在诱导分化前（第-1天）至第4天、第2～5天、第6～10天时段内无显著性差异外（Pa〉0.05）,其余各时段间表达水平均有显著性差异（Pa〈0.05）;2.在分化前的3T3-L1脂肪细胞和成熟脂肪细胞中,不同水平TNF-α（0.1、1.0、10.0μg/L）均能在短时间内明显抑制PRNP基因mRNA的表达,且呈时间依赖性。结论PRNP基因可能参与3T3-L1脂肪细胞分化及脂质积聚过程;不同水平重组TNF-α对成熟脂肪细胞的PRNP基因表达具有抑制作用,其抑制效应总体趋势上呈时间依赖性。
- 池霞郭锡熔张敏倪毓辉王玢童梅玲李晓南
- 关键词：细胞分化肿瘤坏死因子-Α
- Resistin基因在3T3-L1前体脂肪细胞诱导分化过程中表达水平的变化被引量：2
- 2006年
- 目的:观察Resistin基因在3T3-L1脂肪细胞诱导分化过程中不同时段表达水平的变化,探讨Resistin基因与脂肪细胞分化、脂质积聚之间的关系。方法:体外培养3T3-L1前体脂肪细胞,在诱导其向成熟脂肪细胞分化的不同时段(第0￣10天),采用RT-PCR技术检测脂肪细胞中Resistin基因mRNA的表达水平。结果:①Resistin基因在3T3-L1前体脂肪细胞诱导分化初期(第0￣2天)不表达,分化第3天开始表达,分化第4￣6天Resistin基因的表达显著上调,分化第6￣10天Resistin基因的表达保持在较高水平并趋于稳定;②Resistin基因的表达水平除在诱导分化第3￣4天、第6￣10天内差异无显著性(P>0.05)外,其余各时段间表达水平差异均有显著性(P<0.01)。结论:Resistin基因可能参与了脂肪细胞分化的中晚期过程,在3T3-L1脂肪细胞分化过程中表达逐渐上调,其表达变化与脂肪细胞分化、脂质积聚过程相一致。
- 辜楠郭锡熔刘石潘晓勤费莉郭梅陈荣华
- 关键词：细胞分化
- 脂联素基因在肥胖易感大鼠与肥胖抗性大鼠脂肪组织中的表达差异被引量：6
- 2005年
- 目的:探讨高脂高能量饮食诱导下肥胖易感(obesity-prone,OP)大鼠与肥胖抗性(obesity-resistance,OR)大鼠腹膜后脂肪组织中脂联素基因mRNA表达的差异。方法:18只雄性SD大鼠,以高脂高能量鼠料饲养2周后,按体重增值大小分组,增重最多6只为OP组,增重最少6只为OR组。OP、OR大鼠继续饲以高脂高能量鼠料4周后,观察各大鼠体重变化和腹膜后脂肪组织湿重,并采用RT-PCR技术检测脂肪组织中脂联素基因的mRNA表达水平。结果:①高脂高能量鼠料诱导下,OP组大鼠体重、腹膜后脂肪组织湿重均明显高于OR组(P<0.01);②OP组大鼠腹膜后脂肪组织中脂联素基因的mRNA表达水平显著低于OR组(P<0.05);③大鼠腹膜后脂肪组织湿重与脂联素基因mRNA的表达水平间存在显著的负相关关系(P<0.05)。结论:相同饮食条件下,个体发生肥胖的易感性是影响脂联素水平的重要因素。
- 季东林郭锡熔张敏王玢潘晓勤陈荣华
- 关键词：脂联素肥胖易感性
- 脂联素受体1基因在大鼠脂肪组织中的表达及其与肥胖易感性的关系被引量：4
- 2006年
- 目的探讨高脂高能量饮食(HFHCD)诱导下肥胖易感(OP)大鼠与肥胖抗性(OR)大鼠腹膜后脂肪组织脂联素受体1(AdipoR1)基因mRNA表达的差异及其与肥胖易感性的关系。方法雄性SD大鼠18只,以高脂高能量鼠料饲养2周后,按体质量增值大小分组,增重最多的6只为OP组,增重最少的6只为OR组。OP、OR大鼠继续饲以4周后,观察各大鼠体质量变化和腹膜后脂肪组织湿重,采用RT-PCR技术检测脂肪组织AdipoR1基因mRNA表达水平。结果1.HFHCD诱导下,OP组大鼠体质量、腹膜后脂肪组织湿重均明显高于OR组(t′=4.48 P<0.01);2.OP组大鼠腹膜后脂肪组织中AdipoR1 mRNA表达水平低于OR组,但两者差异无统计学意义(t=2.23 P>0.05);3.大鼠腹膜后脂肪组织湿重与AdipoR1 mRNA的表达水平存在显著负相关(r=0.735 P<0.05)。结论AdipoR1表达于脂肪组织。相同饮食条件下,个体发生肥胖的易感性是影响AdipoR1水平的重要因素。
- 季东林李晓琼郭锡熔张敏王玢陈荣华
- 关键词：脂联素受体1肥胖症易感性
- GADD45β基因在脂肪细胞分化过程中的表达及肿瘤坏死因子-α对其的调节作用被引量：1
- 2006年
- 目的观察3T3-L1脂肪细胞诱导分化过程中生长抑制和DNA损伤诱导家族45β（GADD45β）基因mRNA表达水平的变化，探讨TNF—α对成熟脂肪细胞中GADD45β基因表达水平的调节作用。方法体外培养3T3-L1脂肪细胞，在诱导3T3-L1脂肪细胞分化成熟的基础上，应用重组TNF—α干预分化成熟的脂肪细胞，采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测诱导分化不同时段及TNF-α干预后不同时间脂肪细胞中GADD45β基因表达水平。结果随脂肪细胞逐渐分化成熟，GADD45β基因mRNA表达水平渐降低。GADD45β基因表达水平除在细胞分化d1～7、d8～10各时段内差异无显著意义（P〉0．05）外，余各时段之间表达水平差异均具有最著意义（P〈0.05）。不同质量浓度重组TNF-α（0．1～10．0μg/L）均能显著促进成熟脂肪细胞中GADD45β基因mRNA的表达。TNF-α质量浓度为0.1μg／L时，GADD45β基因表达水平6h内上升51．39％，24h内上升100．15％；TNF—α质量浓度为1．0μg／L时，GADD45β基因表达水平6h内上升44．15％，24h内上升100．63％；TNF—α质量浓度达10．0μg/L，GADD45β基因表达水平6h内即上升104．26％，24h内上升122．17％。结论GADD45β基因可能参与脂肪细胞分化及脂质形成过程；TNF-α对成熟脂肪细胞中GADD45β基因表达具有促进作用，其促进效应总体趋势呈现时间依赖性特征。
- 范红旗郭锡熔陈荣华金子林倪毓辉王玢张敏刘峰辜楠邱洁
- 关键词：脂肪细胞细胞分化肿瘤坏死因子Α
