河北省自然科学基金(C2012301001)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 相关作者：李玉生赵艳华吴永杰吴雅琴程和禾更多>>
- 相关机构：河北省农林科学院更多>>
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- 相关领域：农业科学更多>>
- 苹果转化细胞的悬浮培养及植株再生被引量：1
- 2013年
- 以试管苗叶片为外植体,将绿色荧光蛋白基因(GFP)转入苹果品种昌红中,研究发现抗生素筛选压对苹果转化效率的影响主要表现为对转化细胞再生植株的抑制作用。虽然降低筛选压(10或20mg/L卡那霉素)可获得较高频率(分别为62.0%和57.8%)的转化愈伤组织,但其对转化细胞再生植株的抑制仍然明显。通过建立转化细胞悬浮培养系,在无筛选压下获得大量的由悬浮转化细胞增殖形成的愈伤组织,该愈伤组织再转到无筛选压的再生培养基上,6周以后15.8%的愈伤组织可再生转化植株。研究结果显示,可通过建立悬浮培养系的方式消除抗生素筛选压的抑制作用,快速大量获得苹果转化植株,为进一步开展苹果转化基因的整合机制与表达特性研究,推动苹果转基因育种的应用奠定基础。
- 李玉生吴永杰吴雅琴程和禾赵艳华陈龙
- 关键词：苹果转基因植株再生愈伤组织
- 开花调控基因BpMADS4无抗性表达载体的构建
- 2012年
- 为了构建含有报告基因GFP基因和BpMADS4基因的无抗性双元表达载体pCAMBIA1302-GFP-Bp,参考已发表的欧洲白桦(Betula pendula)开花调控基因(BpMADS4)序列,利用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)从欧洲白桦的幼嫩花序中克隆得到促进开花的BpMADS4基因。将该基因替换pCAMBIA1302载体中的潮霉素抗性基因,构建含有报告基因GFP基因和BpMADS4基因的无抗性双元表达载体pCAM-BIA1302-GFP-Bp。结果表明:成功构建了无抗性双元表达载体pCAMBIA1302-GFP-Bp。该表达载体在苹果遗传转化中不使用抗生素筛选,可以解决抗生素抗性筛选降低苹果转基因转化效率的问题以及转基因苹果中选择标记基因造成的生物安全性问题,用该载体转化苹果可以缩短苹果童期,有效提高其育种效率。本研究为筛选对环境安全的、具有易成花特性的苹果新种质奠定了基础。
- 李玉生吴永杰赵艳华吴雅琴程和禾陈龙
- 关键词：GFP基因转基因表达载体构建
- 农杆菌介导GFP基因转化苹果茎尖碎片获得转基因植株被引量：2
- 2013年
- 【目的】为解决基因型依赖性比较强的苹果品种遗传转化困难等问题,研究不同伤害处理方式下苹果茎尖碎片的再生能力及其对苹果转化率的影响。【方法】以苹果‘姬神’试管苗为试材,运用农杆菌介导法对苹果茎尖和离体叶片进行遗传转化。【结果】将茎尖纵切为4部分时,可以高比率的形成愈伤组织(88.4%)和再生不定芽(59.8%)。在20 mg·L-1的卡那霉素筛选压下,300个茎尖外植体中有50.4%的茎尖碎片形成愈伤组织并获得了19株表达GFP的转基因植株。而在同样的筛选压下有22.6%农杆菌介导的离体叶片形成愈伤组织,但不能获得转基因植株。降低筛选压可以提高植株再生率,但其中包含大量嵌合体,转化效率并没有明显提高。【结论】苹果茎尖做为转化受体基因型依赖性较低,要优于苹果离体叶片。
- 李玉生吴永杰程和禾陈龙赵艳华吴雅琴
- 关键词：基因型转基因GFP基因
