山西省自然科学基金(2009011052)
- 作品数：4 被引量：1H指数：1
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- RNA干扰STK15基因对人结肠癌细胞增殖和凋亡的影响
- 2013年
- STK15（serine／threonine kinase15）是一类广泛存在于真核细胞中的丝氨酸／苏氨酸激酶，通过磷酸化下游特定底物影响G2／M期转换，促进中心体成熟、双极纺锤体建立以及染色体的分离。许多研究表明，多种肿瘤中STK15呈高表达状态，在肿瘤的发生发展过程中发挥着重要作用。
- 李晓钟王晓霞安奇君冯建宏裴毅
- 关键词：STK15RNA干扰结肠癌凋亡
- STK15基因RNA干扰真核表达载体的构建及对人结肠癌细胞侵袭的影响
- 2013年
- 目的构建STK15基因特异的RNA干扰(RNAi)真核表达质粒,将其转染人结肠癌细胞SW480后,观察对STK15基因表达的抑制作用及对肿瘤细胞侵袭能力的影响。方法设计并合成能表达小发夹结构RNA(shRNA)的DNA序列,退火后与载体pGPU6/GFP/Neo连接,构建重组表达载体pGPU6/GFP/NeoSTK15 shRNA,转化DH5α菌株后挑选阳性克隆,提取质粒进行序列测定。脂质体介导重组质粒转染人结肠癌SW480细胞,于转染后24 h和48 h通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹法分别在mRNA和蛋白水平检测STK15基因的表达,并通过细胞体外侵袭实验检测肿瘤细胞的侵袭能力。结果测序证实插入pGPU6/GFP/Neo载体的DNA序列、方向和位点均正确。与阴性质粒转染组比较,pGPU6/GFP/Neo-STK15 shRNA质粒转染细胞24 h和48 h后,STK15基因的mRNA和蛋白表达水平均明显降低,且呈现时间依赖性,STK15 mRNA水平分别下调80%和98%,蛋白水平分别下调40%和80%。与阴性质粒转染组比较,pGPU6/GFP/Neo-STK15shRNA质粒转染细胞的侵袭能力分别下降约67%和89%。结论成功构建了针对STK15基因的特异性shRNA真核表达载体,转染细胞后可抑制STK15基因的表达和细胞的侵袭能力,为进一步研究STK15基因功能以及探讨结肠癌治疗的新途径奠定了基础。
- 李晓钟王晓霞贺杰峰裴毅
- 关键词：RNA干扰真核表达载体STK15
- STK15过表达对人食管癌细胞株KYSE150生长的影响
- 2013年
- 目的:探讨丝氨酸/苏氨酸激酶15(serine/threonine kinase 15,STK15)过表达对人食管癌细胞株KYSE150生长的影响。方法:采用脂质体法将pEGFP-C1-STK15真核表达载体转染人食管鳞癌细胞株KYSE150,构建STK15过表达的稳定细胞系(GFP-STK15),通过荧光显微镜和Western blotting检测STK15的表达。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察STK15过表达对体外肿瘤细胞生长的影响。通过流式细胞术分析STK15过表达对细胞周期和凋亡的影响。采用裸鼠致瘤实验观察STK15过表达对体内肿瘤细胞生长的影响。结果:pEGFP-C1-STK15质粒转染细胞后筛选得到稳定克隆,荧光显微镜显示GFP-STK15融合蛋白定位于细胞的中心体以及纺锤体,Western blotting可检测到GFP-STK15融合蛋白的表达。与对照细胞相比,GFP-STK15细胞系的体外生长能力明显增加;G0/G1期细胞百分率降低,细胞凋亡率减少;GFP-STK15细胞系接种组裸鼠肿瘤明显增大,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论:STK15过表达能促进人食管癌KYSE150细胞的生长,提示STK15将可能成为治疗食管癌的新靶点。
- 王晓霞李晓钟路娜赵艳王康裴毅
- 关键词：丝氨酸食管肿瘤细胞增殖
- Aurora-A高表达对食管鳞癌血管生成及血管内皮生长因子受体-2表达的影响被引量：1
- 2013年
- 目的探讨Aurora-A高表达对食管鳞癌血管生成及血管内皮生长因子受体-2(vascular endothelial growthfactor receptor 2,VEGFR-2)表达的影响。方法将绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记的Aurora-A全长表达质粒pEGFP-C1-Aurora-A转染至食管鳞癌细胞KYSE150,经G418筛选获得Aurora-A高表达的细胞株(Aurora-A高表达组),同时设空质粒pEGFP-C1转染组(阴性对照组)和未转染组作为对照。Western blot检测各组细胞中Aurora-A蛋白的表达;采用小管形成及鸡胚尿囊膜试验检测Aurora-A高表达对肿瘤血管生成的影响;免疫组化法检测Aurora-A高表达对裸鼠移植瘤中微血管密度(microvessel density,MVD)的影响;Western blot检测Aurora-A高表达对KYSE150细胞中VEGFR-2及p-VEGFR-2(Tyr1059)表达的影响。结果 Aurora-A高表达组中总Aurora-A蛋白的表达量约为阴性对照组和未转染组的2.5倍,提示Aurora-A高表达细胞系构建成功;Aurora-A高表达组生成的血管数量、MVD值和p-VEGFR-2的表达水平均显著高于阴性对照组(P<0.01)。结论 Aurora-A高表达可促进食管鳞癌中的血管生成,其机制可能与活化VEGFR-2有关。
- 路娜赵艳王康覃秀桃王晓霞
- 关键词：AURORA-A血管生成血管内皮生长因子受体-2食管鳞癌
