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荧光定量PCR分析土壤杆菌及其ntrC突变株对氮源的应答反应被引量：1: 2012年; 热凝胶是土壤杆菌在环境氮源限制时产生的水不溶性多糖,其合成与氮源代谢调控相关,但其机理还不清楚。作者使用荧光定量PCR的方法比较了土壤杆菌野生菌株和其ntrC突变株在氮源充足和限制条件下氮源代谢相关基因和碳代谢相关基因的转录水平差异,探索了土壤杆菌对氮源限制环境的应答机制及氮源调控蛋白NtrC和热凝胶合成之间的关系。结果表明土壤杆菌在环境氮源限制时,ntrB,glnA,glnB,nifR等4种氮代谢相关基因和exoC,exoN,crd,cisY,ndk,glmU等6种碳代谢基因的相对转录水平都有不同程度的提高,表明当环境氮源缺乏时土壤杆菌调整细胞整体代谢(包括氮源吸收代谢、碳代谢、能量合成等),同时使碳代谢流进入热凝胶合成途径用于能量储存。NtrC蛋白参与调控热凝胶合成,而且热凝胶合成过程相关酶的调控,除了存在转录水平调控外,还可能还存在翻译水平的调控。ntrC突变株的热凝胶合成能力相对于野生菌显著降低,且热凝胶合成基因crd在氮源缺乏时的相对转录水平较野生菌株高,推测NtrC蛋白并非crd基因的转录因子。; 路敬吴剑荣于丽珺詹晓北; 关键词：土壤杆菌

产热凝胶土壤杆菌ATCC 31749蛋白质组双向电泳图谱的构建: 2011年; 建立了热凝胶生产菌土壤杆菌菌体总蛋白的蛋白质提取方法和双向电泳方案,确定了使用蛋白质裂解液(7 mol/L尿素,2 mol/L硫脲,1%ASB-14去垢剂,40 mmol/L Tris,0.001%溴酚蓝,1 mmol/L EDTA,1%TBP和1%两性电解质)结合超声破碎法来提取菌体总蛋白的方案为最佳,选择17 cm pH 4～7的IPG预制干胶条和适宜的等电聚焦程序进行第一向等电聚焦电泳。最后比较了考马斯亮蓝和硝酸银两种染色方法对双向电泳图谱的影响,确立了蛋白分辨率高并且重复性较好的土壤杆菌双向电泳图谱构建的可靠方法。; 刘佳詹晓北吴剑荣郑志永于丽珺; 关键词：双向电泳技术蛋白质组

ntrB基因对Agrobacterium sp.ATCC 31749合成胞外多糖的调控研究被引量：1: 2011年; 利用三亲本接合方法将含有ntrB基因两端同源序列的自杀载体pJQ-ntrB-cat导入土壤杆菌(Agrobacterium sp.ATCC 31749)中,获得了ntrB基因突变株。结果表明,ntrB突变株对NH_4Cl和KNO_3的利用能力有所下降。当分别以谷氨酸和谷氨酰胺为氮源时,ntrB突变株生长状况与野生菌相同。ntrB基因的突变导致土壤杆菌的胞外多糖——热凝胶合成能力显著降低:当以NH_4Cl为唯一氮源时,热凝胶产量仅为野生株的40%。另外,ntrB突变株在氮源充足时仍然能合成胞外多糖,同时有不溶解于碱液的未知聚合物产生。本研究证明氮源代谢双组分之一的ntrB基因参与调节菌体在氮源限制条件下胞外多糖的合成以及调控菌体对NH_4Cl和KNO_3等氮源的利用。; 于丽珺吴剑荣郑志永詹晓北; 关键词：土壤杆菌热凝胶

粪产碱杆菌胞内核苷酸的反相高效色谱法测定被引量：6: 2010年; 建立了用反相离子对色谱法同时精确测定产热凝胶粪产碱杆菌胞内中ATP、ADP、AMP、UTP、UDP、UMP、NADH、NAD+及UDP-glucose含量的方法。采用AgilentZorbaxSB-AqC18反相色谱柱(5μm,4.6×250nm),紫外检测波长为254nm,以乙腈-含10mmol/L四正丁基溴化铵的0.2mol/LNa2HPO4-NaH2PO4缓冲液(体积比10.5∶89.5)为流动相,流速为1.0mL/min时,成功分离了上述九种核苷酸,分离效果良好。且九种核苷酸的线性范围为10～100mg/L,回收率均在97%～104%之间,说明其准确度较好。相对标准偏差均在3%之内,说明本方法精密度和重现性均较好,且其最低检出限均在0.1～0.3mg/L之间。该方法为研究热凝胶发酵过程中粪产碱杆菌胞内的核苷酸变化和氧化-还原态趋势及其胞内的核苷酸水平和热凝胶生物合成的关系提供了基础。; 陈定强詹晓北郑志永吴剑荣张洪涛; 关键词：核苷酸 NAD^+UDP 粪产碱杆菌热凝胶

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国家自然科学基金(20806034)