山东省优秀中青年科学家科研奖励基金(BS2011SW005)
- 作品数：5 被引量：2H指数：1
- 相关作者：王斌闫志勇毕春霞罗玮张卫更多>>
- 相关机构：青岛大学青岛市市立医院更多>>
- 发文基金：山东省优秀中青年科学家科研奖励基金山东省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 嗜麦芽寡养单胞菌D2株2套Ⅱ型分泌系统的全基因簇序列测定及分析被引量：1
- 2013年
- 嗜麦芽寡养单胞菌D2株经前期研究发现有2套Ⅱ型分泌系统（T2SS），根据嗜麦芽寡养单胞菌K279a、R551—3、JV3、D457的T2SS基因簇序列，以及D2株的部分测序结果设计引物，采用基因移步法逐一扩增2套T2SS基因序列，产物连接至T载体，经酶切鉴定后测序、拼接。发现有22个完整的开放多码框架（ORF），比对分析后发现T2SSl的基因簇与同种属细菌相应基因簇序列同源性均在80％以上，对应氨基酸序列同源性均能达到97％以上，而T2SS2基因簇与K279a、R551—3对应基因序列和氨基酸序列的同源性均不及T2SS1高。2套T2SS的GspE、F、I基因同源性在50％以上，其他对应基因同源性在35％～68％之间不等，氨基酸序列同源性则为15％～61％。2套他ss与铜绿假单胞菌PA01的同源性高于不同科的小肠结肠炎耶尔森菌。T2SS的序列测定及同源性分析为进一步研究细菌蛋白分泌机制奠定基础。
- 张卫毕春霞罗玮秦江楠陈豪王斌闫志勇
- 关键词：嗜麦芽寡养单胞菌同源性
- 基于主成分特征投影法建立利用16S rRNA基因序列进行物种分类方法的研究
- 2015年
- 提出一种有别于系统发育树的根据16S rRNA基因序列进行物种分类的新方法。首先将基因的碱基字母形式转换成数字形式,构建多维向量。然后根据主成分分析方法将该向量向数据分布最大方向投影,将原数据用几个"主成分"线性表出,而不丢失原数据的信息,采用主成分的显示功能作出三维主成分特征投影视图,达到分类的目的。在双歧杆菌和肠球菌的分类识别中得到较好的应用。
- 任莹毕春霞秦江楠郭双双王斌宋旭霞闫志勇
- 关键词：物种分类碱基序列
- 嗜麦芽寡养单胞菌D2株smp基因缺失株的构建及鉴定被引量：2
- 2014年
- 为深入研究smp基因的功能,需构建嗜麦芽寡养单胞菌D2株smp基因缺失株。首先,PCR扩增D2株smp基因上游、下游片段作为上下游同源臂,同时扩增获得氯霉素抗性(cat)基因,采用SOE-PCR方法将各片段连接,然后双酶切后克隆入自杀质粒pEX18Tc,构建获得重组自杀质粒pEX18Tc-Δsmp/cat,并转化入大肠埃希菌SM10λpir。通过接合将重组自杀质粒转入嗜麦芽寡养单胞菌D2野生株,经同源重组以cat基因替换野生株的smp基因,链霉素和氯霉素双抗培养基筛选接合子,15%蔗糖选择培养基筛选smp基因缺失株。PCR、酶切和测序验证重组自杀质粒pEX18Tc-Δsmp/cat构建正确,缺失株的分泌蛋白经12%SDS-PAGE证实嗜麦芽寡养单胞菌D2株smp基因缺失株失去表达SMP蛋白的能力。结果显示成功获得smp基因缺失的嗜麦芽寡养单胞菌D2株,为进一步研究其功能和胞外分泌途径奠定基础。
- 秦江楠毕春霞陈秀琴罗玮张卫任莹王斌闫志勇
- 关键词：嗜麦芽寡养单胞菌同源重组基因敲除
- 融合蛋白M-IL-2(^(88)Arg,^(125)Ala)在毕赤酵母中的表达及抗肿瘤活性研究
- 2014年
- 构建融合基因蜂毒肽(melittin)与人变构白介素2(M-IL-2(88Arg,125Ala))毕赤酵母分泌型表达载体pPICZαA/M-IL-2(88Arg,125Ala),转化毕赤酵母菌株KM71H,甲醇诱导筛选出的多拷贝阳性菌株表达融合蛋白,纯化融合蛋白,并进行初步的抗肿瘤活性研究。经测序及PCR鉴定,M-IL-2(88Arg,125Ala)正确插入pPICZαA中,电转化后,重组载体通过同源重组整合到酵母基因组中,SDS-PAGE检测在26 ku左右有明显目的条带,与理论相符。经Western blot鉴定具有较高抗原性及特异性。BCA法测定甲醇诱导96 h融合蛋白表达量达315.2 mg/L。CCK-8法检测融合蛋白对人卵巢癌细胞SKOV3细胞及Hela细胞生长抑制作用,表明纯化的融合蛋白在体外能抑制人卵巢癌细胞SKOV3细胞及Hela细胞的生长增殖。该研究为融合蛋白M-IL-2(88Arg,125Ala)大规模制备和动物实验以及临床前期研究奠定了基础。
- 李林钱冬萌邵光灿闫志勇宋旭霞陈豪王斌
- 关键词：毕赤酵母抗肿瘤活性
- 嗜麦芽寡养单胞菌SMP蛋白的胞外可调控分泌及序列分析被引量：1
- 2016年
- 为了观察和探讨嗜麦芽寡养单胞菌SMP蛋白胞外可调控分泌现象及其机制,将收集到的环境株菌D2株及9株临床株在含不同成分的培养基中培养,取培养液上清利用SDS-PAGE电泳观察SMP蛋白分泌情况;提取各菌株基因组DNA,PCR扩增其smp基因并进行克隆和序列测定;将获得的SMP氨基酸序列用Blastp、Megalign等进行分析,并构建系统发育树。结果显示,不同来源的嗜麦芽寡养单胞菌胞SMP蛋白分泌均存在可调控现象,酵母提取物可抑制该蛋白的分泌,而适宜浓度的麦芽糖则具有促进作用。序列对比及系统发育树分析显示,SMP的氨基酸序列具有种属的特异性,且临床株和环境株中存在一定的差异,临床株中该蛋白的氨基酸序列高度保守,而环境株则序列差异相对明显的,但不同来源的菌株SMP均含有保守的信号肽;提示该蛋白可能与其致病性相关,其胞外分泌的可调控机制值得进一步深入探究。
- 郭双双毕春霞杨丽刘兴雨秦江楠朱元祺王斌闫志勇
- 关键词：嗜麦芽寡养单胞菌蛋白分泌
