国家自然科学基金(31101395)
- 作品数：7 被引量：18H指数：3
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- 灰葡萄孢角质酶突变体的致病性分析(英文)
- 2013年
- 为印证角质酶在灰葡萄孢(Botrytis cinerea)穿透寄主植物组织过程中所起的重要作用,利用紫外诱变技术,在角质酶选择性培养基上筛选,获得了4个角质酶活性有变化的灰葡萄孢突变体菌株,与野生型菌株H2相比,突变体H2-M1和H2-M2表现出角质酶活性增强,而突变体H2-M3和H2-M4表现出角质酶活性下降。培养基上10次继代培养突变体菌株时未发现其产角质酶性状发生变化。无创伤接种番茄和草莓果实的试验结果表明,相比于野生型菌株,突变体H2-M1和H2-M2表现出致病力增强,而H2-M3和H2-M4的致病力弱于野生型菌株。但在有伤口果实上接种后,酶缺陷突变体H2-M3和H2-M4的致病力与野生型菌株相同。研究发现这4个突变体菌株产生其他致病因子(多聚半乳糖醛酸酶、果胶甲基多聚半乳糖醛酸酶、纤维素酶及毒素)的能力未受到紫外诱变的影响。研究结果表明,B.cinerea分泌的角质酶可能在其直接侵入寄主表皮的过程中起重要作用,但紫外诱变引起哪些基因位点突变,从而导致角质酶活性变化的原因则有待于进一步分析。
- 陈孝仁孙媛徐敬友纪兆林陈夕军童蕴慧
- 关键词：灰葡萄孢突变
- 恶疫霉实时定量RT-PCR分析中内参基因的选择被引量：4
- 2012年
- 为选择合适的内参基因用于分析植物病原卵菌恶疫霉(Phytophthora cactorum)的基因表达情况,本研究利用实时定量RT-PCR分析持家基因Ubc、Tub-b、WS21和WS41在恶疫霉生长发育阶段和侵染草莓阶段的表达差异,并利用软件geNorm、NormFinder和BestKeeper比较其表达稳定性。结果表明:基于公共数据库序列和其他疫霉菌同源序列设计的持家基因引物在恶疫霉中具有良好的扩增效率、反应有效性和特异性。通过分析,发现在恶疫霉的不同生长发育阶段(菌丝生长、游动孢子囊、游动孢子和休止孢萌发)和侵染草莓阶段(接种后3、5、7天),表现最为稳定的是Ubc基因。当使用多个内参基因时,Ubc和WS41是最适合校正恶疫霉基因表达数据的内参基因组合。本研究结果为利用实时定量RT-PCR准确分析恶疫霉基因相对表达量提供了重要的内参基因,也为其他疫霉菌的基因表达研究提供了有价值的参考。
- 陈孝仁张博月邢玉平童蕴慧徐敬友
- 关键词：内参基因恶疫霉实时定量RT-PCR草莓
- 辣椒疫霉CRN编码基因的克隆、转录特征及在与寄主互作中的作用被引量：3
- 2015年
- CRN(crinkling and necrosis-inducing protein)蛋白是一类卵菌特有的效应分子,然而目前对其功能和分子机制知之甚少。为分析CRN效应分子在辣椒疫霉(Phytophthora capsici)与植物互作中的作用,本研究利用前期转录组测序结果,对辣椒疫霉基因组数据库进行序列比对分析,获得了7个CRN编码基因的全长序列;采用RT-PCR方法分析其在辣椒疫霉生长发育阶段(菌丝、游动孢子囊、游动孢子、萌发的休止孢)和侵染寄主阶段(本氏烟(Nicotiana benthamiana)灌根1.5、3、6、12、24、36和72 h后)的转录水平,发现3个基因在辣椒疫霉生长发育阶段和侵染阶段上调表达;将这3个基因克隆测序,发现其编码蛋白均含有保守的LFLAK和HVLVVVP基序;在本氏烟上的基因瞬时表达结果表明,Pc559084和Pc570403能够抑制由致病疫霉elicitin蛋白INF1或老鼠促凋亡蛋白BAX诱发的植物程序性细胞死亡,并且Pc559084能够促进辣椒疫霉侵染植物。这些研究结果为理解CRN效应分子在辣椒疫霉致病过程中的作用提供了重要的实验数据。
- 陈孝仁李艳朋邢玉平徐敬友童蕴慧
- 关键词：辣椒疫霉程序性细胞死亡毒力
- 辣椒疫霉elicitins基因的克隆及瞬时表达分析被引量：1
- 2014年
- 通过挖掘辣椒疫霉中的外泌蛋白激发子elicitins的基因序列,分析其转录特征,克隆基因序列并进行瞬时表达,以阐明其在辣椒疫霉生长发育和侵染过程中的作用。本研究利用转录组测序结果和致病疫霉INF1序列作为比对序列,对辣椒疫霉基因组数据库进行elicitins序列挖掘。采用RT-PCR方法分析elicitins基因在辣椒疫霉生长发育(菌丝、游动孢子囊、游动孢子、萌发的休止孢)和侵染寄主阶段(本氏烟灌根1.5、3、6、12、24、36和72 h后)的转录水平。克隆elicitins基因序列,并与其他卵菌的elicitins进行序列比对,分析进化关系。在本氏烟上进行elicitins的瞬时表达分析。结果表明:经生物信息学分析获得14个含有信号肽编码序列的elicitins基因全长序列。新发现6个elicitins基因在辣椒疫霉生长发育和侵染寄主阶段差异表达。对这6个和之前报道的5个elicitins基因进行全长克隆,能够克隆出的10个elicitins都属于酸性elicitins,聚类分析可将其分在第一和第三聚类组。异源表达发现2个elicitins能够激发本氏烟产生过敏反应。本研究结果不仅为阐明elicitins在辣椒疫霉生长发育和侵染寄主过程中的作用提供了重要数据,也为植物抗疫病的基因工程提供了科学依据。
- 邹金城邢玉平孙华伟李强楷吴琦贾祖群张孝然徐敬友童蕴慧陈孝仁
- 关键词：辣椒疫霉ELICITIN植物抗病性
- 恶疫霉侵染的草莓SSH文库的构建及分析被引量：4
- 2011年
- 为了解草莓与恶疫霉[Phytophthora cactorum(Lebert&Cohn)J.Schrt]互作的分子机制,以感病草莓品种FDP821为材料,以接种恶疫霉的草莓冠部为处理、未接种健康生长的草莓冠部为对照,利用抑制性差减杂交技术构建恶疫霉侵染诱导的草莓差异表达的cDNA差减文库。PCR鉴定随机挑取的阳性克隆,显示插入片段大小为300～1 000bp。随机挑取109个克隆进行测序,获得92个草莓EST,分析表明来自50个草莓基因。BLASTX比对结果表明:这些草莓基因的功能涉及抗病防卫机制、抗氧化作用、物质代谢和蛋白质合成等。这为理解草莓冠腐病抗性分子机制奠定了重要的数据基础。
- 陈孝仁王振荣王振荣徐敬友童蕴慧
- 关键词：恶疫霉表达序列标签
- 利用mRNA差异显示技术克隆恶疫霉侵染诱导表达的草莓基因被引量：2
- 2012年
- 为了解草莓与恶疫霉互作的分子机制,以接种后3、5和7 d的感病草莓品种‘FDP821’的冠部为材料,利用mRNA差异显示技术研究‘FDP821’与恶疫霉亲和互作前后基因表达的差异,获得78条差异表达的cDNA片段,通过分析从中分离出恶疫霉侵染诱导表达的10个草莓基因cDNA片段。BLASTX在线分析表明,这些草莓基因的功能涉及呼吸作用、衰老和核苷运输与代谢等。为阐明草莓与恶疫霉互作的分子机制提供了重要的线索。
- 陈孝仁张博月May Bente Brurberg
- 关键词：恶疫霉MRNA差异显示技术
