浙江省医药卫生科学研究基金(2005B148)
- 作品数：3 被引量：19H指数：2
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- siRNA-cyclin D1对乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用被引量：7
- 2006年
- 研究小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对乳腺癌MCF-7细胞株cyclin D1表达的抑制及对细胞增殖的影响。化学合成针对cyclin D1基因的siRNA,转染MCF-7细胞株；分别应用荧光定量PCR和免疫印迹测定cyclin D1 mRNA和蛋白的表达,CCK-8测定细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期,软琼脂培养检测细胞克隆形成能力。在实验中,10、50、100 nmol/L siRNA-cyclin D1分别使MCF-7细胞cyclin D1 mRNA表达降低了57．85%、63．22%和68．02%,蛋白表达降低了51．13%、62．09%、77．68%。转染siRNA-cyclin D1后,细胞增殖受到抑制,细胞周期阻滞于G1期,软琼脂克隆形成率降低。结果提示siRNA可以有效抑制MCF-7细胞株中cyclin D1的表达,使细胞周期阻滞于G1期,从而抑制细胞增殖。
- 蒋磊陈日曙李继承
- 关键词：CYCLIN
- SiRNA特异性抑制cyclin D1的表达及其shRNA表达质粒的构建被引量：1
- 2006年
- 目的研究si RNA(small interfering RNA)对cyclin D1基因表达的抑制作用及shRNA表达质粒的构建。方法化学合成针对cyclin D1基因的si RNA,转染MCF-7细胞株;分别应用荧光定量PCR和免疫印迹检测cyclin D1mRNA和蛋白的表达;合成特异性cyclin D1的RNA干扰寡核苷酸序列,采用克隆技术,将其插人Psilencer2.1-U6质粒表达载体,构建cyclin D1shRNA(small hairpin RNA,shRNA)表达载体。结果化学合成的si RNA转染MCF-7细胞,48h后cyclin D1基因和蛋白表达都明显降低;构建特异性针对cyclin D1的shRNA表达质粒,酶切和测序结果显示,si RNA片段已成功插入Psilencer2.1-U6载体,载体构建成功。结论si RNA可以有效抑制MCF-7细胞株中cyclin D1的表达,并成功构建其shRNA表达质粒。
- 卓建新蒋磊陈日曙李继承
- 关键词：CYCLIND1SIRNASHRNA
- siRNA对乳腺癌细胞CyclinE表达和生长抑制作用被引量：11
- 2006年
- 研究siRNA对乳腺癌MCF-7细胞株cyclinE表达的抑制及对细胞生长的影响。化学合成针对cyclinE基因的小干扰RNA(siRNA),转染MCF-7细胞株;分别应用荧光定量PCR和免疫印迹测定cyclinEmRNA和蛋白质的表达,CCK-8测定细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期,软琼脂培养检测细胞克隆形成能力。10、50、100nmol/LsiRNA-cyclinE分别使MCF-7细胞cyclinE基因表达降低了24.7%、62.5%和71.0%,蛋白质表达降低了40.8%、66.5%和71.3%。转染siRNA-cyclinE后,G1期细胞增多,S期减少,增殖受到抑制,软琼脂克隆形成率降低。结果提示,在MCF-7细胞株中,导入针对cyclinE的siRNA,可有效抑制cyclinE的表达,进而使细胞增殖减缓,逆转其恶性表型。
- 蒋磊陈日曙李继承
- 关键词：CYCLINSIRNARNA干扰乳腺癌
