甘肃省科技攻关计划(2GS054-A41-005-01)
- 作品数：6 被引量：72H指数：6
- 相关作者：王蒂张俊莲张金文路平贾笑英更多>>
- 相关机构：甘肃农业大学甘肃省作物遗传改良与种质创新重点实验室更多>>
- 发文基金：甘肃省科技攻关计划国家高技术研究发展计划甘肃省农业生物技术研究与应用开发项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- pBI121载体酶切位点添加及拟南芥Na^+/H^+逆向转运蛋白基因表达载体的构建被引量：9
- 2006年
- 对pBI121载体GUS基因后的终止子序列(SacⅠ-EcoRⅠ)通过PCR扩增法进行了酶切位点的添加,即在SacⅠ后添加了XhoⅠ、在EcoRⅠ前添加了KpnⅠ。序列分析发现,两个酶切位点的添加是成功的,但扩增的终止子序列与原序列的同源性间有差异,即有4个碱基发生了变异,特别是第17个碱基位点出现了缺失。利用绿色荧光蛋白(GFP)对添加酶切位点载体进行了终止子活性的检测,结果发现,它与携带GFP的pBI121载体一样,GFP基因能正常表达,说明pBI121载体终止子序列酶切位点的添加是成功的。利用改造后的载体(pBI121-GZ)构建了CaMV35S启动子驱动AtNHX1基因的植物表达载体。
- 张俊莲王蒂张金文陈正华
- 关键词：终止子绿色荧光蛋白植物表达载体
- 农杆菌介导的马铃薯茎段遗传转化体系优化研究被引量：11
- 2006年
- 以甘肃主栽品种的茎段为外植体,研究了不同转化条件(菌液浓度、感染时间、预培养及共培养时间)对转化效率的影响,以及选择压和培养基对抗性出芽的影响,初步建立了马铃薯品种“陇薯3号”和“台湾红皮”的遗传转化体系并获得了转化植株。卡那霉素生根筛选和PCR鉴定结果表明,再生的转化植株假阳性率比较高,要获得预期的转基因植株群体需加大遗传转化工作中转基因植株的数量。
- 贾笑英路平王蒂
- 关键词：马铃薯根癌农杆菌茎段
- NaCl胁迫下拟南芥Na^+/H^+逆向转运蛋白基因(AtNHX1)的克隆及序列分析被引量：12
- 2005年
- 以NaCl胁迫处理的拟南芥幼苗叶片为材料,用TRIzol一步法RNA提取试剂盒抽提总RNA,通过RT-PCR方法和DNA序列测定,证实获得了拟南芥Na+/H+逆向转运蛋白基因(AtNHX1)的cDNA克隆。该cDNA全长1 617 bp,包括538个氨基酸编码区和1个终止密码,具有多个物种Na+/H+逆向转运蛋白基因的高度保守序列氨氯砒嗪脒(amiloride)的结合位点(LFFIYLLPPI)。序列同源性分析结果显示,该cDNA片段与原序列的同源性高达99.75%,与同科芸薹属油菜的同源性为89.00%,但与不同科植物的同源性较低,仅为60%~70%,表明该基因在进化上存在多样性,但它们都具有氨氯砒嗪脒结合位点,对Na+具有高度专一性,对植物的耐盐性起着重要作用。
- 张俊莲张金文陈正华王蒂
- 关键词：拟南芥NA^+/H^+逆向转运蛋白
- 用绿色荧光蛋白和洋葱表皮细胞检测拟南芥rd29A基因启动子活性的方法被引量：24
- 2005年
- 将rd29A基因的启动子与绿色荧光蛋白基因(GFP)融合在一起,构建成植物表达载体,并以CaMV35S启动子驱动的GFP基因的植物表达载体为对照,用基因枪介导法转化置于4种类型培养基上的洋葱表皮细胞。对其进行不同温度下的培养,16h后观察GFP基因瞬时表达水平的结果表明,rd29A启动子对高盐和脱水逆境的响应较温度显著,特别是在含PEG6000的培养基上,细胞无破损,绿色荧光强烈,适合于GFP的瞬时表达。而高盐由于易导致细胞出现离子毒害,不宜作为GFP瞬时表达的培养基。
- 张俊莲王蒂张金文陈正华
- 关键词：RD29A启动子洋葱表皮细胞拟南芥
- 转根癌农杆菌介导的AtNHX1基因马铃薯的获得被引量：6
- 2007年
- 构建重组表达质粒pBI12135-GZ+AtNHX1(带有CaMV35S启动子),通过农杆菌将其携带的液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白基因(AtNHX)转化马铃薯栽培品种“甘农薯2号”试管薯薄片和“克新2号”茎段。经根癌农杆菌侵染和共培养后,用50mgL-1卡那霉素+300mgL-1头孢霉素筛选抗性芽,试管薯薄片获得30株抗性植株,抗性植株再生率为37%;茎段未获得抗性植株。抗性植株的总DNA用AtNHX1基因的特异性引物进行PCR检测,结果27株为阳性,占90%。Southern杂交结果证实,外源基因多以双拷贝整合到马铃薯的基因组中。Northern杂交结果表明,转基因植株可以进行AtNHX1基因mRNA的正常转录,但植株间存在着转录量的差异。该研究为耐盐马铃薯的培育奠定了良好的基础。
- 张俊莲王丽王蒂张金文陈正华
- 关键词：马铃薯根癌农杆菌转基因植株ATNHX1基因
- 抗生素对根癌农杆菌的抑菌效果及对烟草叶片分化的影响被引量：17
- 2006年
- 研究了卡那霉素和6种头孢霉素(头孢曲松钠、头孢噻肟钠、头孢哌酮钠、头孢唑啉钠,头孢拉定和头孢他啶)对烟草叶片分化及对根癌农杆菌LBA4404和烟草转化植株的抑制效果。结果发现:不同烟草品种对卡那霉素的耐受性差异较大,品种CV为受体材料时,叶分化和茎段根再生的适宜浓度为50mg/L。品种T12为受体材料时,叶分化的适宜浓度为100mg/L,而茎段根再生则为200mg/L;头孢曲松钠和头孢噻肟钠对根癌农杆菌LBA4404的抑制效果好,并可使继代3次(60d)的烟草转化植株脱菌;不同浓度的6种头孢类抗生素对烟草叶片的分化影响不大。从头孢类抗生素对农杆菌和烟草转化植株的抑制作用、外植体的分化影响来考虑,在用农杆菌LBA4404作为介导菌株时,可选用200mg/L的头孢曲松钠或头孢噻肟钠来抑菌。
- 王丽张俊莲王蒂张金文王沛雅
- 关键词：抗生素农杆菌烟草抑菌分化
