陕西省科技攻关计划(2004K14-G3)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 相关作者：刘勇田玉梅张军峰陈新林张蓬勃更多>>
- 相关机构：西安交通大学医学院第一附属医院西安交通大学医学院第二附属医院西安交通大学更多>>
- 发文基金：陕西省科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 脑源性神经营养因子融合蛋白真核表达质粒的构建及表达被引量：1
- 2009年
- 目的构建以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因的脑源性神经营养因子(BDNF)融合蛋白真核表达质粒,并对其表达和定位进行研究。方法以人血白细胞DNA为模板,利用一对删除终止密码子的引物进行PCR获得BDNF基因片段,并将其与pEGFP-N1质粒载体连接,构建BDNF-EGFP融合蛋白真核表达质粒。以脂质体Lipo-fectamine2000转染Hela细胞,提取总RNA,通过RT-PCR方法检测BDNF-EGFP在转录水平的表达,Western blot及荧光显微镜进一步观察融合蛋白的表达定位。结果酶切和PCR鉴定证实BDNF基因片段正确克隆入载体质粒中,转染Hela细胞后,RT-PCR证实BDNF-EGFP融合蛋白在转录水平有表达,荧光显微镜观察显示BDNF-EGFP融合蛋白主要分布于细胞质中,Western blot结果显示Hela细胞培养液中有BDNF-EGFP融合蛋白存在。结论成功构建了BDNF-EGFP融合蛋白真核细胞表达质粒,BDNF-EGFP融合蛋白能够在Hela细胞中表达,主要位于细胞质中并可以分泌到细胞外。
- 石秦东张蓬勃田玉梅张军峰陈新林刘勇
- 关键词：脑源性神经营养因子绿色荧光蛋白融合蛋白HELA细胞
