广东省自然科学基金(23003)
- 作品数：24 被引量：70H指数：4
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- ELISA-CDC实验方法的研究
- 2010年
- 目的:为了提高对抗供者HLA-IgG类抗体(DSA)的识别能力,建立酶联免疫吸附-淋巴细胞毒交叉配型(ELISA-CDC)。方法:对已知HLA抗体特异性的PRA阳性血清进行ELISA-CDC实验,以比较ELISA-CDC与ELISA-PRA在同一特异性HLA抗体识别上的吻合率。选自ELISA-PRA阳性血清,24例已知HLA抗体的血清和针对性HLA-A、B、DR基因的淋巴细胞ELISA-CDC实验为第一组;24份已知HLA抗体的PRA阳性血清和无针对性HLA-A、B、DR基因的淋巴细胞ELISA-CDC实验为第二组;PRA阴性血清为阴性对照组。结果:PRA阳性血清与包含针对性HLA基因的淋巴细胞ELISA-CDC均为阳性;PRA阳性血清与不包含针对性HLA基因的淋巴细胞ELISA-CDC均为阴性;PRA阴性血清与上述2组淋巴细胞ELISA-CDC亦为阴性,吻合率100%。结论:ELISA-CDC能够表达出与ELISA-PRA一致的HLA抗体特异性。ELISA-CDC实验不需要活淋巴细胞,并且排除了非供者特异性抗体反应和非HLA抗体反应;并且,可以提纯供者HLA抗原低温长期保存,不仅便于移植前多个受者与单一供者交叉配型,而且是便于移植术后使用同一供者HLA基因进行监测DSA的一种简单、客观而且有效的方法。
- 郭伟肖露露于立新罗敏
- 关键词：酶联免疫吸附交叉配型HLA抗体肾移植
- 大鼠原位肝肾联合移植模型的建立被引量：2
- 2006年
- 目的建立一种简易、可靠、成功率高的大鼠肝肾联合移植模型。方法建立210例大鼠原位肝肾联合移植模型。SD大鼠作同品系异体移植的供、受体。自制部分手术小器械;整块切取供鼠肝、肾,受体手术采取腹部横切口,并改进肝上下腔静脉及肾动脉吻合方法;术后采取复温、补液、抗感染等综合措施。结果供体手术时间(38±5)min,受体无肝期(20±3)min,受体手术时间(81±13)min。供体器官热缺血时间≤4s,冷缺血时间≤83min,手术成功率87.1%(183/210),术后门静脉栓塞等近期并发症的发生率12.9%(27/210)。结论本模型具有操作相对简单、重复性好、成功率高、并发症少等优点,是良好的肝肾联合移植动物模型。
- 孙煦勇于立新刘小友袁谦
- 关键词：肝肾联合移植动物
- 定量检测穿孔素表达在大鼠移植肾急性排斥反应诊断中的意义被引量：1
- 2006年
- 目的探讨大鼠肾移植术后移植肾、外周血单核细胞(PBMCs)中穿孔素定量表达在急性排斥反应诊断中的意义。方法实验组由Wistar大鼠为供体,SD大鼠为受体。对照组供受体均为SD大鼠。术后第5天处死大鼠,切取移植肾组织行病理学检查和穿孔素mRNA定量检测,同时抽取外周血5ml定量检测穿孔素mRNA表达。比较2组的表达水平。结果实验组移植肾病理评分2~5分(3.43±0.98),对照组移植肾病理评分0~1分(0.71±0.49),2组比较差异有统计学意义(P<0.01)。对照组移植肾和外周血标本中穿孔素mRNA表达水平分别为(0.36±0.27)×106和(0.43±0.27)×106拷贝/μgRNA,实验组表达水平分别为(23.37±10.85)×106和(61.03±41.25)×106拷贝/μgRNA,差异有统计学意义(P<0.001)。结论移植肾组织和外周血单核细胞内穿孔素mRNA表达水平可作为急性排斥反应的诊断标志;外周血单核细胞可代替移植肾组织作为检测免疫活化基因mRNA表达水平的标本,实现急性排斥反应诊断的无创性要求。
- 于立新黄若彤刘小友付绍杰孙煦勇袁谦
- 关键词：荧光定量PCR技术急性排斥反应穿孔素
- 大鼠异体双侧肾移植模型的建立被引量：2
- 2007年
- 目的建立一种大鼠异体异位双侧肾移植的动物模型。方法SD大鼠为供体,Wistar大鼠为受体,共30对。原位灌注、切取连带腹主动脉、下腔静脉的供体双肾;在受体髂腰静脉水平切除一段腹主动脉和下腔静脉;将供体腹主动脉、下腔静脉上下开口与受体腹主动脉、下腔静脉断口分别吻合;供体膀胱瓣与受体膀胱全层缝合。结果整个移植过程<180min,热缺血时间<5s,冷缺血时间<90min,血管吻合时间<50min。30例手术中,25例成功,手术成功率83.3%。在未服用任何免疫抑制剂的情况下,手术成功大鼠术后存活时间均超过1周。结论大鼠双侧肾移植模型是一种可行性好,成功率高的肾移植动物模型。与单侧模型相比,具有增加取材次数、获取配对资料、提高工作效率的优点,值得推广。
- 陆京伯于立新叶俊生
- 关键词：肾移植动物模型
- 低温缺氧条件下脂质体介导的寡核苷酸对人脐静脉内皮细胞-304的转染
- 2004年
- 目的研究在Euro-Collins溶液(ECs)中,低温(4 ℃)缺氧条件下体内阳离子脂质体转染剂(Invivoliposome)介导NF-κB诱捕物寡核苷酸(NF-κB decoy ODN)在人脐静脉内皮细胞株ECV-304中的转染效率。方法(1) 将ECV-304在含10%胎牛血清的RPMI 1640培养液中以37 ℃、5% CO2的条件培养,待生长至单层融合后,进行试验。(2) 使用前配制脂质体-ODN复合物,脂质体与ODN 的+/-电荷比率为2。(3) 应用荧光显微镜和流式细胞仪,观察在ECs中、4 ℃条件下,ODN浓度分别为0.50、0.75、1.00、1.25 μmol/L时,缺氧保存2、4、6、8 h后ECV-304的平均荧光强度(MFI)和ODN的胞内分布;同时设立裸ODN转染为对照组,观察对ECV-304的转染效率。结果在ECs中、4 ℃缺氧保存条件下,随着保存时间的延长和脂质体-ODN浓度的升高,ECV-304的MFI增强,保存6 h后MFI基本达到了最大强度,并且大部分ODN均位于细胞核内;而ODN的细胞摄取率无差异。但与裸转染相比,MFI和细胞摄取率均有显著差异性。结论在ECs中和低温缺氧条件下,脂质体可以高效地将NF-κB decoy ODN转染到ECV-304细胞核,为供体器官在基因调控水平的保护研究提供了实验依据。
- 丰贵文于立新张宏涛赵显国
- 关键词：低温缺氧脂质体寡核苷酸脐静脉转染
- 脂质体介导NF-κB decoy ODN低温缺氧对ECV-304的转染及复氧后对其黏附分子mRNA表达的影响被引量：1
- 2004年
- 目的 :探讨在Euro Collin’s(ECs)中 ,低温缺氧条件下脂质体 (invivoliposome)介导NF κB诱捕物寡核苷酸 (NF κBdecoyODN)对人脐静脉内皮细胞株 (ECV 30 4 )的转染效率以及复氧后对其NF κB活性及受其调控的黏附分子mR NA表达的影响 .方法 :应用脂质体 /decoyODN、脂质体 /scrambledODN复合物 ,在低温缺氧的ECs转染ECV 30 4 .应用荧光显微镜和流式细胞仪 ,观察在 4℃条件下 ,decoyODN浓度为 1 .0 μmol/L的ECs缺氧保存ECV 30 4 6h后的平均荧光强度 (MFI)和摄取率以及ODN的胞内分布 ;同时设立裸ODN转染为对照 ,观察脂质体介导decoyODN对ECV 30 4的转染效率 .应用凝胶电泳迁移改变试验 (EMSA)分析ECV 30 4低温缺氧保存 6h/复氧后不同时间的NF κB活性以及decoyODN对NF κB活性抑制效果 .利用RT PCR方法检测各组ECV 30 4的ICAM 1 ,VCAM 1以及P selectin的mRNA表达 .结果 :ECV 30 4在ECs中 4℃缺氧保存 6h后 ,脂质体介导ODN对ECV 30 4转染的MFI为 1 0 72 .7± 33.1 ,是裸ODN转染的 91 .1倍 ,细胞对ODN的摄取率为 (93.1±2 .6 ) % ,是裸ODN转染的 71 .5倍 ;脂质体介导ODN转染的ECV 30 4 ,荧光显微镜下可见部分荧光颗粒分布于胞质 ,胞核内呈强荧光颗粒 ,而裸ODN转染的ECV 30 4 ,胞质内偶见少量荧光 。
- 丰贵文于立新赵显国张宏涛
- 关键词：脂质体转染黏附分子
- 群体反应性抗体与器官移植被引量：2
- 2010年
- 群体反应性抗体(PRA)是移植中最重要的免疫因素。研究证明移植排斥是由体液免疫介导的,PRA分析能反映受者人类白细胞抗原(HLA)的致敏状态,在移植前预测排斥反应的发生和移植后预警移植物丧失,使器官移植后各种排斥反应的发生率显著降低。目前PRA尤其是特异性抗供者抗体(DSA)在肾、心脏、肺等实体器官移植中的作用及其前瞻性应用研究成为热点。本文就PRA与器官移植的研究进展进行综述。
- 罗敏肖露露
- 关键词：群体反应性抗体排斥反应
- 高PRA介导肾移植后延迟性超急排斥反应被引量：1
- 2008年
- 目的:了解HLA-A、B、DR、DQ表现型为纯合子的终末期肾脏疾病患者的PRA水平,并研究其与肾移植预后的关系。方法:对2006年8月至2007年8月间在我院登记等待首次肾移植的438例终末期肾脏疾病患者HLA、PRA情况以及其中1例PRA65的HLA纯合子患者肾移植效果进行分析。HLA基因分型采用PCR-SSP技术,PRA、抗体强度及抗体特异性分析采用ELISA技术,数据统计采用SPSS11.5统计软件。结果:438例患者中有HLA纯合子12例,杂合子426例;12例纯合子中PRA阳性者6例,阳性率50,平均HLA抗体强度为55,广泛致敏率达100;426例杂合子中PRA阳性者65例,阳性率15.26,平均HLA抗体强度为28,广泛致敏率为40;纯合子与杂合子之间的PRA阳性率、平均HLA抗体强度和广泛致敏率相比差异均有统计学意义(P<0.05),纯合子高PRA的风险大(OR=5.29,95CI:1.67～16.70);1例PRA65的纯合子患者术前经血浆置换、蛋白免疫吸附、静滴丙种球蛋白治疗使PRA降低至阴性,在舒莱免疫诱导下行尸体肾移植术,供受者HLA抗原2个错配,术后移植肾功能逐渐恢复,第3天开始PRA呈阳性并逐渐升高,伴随临床逐渐出现尿少、血压升高、移植肾区疼痛等排斥反应征象,血清肌酐逐渐升高,移植肾B超见动脉阻力指数逐渐升高,提示急性排斥反应,采用术前有效清除HLA抗体的所有方法再次治疗无效,于术后第36天因移植物失功行移植肾切除。结论:HLA纯合子产生高PRA的风险大;文中1例PRA阳性的HLA纯合子早期移植肾功能恢复随后出现不可逆排斥反应致移植肾失功的情况,提示近年来随着各种有效清除HLA抗体的治疗方法不断用于临床导致了抗体介导的延迟性超急排斥反应(AMDR)的出现从而使移植肾失功;高PRA患者行肾移植术需高度慎重,应尽可能避开受者PRA峰值时的全部抗体谱来选择供体。
- 肖露露罗敏于立新王彦斌魏强余玉明
- 关键词：群体反应性抗体人类白细胞抗原纯合子
- 南方汉族等候肾移植终末期肾功能衰竭患者HLA基因多态性分析被引量：9
- 2010年
- 目的对我国南方地区3911例等候肾脏移植的患者进行HLA-A,B,DRB1基因表达的回顾性研究,以探讨在因肾脏疾病导致患者最终并发终末期肾功能衰竭(ESRD)进程中的HLA免疫遗传易感性及其相对风险作用。方法采用聚合酶链反应-序列特异性引物扩增(PCR-SSP)技术进行HLA-A,B,DR基因分型,应用SPPS13.0软件包统计分析ESRD患者中HLA抗原频率、基因频率、HLA-A,B,DR三个位点的单倍型频率(HF)、连锁不平衡参数、相对危险度(RR)及优势比(OR)。结果ESRD患者中表达出HLA-A抗原19个,HLA-B抗原40个,HLA-DR抗原14个;其中呈现抗原频率显著增高(PC<0.0001,PC值即P值乘以所检测的某一位点的抗原数)的是HLA-B75(RR=1.222,OR=1.479)、DR4(RR=1.146,OR=1.294),DR17(RR=1.541,OR=2.639);呈现出抗原频率显著降低(PC<0.0001)的是HLA-DR8(RR=0.812,OR=0.697)、DR9(RR=0.878,OR=0.793);ESRD患者中具有显著连锁不平衡单倍型(HF>0.5%)10条,分别为A1-B37-DR10,A2-B7-DR17,A29-B7-DR10,A30-B13-DR7,A33-B13-DR17,A33-B44-DR17,A33-B46-DR17,A33-B58-DR17,A33-B60-DR17和A33-B75-DR17,其中A33-B75-DR17、A33-B58-DR17频率高达7.93%和11.74%。结论研究发现HLA-B75、DR4和DR17可能对南方地区肾脏疾病患者最终并发ESRD具有独立易感关联,而表达HLA-DR8、DR9的肾脏病患者将可能不易并发ESRD;单倍型A33-B75-DR17高频率出现说明HLA-B75,DR17不仅具有独立易感作用还可能对肾脏病患者最终并发ESRD具有集合易感作用。这个发现对于等候肾脏移植患者选择合适供体以提高移植后患者生存时间和远期移植效果具有临床指导意义。
- 韩志明肖露露于立新罗敏
- 关键词：终末期肾功能衰竭人类白细胞抗原
- 穿孔素和颗粒酶B mRNA在肾移植术后急性排斥反应时的变化被引量：3
- 2006年
- 王亦斌于立新徐健刘小友胡斌
- 关键词：肾移植术后颗粒酶B穿孔素MRNA反应时
