吉林省科技厅青年科研基金(201101046)
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
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- Shh在散发性甲状腺髓样癌中的表达及其临床意义研究
- 2012年
- 目的通过检测SonicHedgehog信号通路关键分子Shh在散发性甲状腺髓样癌表达情况，探讨其与散发性甲状腺髓样癌临床病理特征的关系及临床意义。方法应用免疫组织化学方法检测11例甲状腺髓样癌患者癌组织及其癌旁组织病理蜡块标本中Shh的表达情况，分析其与临床病理特征的关系。结果Shh蛋白主要表达于细胞膜与细胞质中。甲状腺髓样癌组织中Shh阳性表达率72．7％（8／11）明显高于癌旁组织的9．1％（1／11）。癌组织中Shh的表达与患者性别及年龄均无关（P〉0．05），而与肿瘤的TNM分期有关（P〈0．05）。Shh在肿瘤直径≥1cm和直径〈1cm的表达阳性率分别为100％和20％。差异有统计学意义（P〈0．01）。Shh在有淋巴结转移的肿瘤组织中和无淋巴结转移的肿瘤组织中的表达阳性率分别为100％和40％，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论Shh信号通路的主要配体Shh蛋白在散发性甲状腺髓样癌中表达升高，并与肿瘤发生、分期及淋巴结转移有关，提示Shh信号通路的异常激活在散发性甲状腺髓样癌中发挥一定的作用，Shh蛋白为散发性甲状腺髓样癌预后判断指标及潜在的治疗靶点。
- 边学海张广张大奇周乐李世杰孙辉
- 慢病毒介导Shh基因转染对甲状腺乳头状癌细胞生物学性状的影响
- 2014年
- 目的将Shh基因用慢病毒载体转染甲状腺乳头状癌(PTC)原代细胞中,观察Shh对PTC细胞体外生物学性状的影响。方法在建立慢病毒载体pGC-FU-Shh-GFP转染PTC细胞,稳定过表达Shh蛋白模型基础上,设立转染实验组和阴性对照组。MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期,Transwell实验检测细胞迁移能力,检测Sonic hedgehog通路相关基因mRNA与蛋白表达变化,与阴性对照组检测结果进行比较。结果高表达Shh细胞生长曲线较陡直,生长速度较阴性对照组显著提高(P<0.05);Shh-PTC细胞24h后S期上升至20.88%,Shh-PTC细胞48h后G1期上升至83.78%;实验组穿透滤过膜细胞数量明显增加(P<0.05)。转染后SMO、Gli1、PTCH蛋白的表达均高于对照组,表达量分别是对照组的1.154倍,1.062倍和1.205倍。结论 Shh明显促进PTC细胞的增殖、迁移和侵袭能力。在PTC的发生、发展中Sonic hedgehog通路激活是激发或促进因素,该信号通路可能促进PTC的生长、转移。
- 边学海徐为然张广张纯海周乐李世杰孙辉
- 关键词：甲状腺乳头状癌慢病毒SHH
- 慢病毒介导音猬因子基因转染对甲状腺乳头状癌细胞生物学性状的影响被引量：1
- 2014年
- 音猬信号（Shh）通路涉及到肿瘤细胞的生长、转移等方面^[1]。启动信号Shh在人甲状腺乳头状癌（PTC）组织中表达增高，并与分期及淋巴结转移有关。我们用已构建的慢病毒载体pGC-FU-Shh-GFP转染PTC原代细胞，稳定过表达Shh^[2]，观察PTC细胞的增殖、侵袭及迁移能力的变化，探讨Shh通路在PTC的发生、发展中的作用。
- 边学海薛辉徐为然张纯海张大奇李世杰孙辉
- 关键词：基因转染生物学性状慢病毒介导音猬因子慢病毒载体
- 人Shh基因重组过表达慢病毒载体的构建与鉴定被引量：3
- 2013年
- 目的构建人Shh基因过表达慢病毒载体，转染293T细胞，建立稳定转染人Shh基因的293T的细胞系。方法设计引物引入AgeI酶切位点，使用PCR方法从质粒中扩增Shh基因的编码区序列，对所扩增出的目的片段回收纯化。将AgeI内切酶消化后目的片段交换连接人pGC-FU载体，构建Shh慢病毒表达载体pGC-FU-Shh。酶切验证并测序正确后，将质粒pGC-Fu-Shh与携带GFP的慢病毒辅助包装载体共转染293T细胞，荧光显微镜检测慢病毒载体转染细胞的结果，重组质粒pGC-Fu-Shh的测序，Westernblotting验证Shh在转染293T细胞中表达。结果转染293T细胞后荧光显微镜，24h后观察到绿色荧光蛋白的表达，基本判断Shh表达，说明转染成功。重组质粒pGC-FU-Shh的测序Shh基因片段大小1386bp。通过Westernblotting检测转染293T的样品，可以观察到72～95KDa处条特征带与Sbh融合蛋白相吻合，判断Shh表达。通过PCR扩增获得了Shh基因，将Shh克隆到慢病毒转移质粒pC-C-FU中，并在293T细胞中包装产生慢病毒颗粒。结论成功构建了pGC-FU-Shh-GFP慢病毒过表达载体，获得了稳定转染的细胞株。
- 边学海赵吉生徐为然张广张大奇周乐孙辉
- 关键词：甲状腺乳头状癌SHH免疫组织化学
