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瘤背石磺肌肉生长抑制素基因的克隆及组织表达分析被引量：2: 2017年; 为探究石磺由海洋向陆地进化过程中肌肉生长和发育的分子机制,实验以石磺科贝类转录组数据为基础,采用RACE方法从瘤背石磺肌肉中首次克隆到MSTN cDNA的全长并做了相应的组织表达分析。结果显示,瘤背石磺MSTN基因cDNA全长2667 bp,包括1650 bp的开放阅读框,374 bp的5′端非翻译区,643 bp的3'端非翻译区,共编码549个氨基酸。预测该基因编码的蛋白质原子总量为8776,分子式为C2774H4331N783O862S26,分子质量约为63.27 ku,理论等电点为6.02,信号肽预测结果显示,N端具有21个氨基酸长度的信号肽。瘤背石磺MSTN具有MSTN的共同特征,包括蛋白酶水解位点RSRR和C端多肽生物活性区以及9个保守的半胱氨酸残基。通过进化树分析,瘤背石磺MSTN与加州海兔MSTN的亲缘关系最近。RT-PCR结果显示,MSTN基因在各个组织中均有表达;含肌纤维组织中的表达量低于内脏器官的表达量,在肝胰腺中的表达量最高,腹足表达量最低。MSTN基因一级结构具有很高的保守性,说明该基因在进化上的限制性和功能的重要性;同时该基因在石磺非肌肉组织中表达,表明该基因不仅有抑制肌肉生长的作用,还参与其他生命活动的调节。; 刘欣史艳梅王冬凤沈和定杨铁柱李杰李柏航; 关键词：瘤背石磺肌肉生长抑制素基因克隆 RACE

瘤背石磺钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅳ(CaMKⅣ)基因的克隆及组织表达被引量：1: 2019年; 钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅳ(CaMKⅣ)是一种广泛存在于真核生物中的调控因子,在生物体内具有多种生理功能。为了探究瘤背石磺中CaMKⅣ的作用和分子机制,为进一步阐述CaMKⅣ的生理功能提供科学的理论依据。本实验以瘤背石磺神经节为实验材料,利用RACE-PCR技术克隆得到CaMKⅣ基因的cDNA序列,并进行生物信息学分析和qRT-PCR实验。结果显示,瘤背石磺CaMKⅣ基因的cDNA全长1603bp,开放阅读框为1032bp,5′非编码区315bp,3′非编码区256bp,共编码343个氨基酸;预测该基因编码的多肽链原子数量是5490,分子量约为3.87ku,理论等电点6.12,分子式为C1741H2768N452O514S15,N端信号肽由1~29个氨基酸组成。氨基酸序列比对及系统进化树结果显示,瘤背石磺CaMKⅣ基因与加州海兔、光滑双脐螺CaMKⅣ基因的亲缘关系最为接近,其系统进化分析与传统的形态学分类相吻合。荧光定量PCR结果显示,CaMKⅣ基因在各个组织均有表达,其中在腹足的相对表达量最高,其次是背部皮肤、口器,而在神经节组织、蛋白腺、肠、肝胰腺等脏器组织的相对表达量较低,初步推测,该基因在瘤背石磺的神经调节中发挥重要作用,或为生物机体感知外界环境变量因素的分子基础。本实验为今后进一步了解瘤背石磺神经结构生理功能的调节以及与CaMKⅣ基因功能研究奠定理论支撑,也为探究海洋动物由海洋向陆地进化过程中对环境的适应机制提供参考。; 梁威杨铁柱沈和定许国绿顾冰宁薛宝宝; 关键词：瘤背石磺基因克隆实时荧光定量PCR 组织表达分析

瘤背石磺Os-NMHC的克隆、表达分析以及NMHC进化节点探讨被引量：1: 2018年; 本研究以石磺科贝类转录组数据库为基础,克隆出一条Ⅱ型非肌肉型肌球蛋白重链（NMHCⅡ）基因的全长c DNA,将其命名为Os-NMHC。该序列全长为6 057 bp,包括5 733 bp的开放阅读框,236 bp的5＇端非翻译区,88 bp的3＇端非翻译区,共编码1 910个氨基酸。预测蛋白质等电点为5.26,相对分子质量为220.46 k D。通过Phyre2程序和Pymol软件构建蛋白质三级结构图,预测蛋白质二级结构以α螺旋和β折叠为主;通过Clustalx和dna MAN软件进行氨基酸序列比对,发现其与爪蟾NMHCⅡA序列一致度为60.37%,其与爪蟾NMHCⅡB序列相似度为61.47%;通过Bayes软件构建系统进化树,发现其与加州海兔亲缘关系最近。通过q RT-PCR技术检测,发现该基因在四种石磺的背部、腹部、腹足部、肺囊、心脏、神经节中均有不同程度的表达。种间表达水平与进化趋势相一致,依次为：瘤背石磺≥平疣桑椹石磺〉里氏拟石磺〉紫色疣石磺。; 李杰史艳梅沈和定杨铁柱顾冰宁许国绿; 关键词：石磺

响应面法优化胃蛋白酶酶解瘤背石磺肌肉蛋白工艺参数被引量：4: 2015年; 为了优化胃蛋白酶酶解瘤背石磺肌肉工艺参数,以温度、p H、时间和液固比为试验因子,以水解度为响应值,在单因素试验的基础上,根据Box-Behnken中心组合设计试验原理,采用4因素3水平的响应面试验设计确定最佳工艺条件。结果表明,最佳酶解工艺参数为温度35℃,p H 1.5,时间2 h,液固比93 m L·g-1。经过验证,实际水解度为11.38%,与理论值的RSD为0.26%。; 刁亚沈和定程知庆姚理想吴欣杜文俊; 关键词：瘤背石磺胃蛋白酶响应面

4种石磺科贝类的胆甾醇含量测定被引量：3: 2015年; 将瘤背石磺(Onchidium struma)、里氏拟石磺(Paraoncidium reevesii)、平疣桑椹石磺(Platevindex mortoni)和紫色疣石磺(Peronia verruculata)样品,经活体解剖取四种石磺肌肉组织,运用高效液相色谱法对其可食部分进行了胆甾醇含量测定。结果表明:瘤背石磺胆甾醇平均浓度最高,达5 870.00 mg/kg;平疣桑椹石磺、紫色疣石磺、里氏拟石磺的胆甾醇平均质量分别为3 480.00、388.00、316.00 mg/kg,统计分析显示四种石磺可食部分的胆甾醇含量差异显著。; 孙变娜沈和定吴洪喜姚理想; 关键词：石磺高效液相色谱法胆甾醇

干燥方法对瘤背石磺多糖抗氧化性和还原力的影响被引量：18: 2015年; 以瘤背石磺为原料,采用传统的水提醇沉法提取瘤背石磺多糖,研究真空冷冻干燥和烘箱干燥两种方式对多糖抗氧化活性的影响。以Vc作为阳性对照,通过清除DPPH自由基、·OH、O_2^-·和亚硝酸盐来检测多糖的抗氧化活性,用分光光度法检测其总还原力。结果表明,瘤背石磺的冻干多糖比烘干多糖具有更高的抗氧化活性,冻干多糖对DPPH自由基、·OH和亚硝酸盐的IC50分别为4.14,2.96,2.05mg/mL,清除率与多糖浓度呈明显的量效关系;但是两种多糖的总还原力不强,对O_2^-·基本没有清除能力;在同等浓度下,多糖的抗氧化活性均弱于Vc。; 程知庆沈和定姚理想刁亚; 关键词：瘤背石磺多糖抗氧化还原力

瘤背石磺体内重金属铜和镉的净化研究被引量：1: 2015年; 为降低瘤背石磺(Onchidium struma)体内超标重金属铜和镉的含量,保证其食品安全,作者通过底泥添加木鱼石土(富含锌、硒等)、饲料添加蛋白核小球藻(Chlorella pyrenoidosa)粉以及维生素C对瘤背石磺体内Cd和Cu进行净化,探究不同实验组对瘤背石磺体内Cd和Cu的净化效果。结果表明,对照组单纯用玉米粉暂养对瘤背石磺重金属的排出有一定的效果,但远远低于试验组在底泥中添加木鱼石土、在饲料中添加蛋白核小球藻粉及维生素C的效果。在瘤背石磺产品生产过程中,通过在底泥中添加木鱼石土、在饲料中添加蛋白核小球藻粉及维生素C能高效地降低其体内重金属铜和镉的含量,达到可食用的目的,保证食品安全。; 管菊沈和定刘宸王冬凤李多; 关键词：重金属铜镉

四种石磺的脂质及脂肪酸组成分析被引量：1: 2016年; 为比较分析紫色疣石磺、瘤背石磺、里氏拟石磺和平疣桑椹石磺4种石磺科贝类的脂质和脂肪酸组成,实验采用气相色谱/质谱法对4种石磺的脂肪酸组成进行分析研究。结果显示:1 4种石磺科贝类肌肉组织总脂(TL)主要由磷脂(PL)、游离脂肪酸(FFA)、胆固醇(Cho)和甘油三酯(TG)组成;紫色疣石磺肌肉组织中的PL/TL高达73.12%,显著高于其他3种石磺(P<0.05);瘤背石磺肌肉组织中的TG/TL达2.75%,显著高于其他3种石磺(P<0.05);紫色疣石磺肌肉组织中的FFA/TL高达19.16%,显著高于其他3种石磺(P<0.05);2 4种石磺肌肉组织中的脂肪酸组成较为平衡;瘤背石磺和紫色疣石磺肌肉组织中的总饱和脂肪酸(ΣSFA)含量均达35%以上;总单不饱和脂肪酸(ΣMUFA)含量从大到小的顺序依次是瘤背石磺(20.63%)、紫色疣石磺(20.49%)、里氏拟石磺(19.61%)、平疣桑椹石磺(19.42%);平疣桑椹石磺肌肉组织中的总多不饱和脂肪酸含量(ΣPUFA)达34.25%,显著高于其他3种石磺(P<0.05)。4种石磺中的C20∶5n3(EPA)含量均大于C22∶6n3(DHA)的含量。研究表明,4种石磺的脂质和脂肪酸组成存在较大差异,可能与其生存环境以及生活习性的差异有关,4种石磺的肌肉组织具有较高的脂类营养价值。其中,紫色疣石磺和瘤背石磺含有丰富的人体必需脂肪酸,且营养均衡,适宜食用;里氏拟石磺具有特殊生理活性的脂肪酸成分含量较高。; 姚理想杨铁柱朱敏沈和定李柏航刁亚; 关键词：石磺脂质脂肪酸 GC-MS

瘤背石磺表皮生长因子基因的克隆、结构及进化分析被引量：2: 2017年; 首次在瘤背石磺(Onchidium struma)中克隆得到一种新的表皮生长因子(EGF)的cDNA序列全长。EGF基因cDNA的全长为1158bp,命名为Os-egf1,其中开放阅读框长度为846 bp,编码一条包含281个氨基酸残基的多肽链。根据氨基酸序列比对和结构域分析结果发现其含有2个保守的EGF结构域和1个EGF-like结构域,每个结构域中均包含至少6个半胱氨酸残基,且形成CX7 CX4-5 CX10-13CXCX8 C结构,其结构域由C1~C3、C2~C4和C5~C6之间形成的3个二硫键维持,符合表皮生长因子家族及其相关蛋白的特征结构域,但其余氨基酸序列与现有相关基因差异较大,推测可能是一种新的EGF-like基因。利用MEGA6.0软件构建Os-egf1与EGF家族相关蛋白的系统进化树,表明EGF家族蛋白具有一定的物种特异性。; 杨铁柱沈和定史艳梅刘欣吴欣李杰; 关键词：EGF

瘤背石磺肌肉胶原蛋白提取工艺优化及其结构特征分析: 2019年; 在酸性条件下,用胃蛋白酶酶解瘤背石磺肌肉并提取胶原蛋白,采用正交试验法确定提取胶原蛋白的最佳工艺,利用SDS-PAGE、红外扫描、氨基酸组成分析方法综合分析瘤背石磺肌肉胶原蛋白的基本结构特征。实验结果显示,酶解温度为35℃,酶添加量8 mg/mL,酶解时间24 h时,提取率最大为73.09%。所制备的胶原蛋白由3条肽链构成,纯度高,几乎不含杂带,甘氨酸含量最高,约占25%,其次是特征氨基酸含量,有特征吸收峰,具有完整的三螺旋结构,且稳定性高,是典型的Ⅰ型胶原蛋白。因此,开发利用瘤背石磺作为胶原蛋白新来源具有研究价值,且为深入研究瘤背石磺肌肉胶原蛋白的功能性质提供数据基础。; 朱敏钱朝曦沈和定许国绿; 关键词：瘤背石磺胶原蛋白结构特征

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