国家自然科学基金(81071480)
- 作品数：5 被引量：8H指数：2
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- 相关机构：南京医科大学第二附属医院南京医科大学南京师范大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- MicroRNA-140靶向组蛋白去乙酰化酶7基因及在大鼠骨髓间充质干细胞成软骨分化过程中的表达分析被引量：2
- 2013年
- 目的检测组蛋白去乙酰化酶7（HDAC7）是否为MicroRNA（miRNA）-140的靶基因，并研究在大鼠骨髓间充质干细胞（ratMSCs）成软骨诱导分化中miRNA-140和HDAC7表达的相关性。方法利用生物信息学、双荧光素酶报告基因检测以及Western blot法鉴定miRNA-140与HDAC7之间的靶作用关系。选取4周龄Sprague—Dawley（SD）雄性大鼠采用全骨髓贴壁法进行体外分离培养纯化得到大鼠骨髓间充质干细胞并向成软骨方向诱导分化，同时采用实时定量PCR和Western blot法检测miRNA-140和HDAC7的表达水平。结果双荧光素酶活性分析结果提示，miRNA-140靶结合人HDAC7基因的3’UTR。将miRNA-140mimics转染大鼠骨髓间充质干细胞后抑制HDAC7的蛋白表达。在大鼠骨髓间充质干细胞成软骨诱导分化过程中，miRNA-140表达上调，而HDAC7表达下降。结论miRNA-140通过靶结合HDAC7基因的3’UTR抑制HDAC7表达，二者在大鼠骨髓间充质干细胞成软骨诱导分化过程中表达负相关，提示miRNA-140通过抑制HDAC7蛋白表达保护软骨组织。
- 高原王伟林金德张春丽温传俊沈干
- 关键词：组蛋白去乙酰化酶大鼠骨髓间充质干细胞
- 小鼠胚胎干细胞分化细胞永生化后致瘤性研究被引量：3
- 2012年
- 目的研究小鼠胚胎干细胞（embryonicstemcells，ESC）诱导分化的血管内皮细胞永生化后的致瘤现象。方法体外培养系中，将诱导的小鼠ESC的拟胚体分化为圆形细胞。通过脂质体将人端粒酶催化亚基（human telomerase reverse transeriptase，hTERT）基因转染诱导分化中的圆形细胞，应用RT—PCR及免疫组织化学等方法分析、观察诱导分化的血管样结构的组成细胞和被hTERT基因转染的圆形细胞的形态和生物学特性。并将基因转染的细胞植入裸鼠皮下，观察其致瘤性。结果携带hTERT基因、从ESC分化而来的圆形细胞TEC3，在体外可大量增殖，培养的前2d（48h），细胞数就增加了1倍多，至72h细胞数增加了12倍，持续传代，端粒酶活性高表达，95％细胞表达Flk-1、CD34和vWF，并有管道化生长特性。将细胞植入裸鼠皮下后1周有肿瘤形成。结论转染hTERT基因可使小鼠ESC分化细胞持续增殖，植入裸鼠体内具有致瘤性。
- 沈干丛笑倩
- 关键词：胚胎干细胞致癌性试验
- 基于双荧光素酶报告基因系统建立miR-140生物传感器
- 2014年
- 目的:利用双荧光素酶报告基因系统构建可检测miR-140活性的生物传感器。方法:首先,在psiCHECK-2双荧光报告基因质粒的多克隆位点插入miR-140成熟体的4个拷贝反义序列,构建miR-140sensor。其次,将miR-140 sensor和miR-140 mimics共转染HEK-293T细胞,利用双荧光素酶报告基因系统检验miR-140 sensor的功能。最后,转染miR-140 sensor至大鼠骨髓间充质干细胞(rat MSCs),分析在成软骨诱导中miR-140的活性变化,并与miR-140的表达水平相比较。结果:在HEK-293T细胞中,相对于阴性对照组,miR-140 sensor与miR-140 mimics共转能明显降低49%(20 nmol·L-1)和65%(50 nmol·L-1)的荧光活性。将转染miR-140 sensor的rat MSCs成软骨诱导7 d后,荧光活性降低43%,提示miR-140活性升高,与RT-qPCR法检测的miR-140表达水平相一致。结论:构建的miR-140 sensor是一种简单方便有效的miRNA传感器,可用于检测miR-140活性。
- 高原邹阳于影林金德张春丽温传俊沈干
- 关键词：荧光素酶实时荧光定量聚合酶链反应
- 乙醇对肌肉卫星细胞myogenin表达的影响
- 2012年
- 目的:探讨慢性酒精中毒过程中乙醇对肌肉卫星细胞myogenin表达的影响及其在酒精性肌肉损伤中的作用。方法:(1)体外实验:取Sprage-Dowley大鼠,原代培养大鼠肌肉卫星细胞,设实验组(乙醇作用组)与对照组(正常培养液对照组),培养细胞至80%融合时,更换为分化培养液,对实验组与对照组卫星细胞形成的肌管计数,并观察卫星细胞myogenin的表达。(2)动物实验:予小鼠乙醇饮食(1个月)制造乙醇中毒动物模型,在损伤后肢肌肉后第2、7天取组织切片观察损伤部位肌肉卫星细胞增殖及新肌束形成情况。结果:实验组肌管计数及卫星细胞myogenin的表达均低于对照组(P<0.05),但乙醇饮食小鼠损伤肌肉标本中卫星细胞及新肌束数量与正常饮食小鼠差异无统计学意义(P>0.05)。结论:乙醇可以通过降低肌肉卫星细胞的myogenin表达抑制其肌性分化,减少卫星细胞形成肌管的数量。
- 沈干吴京Gordon Huggins
- 关键词：肌肉卫星细胞乙醇MYOGENIN分化
- 人脐带间充质干细胞辅助的异种脂肪移植的实验研究被引量：3
- 2013年
- 目的:探讨脐带间充质干细胞在体内辅助游离移植脂肪组织的可行性。方法:组织块法培养人脐带间充质干细胞,与大鼠脂肪混合移植至大鼠背部皮下,对照组未添加细胞单纯脂肪移植。移植后6个月取材,通过组织观察、HE染色及免疫组化进行分析。结果:组织块法可获取脐带间充质干细胞,组织移植6个月后取材,实验组与对照组在体积及重量上差异无统计学意义。HE染色两组也未见差异,免疫组化可见特异性对抗人GAPDH反应阳性细胞存在。结论:以异种脐带间充质干细胞辅助游离移植脂肪组织与单纯脂肪移植无差异,脐带间充质干细胞辅助游离移植脂肪组织有待进一步研究。
- 王克勇张福业王永刚孔静徐林刘品周积美邱成鲁冯秋元沈干
- 关键词：脐带间充质干细胞脂肪
