国家重点基础研究发展计划(2010CB912003)
- 作品数：7 被引量：5H指数：2
- 相关作者：徐志卿杨予涛马克乾闫竹青李杰更多>>
- 相关机构：首都医科大学北京市神经外科科研究所嘉兴出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 小鼠甘丙肽1型受体在HEK293A细胞中的表达和内化
- 2011年
- 目的:克隆小鼠甘丙肽1型受体(mGalR1)基因,构建其真核表达载体,并观察该基因在HEK293A细胞中的表达和内化。方法:应用RT-PCR方法,以小鼠下丘脑RNA为模板,扩增获得甘丙肽I型受体(mGalR1)基因并定向克隆到pEGFP-N1真核表达载体;mGalR1-pEGFP表达载体瞬时转染HEK293A细胞,利用激光共聚焦显微技术观察mGalR1在给予甘丙肽(10-7mol/L)0、5、10、15min刺激时的内化情况。结果:克隆得到正确的mGalR1基因全长序列,其cDNA为1 047bp,共编码348个氨基酸;共聚焦显微镜结果表明mGalR1主要在膜上表达,经甘丙肽刺激5～15min后受体下膜进入胞浆。结论:成功构建真核表达载体mGalR1-pEGFP并在HEK293A中表达;在甘丙肽刺激下小鼠甘丙肽1型受体存在内化现象。
- 李晓晓徐舒李慧宫夏霓徐志卿
- 关键词：真核表达载体内在化
- POZ锌指蛋白在发育和肿瘤发生中的作用被引量：1
- 2013年
- POZ锌指蛋白是一类在进化中高度保守的蛋白,具有多种重要的生物学功能。POZ锌指蛋白主要作为一种转录抑制因子而存在,通过POZ结构域招募一些转录辅阻遏物而调节靶基因的表达。近年来的研究发现,POZ锌指蛋白在发育和肿瘤的发生中有着重要的作用,综述5个POZ锌指蛋白在肿瘤的发生和生物体发育中的作用及功能,为人们进一步了解POZ锌指蛋白的功能提供资料。
- 梅竹杨予涛徐志卿
- 关键词：发育肿瘤发生
- GST-Smad4融合蛋白的表达与纯化被引量：1
- 2013年
- 旨在原核表达Smad4基因,纯化获得GST-Smad4融合蛋白。以人表皮HaCaT细胞的cDNA为模板,利用PCR扩增含有BamH I和SalI酶切位点的Smad4基因;然后将其克隆到pGEX-4T-1原核表达载体中,将正确的重组载体转入大肠杆菌BL21(DE3);用IPTG诱导表达,再利用MagneGST particles亲和纯化GST-Smad4融合蛋白;最后通过Western blot鉴定此融合蛋白。结果显示,成功构建pGEX-4T-1-Smad4原核表达载体;30℃条件下,0.2 mmol/L的IPTG能诱导出大量的可溶性GST-Smad4蛋白;经MagneGST particles纯化的GST-Smad4蛋白可被Smad4的抗体特异识别。纯化的GST-Smad4蛋白可用于后续的生物学研究。
- 梅竹杨予涛徐志卿
- 关键词：SMAD4原核表达蛋白纯化
- 甘丙肽抑制大鼠垂体腺瘤细胞体外侵袭性被引量：2
- 2011年
- 目的探讨甘丙肽对大鼠垂体腺瘤细胞侵袭性的作用及其受体机制。方法提取大鼠垂体腺瘤GH3细胞RNA,反转录后测定甘丙肽及其3个受体亚型的表达情况;将大鼠垂体腺瘤GH3细胞分为对照组、甘丙肽药物处理组和选择性甘丙肽2型受体激动剂AR-M1896组,利用MTT方法检测对照组和实验组在给药后12、24和36 h各分组细胞活力,观察其增殖情况;应用Transwell侵袭模型观察各组腺瘤细胞侵袭能力。结果甘丙肽与其3个受体亚型在大鼠垂体腺瘤GH3细胞中均有表达,其中以受体2表达量较高;各组细胞在药物处理12、24和36 h时细胞增殖无显著差异;GH3细胞Transwell侵袭实验中甘丙肽药物组侵袭细胞数量明显少于对照组(P<0.01);甘丙肽受体激动剂AR-M1896组与对照组相比腺瘤细胞侵袭性明显降低(P<0.05);AR-M1896与甘丙肽对GH3细胞的抑制效果差异无显著性。结论甘丙肽能明显抑制大鼠垂体腺瘤细胞的侵袭性,且此作用可能主要由甘丙肽2型受体介导。
- 马克乾孙静李杰闫竹青鲁润春贾旺徐志卿
- 关键词：脑垂体腺瘤侵袭性甘丙肽GH3细胞
- 人Pokemon蛋白锌指结构域的表达与纯化
- 2015年
- 旨在原核表达Pokemon基因的锌指结构域,纯化获得GST-Zinc finger的融合蛋白。以人胶质瘤T98G细胞的c DNA为模板,利用PCR扩增带有Bam H I和Sal I酶切位点的人Pokemon基因的锌指结构域,然后将其克隆到p GEX-4T-1原核表达载体中。将正确的重组载体转入大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达,再利用Magne GST particles亲和纯化Zinc finger融合蛋白,最后通过Western blot鉴定此融合蛋白。结果显示,成功构建p GEX-4T-1-Zinc finger原核表达载体;30℃条件下,0.2 mmol/L的IPTG能诱导出大量的可溶性GST-Zinc finger蛋白;经Magne GST particles纯化的GST-Zinc finger蛋白可被识别Pokemon锌指结构域的抗体特异识别。纯化的GST-Zinc finger蛋白可用于后续的生物学研究。
- 刘莉李岳亭张萌萌杨予涛徐志卿
- 关键词：锌指结构域原核表达蛋白纯化
- 甘丙肽对二甲萘醌引起的人肾胚A型细胞株氧化损伤的保护作用及机制被引量：1
- 2012年
- 目的探讨甘丙肽（GAL）对二甲萘醌（DMNQ）引起的人肾胚A型细胞株（HEK-293A）细胞氧化损伤的保护作用及生物学机制。方法将HEK-293A培养细胞分为对照组，DMNQ药物组以及DMNQ＋GAL／AR—M1896药物组，利用常规聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测HEK-293A细胞内GAL及其不同受体的mRNA表达水平，MTS方法检测不同药物处理后HEK-293A的细胞活性。结果HEK-293A细胞GAL及2型受体（GalR2）的mRNA表达水平较高。同时，用不同浓度DMNQ处理下发现存在剂量相关毒性效应，IC50值约为13．4uM。利用15uM DMNQ处理细胞，同时孵育1uM及100nMGAL可以显著改善DMNQ引起的细胞活力降低，细胞活力较DMNQ处理组分别提高24．4％、18．8％。GalR2激动剂AR—M18961uM及100uM也可得到与GAL相似的作用，细胞活力较DMNQ处理组分别提高8．7％、8．9％。结论GAL对DMNQ引起的HEK-293A细胞氧化损伤具有保护作用，这种作用可能通过GalR2发挥效应。
- 徐舒孙静李晓晓徐志卿
- 关键词：甘丙肽
- 甘丙肽2型受体在HEK293A细胞中的同源二聚化研究被引量：2
- 2011年
- G蛋白偶联受体二聚化在受体的转运和信号转导中起着重要的调节作用。为了验证甘丙肽2型受体(GalR2)是否形成同源二聚体,本实验分别构建了N端带FLAG和HA标签的GalR2融合蛋白,并转染到HEK293A细胞中。Western blot发现,除了相当于GalR2分子量的位置有条带之外,在大约2倍于GalR2分子量的位置也有条带,提示GalR2可能是以二聚体的形式存在的。共转染HA-GalR2和FLAG-GalR2,通过免疫共沉淀方法,在抗HA的免疫片段中检测到了FLAG的免疫活性,且在相当于单倍分子量和二倍分子量上均有条带;反过来,在FLAG的免疫片段中检测HA的免疫活性,条带同样出现在单倍分子量和二倍分子量上。以上结果表明甘丙肽2型受体之间形成了同源二聚体。
- 闫竹青吕琼金艳燕李杰马克乾杨予涛徐志卿张进禄
- 关键词：G蛋白偶联受体同源二聚体免疫共沉淀
