国家自然科学基金(39970289)
- 作品数：6 被引量：12H指数：3
- 相关作者：朱全胜丘钜世李扬乔慧梁惠珍更多>>
- 相关机构：中山大学中山大学附属第一医院中山医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部“211”工程卫生部科技专项基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 逆转录病毒介导的HSV-TK基因对人骨肉瘤细胞的杀伤作用被引量：4
- 2001年
- 目的 探讨骨肉瘤基因治疗的可行性。方法 采用逆转录病毒介导的HSV -TK基因转移和GCV治疗的方法进行研究。结果 成功构建含HyTK基因的重组逆转录病毒载体DORHyTK ;采用DOTAP将其转入PA3 17细胞中进行包装 ,筛选 ,并进行病毒滴度测定、收获病毒上清体外感染骨肉瘤细胞株OS73 2和SAOS -2。分别用PCR和RNA斑点杂交的方法证明假病毒中不含有复制活性病毒 ,HSV -TK基因已整合到宿主细胞基因组中 ,并获得表达。MTT比色法测定结果显示GCV对OS73 2TK和SAOS -2TK细胞均有明显的杀伤作用 ,且前者强于后者。旁观者效应在高细胞密度接种条件下强于低细胞密度 ,在SAOS -2细胞中的作用强于OS73 2。结论 HSV
- 乔慧丘钜世朱全胜
- 关键词：骨肉瘤HSV-TK基因逆转录病毒
- 联合应用自杀基因/前药系统和放疗对人骨肉瘤细胞的杀伤作用被引量：5
- 2002年
- 目的观察联合应用自杀基因/前药系统和放疗对人骨肉瘤细胞的杀伤作用。方法以大肠杆菌JM107为模板,PCR扩增出CD基因,测序并将其插入真核表达质粒pEGFP-C1中,构建EGFPCD融合基因。用DOTAP将分别含有CD和HSV-TK的两种质粒pEGFP-CD和tgCMVHyTK同时导入人骨肉瘤细胞SAOS-2,经G418和潮霉素B共同筛选后,于荧光显微镜下观察阳性克隆细胞株SAOS-2CDTK。运用PCR和Northernblot方法检测SAOS-2CDTK细胞中的CD和HSV-TK基因及其表达。用MTT法检测单独或联合应用两种前药(GCV、5-FC)对SAOS-2CDTK细胞的存活率、“旁观者效应”以及细胞对放疗敏感性的影响。结果测序图和酶切鉴定证明CD基因的克隆和含EGFPCD融合基因的重组真核表达质粒pEGFP-CD的构建是成功的。荧光显微镜观察SAOS-2CDTK细胞胞质呈现绿色荧光。PCR和Northernblot分析均表明SAOS-2CDTK细胞中含有CD和HSV-TK两个基因,并获得mRNA水平的表达。与单一前药相比,联合应用两种前药时,SAOS-2CDTK细胞的存活率下降,“旁观者效应”及细胞对放疗的敏感性增强。结论联合应用两种自杀基因/前药系统和放疗可增强细胞毒作用,为骨肉瘤的治疗提供了一条新的有效途径。
- 乔慧丘钜世朱全胜王晋
- 关键词：骨肉瘤基因疗法胞嘧啶胸苷激酶
- 骨肉瘤中p53、p21^(WAF1)、cyclinA蛋白的表达及其意义被引量：3
- 2004年
- 目的 探讨骨肉瘤中 p5 3、p2 1WAF1、cyclinA蛋白的表达及相互关系。 方法 应用免疫组化方法对骨肉瘤组织及正常软组织中p5 3、p2 1WAF1、cyclinA的蛋白表达进行检测。结果 正常软组织中p5 3表达均阴性 ,2 8% (14 / 5 0 )骨肉瘤中可检测到p5 3蛋白的异常积累 ;正常软组织中均有不同程度的 p2 1WAF1蛋白的阳性表达 ,5 2 % (2 6 / 5 0 )骨肉瘤 p2 1WAF1阴性 ,骨肉瘤中p2 1WAF1的蛋白表达表现为p5 3蛋白依赖性的方式 ;正常组织中cyclinA为阴性 ,75 6 % (2 8/ 37)骨肉瘤中存在cyclinA蛋白过表达 ,cyclinA与p2 1WAF1的表达呈负相关 (r=- 0 874 ,P <0 0 1) ;p2 1WAF1蛋白的表达与骨肉瘤的分化呈正相关 (r =0 6 87,P<0 0 1)。结论 p5 3蛋白的异常积聚、p2 1WAF1的失表达及cyclinA的过表达参与了骨肉瘤失控的增生及肿瘤的形成。
- 李扬梁惠珍罗灿峤邓家德朱全胜丘钜世
- 关键词：骨肉瘤P53CYCLINA肿瘤形成
- p21WAF1/CIP1、PCNA在骨巨细胞瘤中的表达及意义
- 2004年
- 目的 探讨 p2 1WAF1/CIP1、PCNA在骨巨细胞瘤中的表达特点及其与骨巨细胞瘤的分化和复发的关系。方法 应用LSAB免疫组织化学方法对 38例骨巨细胞瘤中的 p2 1WAF1/CIP1、PCNA的表达进行检测。结果 6 6 8%的骨巨细胞瘤中可检测到p2 1WAF1/CIP1的阳性表达 ,其阳性表达主要位于分化好的多核巨细胞的细胞核内 ,分化好的骨巨细胞瘤(Ⅰ级 )中 p2 1WAF1/CIP1的表达明显高于分化差组 (Ⅱ、Ⅲ级 ) (P <0 0 1)。 38例骨巨细胞瘤均可检测到PCNA的阳性表达 ,其阳性表达主要位于单核基质细胞的细胞核内 ;未复发组及复发组中 p2 1WAF1/CIP1、PCNA的表达无显著性差异 (P >0 0 5 )。结论 骨巨细胞瘤中p2 1WAF1/CIP1的表达与骨巨细胞瘤的分化相关 ,可作为骨巨细胞瘤分化的参考指标。
- 李扬董健文廖威明梁惠珍朱全胜丘钜世
- 关键词：骨巨细胞瘤增殖细胞核抗原P21WAF1/CIP1PCNA分化
- 骨肉瘤中D类周期素的mRNA表达
- 2005年
- 目的探讨骨肉瘤中D类三种周期素——D1、D2及D3mRNA的表达。方法运用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)及半定量RTPCR方法检测正常软组织和骨肉瘤中3种周期素DmRNA表达。结果正常软组织中检测不到周期素D1mRNA的表达,而骨肉瘤组织中均可检测到,但多数表达较弱;正常软组织及骨肉瘤组织中均存在周期素D2、周期素D3mRNA的表达,骨肉瘤中周期素D2、周期素D3的mRNA表达均明显高于软组织中的表达。结论周期素D2、D3可能在骨肉瘤失控的增生中起主要作用。
- 邓家德李扬丘钜世凌艳英冯泰宝朱全胜
- 关键词：骨肉瘤周期素多聚酶链反应
- Rb基因增强HSV-TK/GCV系统“旁观者效应”的机制研究
- 2003年
- 目的探讨Rb和HSV-TK基因共转染增强HSV-TK/GCV系统“旁观者效应”的可能性及其机制。方法构建含长度为1.65kbRb基因的真核表达质粒pcDNA3.1-Rb,用DOTAP将pcDNA3.1-Rb以及携带HSV-TK基因的质粒tgCMV/HyTK分别或共同导入骨肉瘤细胞株OS732。应用RT-PCR和Northernblot检测TK和Rb基因的表达;用细胞计数、流式细胞仪分析和软琼脂克隆形成实验观察细胞的生长状况;用半定量RT-PCR法、WesternBlot和罗氏黄荧光传输法检测裂隙连接蛋白基因Connexin43的表达和细胞间裂隙连接信息通讯的能力;用MTT法和混合共培养实验分别检测各种细胞对GCV的敏感性和HSV-TK/GCV系统的“旁观者效应”。结果成功地构建了真核表达质粒pcDNA3.1-Rb;得到三种转基因的细胞株OS732TK、OS732Rb、OS732RbTK;并在mRNA水平检测到OS732TK和OS732RbTK细胞内HSV-TK基因的表达,在OS732Rb和OS732RbTK细胞内存在内源性和外源性Rb基因的表达;与OS732相比,OS732Rb和OS732RbTK细胞的形态发生改变,其生长速度减慢,软琼脂形成集落能力降低,细胞周期阻滞于G0G1期;OS732Rb细胞的Connex-in43表达和细胞间信息通讯能力增强;仅TK阳性细胞OS732TK和OS732RbTK的存活率与GCV的浓度存在剂量依赖性关系,但在与TK阴性细胞混合共培养实验中。
- 乔慧丘钜世朱全胜李扬向锦郑树森
- 关键词：RB基因HSV-TK/GCV系统旁观者效应基因疗法
