国家重点基础研究发展计划(2012CB114601)
- 作品数：6 被引量：10H指数：2
- 相关作者：钟伯雄叶露鹏李季生钱秋杰王少华更多>>
- 相关机构：浙江大学承德医学院湖北省畜禽育种中心更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划浙江省科技厅项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 高温胁迫对家蚕血液蛋白质组的影响被引量：1
- 2015年
- 高温饲育环境是造成夏秋蚕减产的主要原因之一。为了研究持续高温对家蚕血液蛋白质组的变化,采用双向电泳和质谱技术,分析了高温胁迫后家蚕原种和杂交种血液蛋白的表达差异。结果发现,有87.79%的蛋白点表现出加性模式,有6.73%表现为超显性,而5.49%则表现为显性不足。在鉴定的28个差异蛋白中,热激结合蛋白(h2)、氨基酰化酶(h9)、血液保幼激素结合蛋白(h14)、羟基丙酮酸异构酶(h23)和家蚕生物钟蛋白(h24)5个蛋白在杂交种和原种中差异较大。这些结果暗示了杂交种可能是通过热激关联蛋白的高度表达来直接抵御高温胁迫,通过加速能量代谢和生长发育来避免高温带来的伤害。
- 夏爱华李娜贾漫丽毛晓霞李季生杨贵明
- 关键词：高温胁迫家蚕蛋白质组双向电泳质谱
- 热激条件下家蚕杂交组合及其亲本品种血液免疫应激相关蛋白质的差异表达分析被引量：1
- 2015年
- 以家蚕品种秋丰(Q)、白玉(B)及其杂交组合秋丰×白玉(QB)为试验材料,利用双向电泳和质谱技术研究40℃热激处理对家蚕幼虫血液蛋白质组的影响,分析热激处理后亲本品种和杂交组合血液免疫相关蛋白的表达差异。在双向电泳图谱显示的供试家蚕品种及其杂交组合分离较好的蛋白点中,有87.67%的蛋白点表现为加性效应(additivity)的表达模式,7.15%的蛋白点表现超显性(over-dominance)表达模式,5.17%的蛋白点表现为超隐性(under-dominance)表达模式。对25个差异表达的蛋白点进行质谱鉴定,根据基因注释有7个蛋白点与免疫应激有关。在短时间的高温刺激后,热激关联蛋白(h2)、肽聚糖识别蛋白(h25)、亲环素样蛋白(h26)、促进蛋白(h27)和载脂蛋白Ⅲ(h28)等5个蛋白点在2个亲本品种及其杂交组合的幼虫血液中均呈现上调表达趋势,尤其是杂交组合与2个亲本品种相比上调表达更为显著。研究结果表明,家蚕在热激条件下,短时间内可以通过提高免疫系统的应激能力以增强自身对环境胁迫的耐受性,而且杂交组合与亲本品种相比在抗逆性方面表现突出,对高温刺激更加敏感,这也在一定程度上揭示了家蚕的抗逆性存在杂种优势。
- 李季生夏爱华李娜贾漫丽高玉军杨贵明钟伯雄
- 关键词：热激反应杂交组合血液
- BmDaxx对家蚕细胞和幼虫组织凋亡的调控作用(英文)
- 2019年
- 采用荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)方法体外扩增并鉴定家蚕死亡结构域相关蛋白基因(BmDaxx)。结果表明:BmDaxx及其下游基因BmFadd和BmDredd的表达水平在BmDaxx过表达后显著升高,但在BmDaxx的RNA干扰后,BmDaxx和BmFadd的表达水平显著降低;BmDaxx过表达增加半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3/7(cystein-asparate protease-3/7,caspase-3/7)活性,而RNA干扰则降低caspase-3/7活性。用caspase-3/7抑制剂处理BmN细胞后,与对照组相比,BmDaxx、BmFadd和BmDredd的转录水平降低。在家蚕吐丝期,BmDaxx在丝腺中的表达量显著高于其他组织,这与丝腺的凋亡退化过程相一致。注射caspase抑制剂后,凋亡相关基因BmDaxx、BmFadd和BmDredd的表达水平显著降低。由此可以认为,BmDaxx及其下游基因BmFadd和BmDredd之间存在着相互作用,它们在BmN细胞和丝腺细胞凋亡中起着关键作用。
- 矫鹏肖颖刘震陈瑞婷陆喦辛虎虎缪云根
- 关键词：家蚕凋亡丝腺半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶
- 家蚕丝腺生物反应器表达狂犬病病毒核蛋白被引量：3
- 2013年
- 【目的】采用家蚕丝腺生物反应器这一蛋白高效表达系统,尝试建立一种高效、低廉、稳定生产狂犬病病毒核蛋白(RVNP)的技术体系,为生产基因工程疫苗奠定基础。【方法】通过RT-PCR方法克隆获得RVNP序列,采用家蚕丝胶蛋白基因(Ser1)启动子为特异性启动子,将RVNP构建到含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)筛选标记基因的piggyBac转座子表达载体(pBA3EGFP)中,并采用显微注射转基因家蚕技术构建家蚕丝腺生物反应器。【结果】G1代通过EGFP标记的筛选获得转基因家蚕阳性蛾区26个,蛾圈阳性率为59.09%。PCR实验证实RVNP已经整合到家蚕基因组中,Western blot分析表明RVNP蛋白可能附着于丝胶蛋白并随家蚕吐丝行为分泌到蚕茧中。【结论】获得了能够表达外源的RVNP蛋白的转基因家蚕品系,该系统有望成为高效、低廉、稳定地生产狂犬病基因工程疫苗的技术体系之一。
- 尤征英危浩阮系真叶露鹏王少华周继勇钟伯雄
- 关键词：狂犬病PIGGYBAC家蚕
- piggyBac转座系统的功能改进及在哺乳动物中的应用被引量：5
- 2014年
- piggyBac(PB)转座系统具有转座效率高、删除精确、半随机插入和携带片段较大等优点。但是作为一种转基因实验的工具,特别是在哺乳动物个体水平的转基因方面,还需要提高其转基因效率,并降低外源基因随机插入对内源基因破坏的风险。近年来的研究结果显示,PB转座系统得到了进一步改进:采用PB转座酶与DNA特异性结合蛋白融合而构成的融合型转座酶,表现出外源片段有插入到染色体靶向位点的倾向;采用突变体筛选的方法提高了PB转座酶的活性,获得了只具有切除活性而没有插入活性的新型PB转座酶;采用PB转座系统与细菌人工染色体(Bacterial artificial chromosomes,BAC)载体联合使携带的外源片段长度提高到了207 kb。改进后的PB转座系统在基因组研究、基因治疗、诱导多能干细胞(Induced pluripotent stem cells,iPSCs)诱导及其分化方面发挥了较大的作用。文章对PB转座系统的最新研究进展和应用前景进行了综述。
- 钱秋杰车家倩叶露鹏钟伯雄
- 关键词：PIGGYBAC转基因转座
