国家重点基础研究发展计划(2012CB114602)
- 作品数：8 被引量：15H指数：3
- 相关作者：王伟吴小燕夏庆友刘仕平冯启理更多>>
- 相关机构：西南大学华南师范大学湖北文理学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 添食不同含氮物质对家蚕产丝量及丝素蛋白基因表达的影响被引量：3
- 2015年
- 给家蚕5龄幼虫分别添食大豆蛋白、NH4Cl和尿素后,调查家蚕产丝量的变化,并采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测蚕体丝腺组织中丝素重链基因(fib H)的表达变化,探究适合用于提高家蚕产丝量的含氮物质。5龄起蚕连续6 d按照0.45 mg/(头·d)的剂量添食尿素后,茧层率比对照组增加15.7%,且幼虫的体质量及丝腺体积都比对照组有所增加;5龄幼虫添食大豆蛋白和NH4Cl后茧层率无明显增加。qRT-PCR检测5龄起蚕按照上述剂量添食尿素120 h后,后部丝腺中fib H的表达量比对照组增加了1.5倍。上述结果再次证实了家蚕5龄幼虫添食尿素后可以增加产丝量,并且表明尿素可以促进蚕体后部丝腺中fib H基因的表达。
- 朱巧莹李敏杰陈燕冰冯启理邓惠敏
- 关键词：家蚕尿素实时荧光定量PCR
- 家蚕翅原基表皮蛋白基因BmWCPs的生物信息学分析与激素诱导表达特征被引量：1
- 2016年
- 翅原基表皮蛋白（WCPs）在昆虫翅的发育中起着非常重要的作用。为了研究家蚕翅原基表皮蛋白基因BmW CPs的表达是否与蜕皮激素（20E）的调节有关,用生物信息学方法分析BmW CPs基因的序列结构与系统进化特点,并通过半定量RT-PCR检测蜕皮激素对部分BmW CPs基因表达的诱导作用。11个BmW CPs基因成簇分布在家蚕基因组中,除BmW CP6和BmW CP10分别分布在第7号、第21号染色体外,其余的BmW CPs均分布在第22号染色体上;11个BmW CPs的核苷酸序列长度为588～2 670 bp,编码115～312个氨基酸,蛋白质分子质量12～35 kD,等电点4.30～7.45;11个BmW CPs基因的ORF内均有内含子插入,81.82%的基因含有2～3个内含子,内含子长度50～5 958 bp,在50～300 bp之间分布频率最高,占46%。将解剖获取的上蔟1 d蚕体的翅原基进行体外培养,并用浓度为2μmol/L的20E直接处理12 h后再常规培养18 h,提取翅原基总RNA并反转录合成cD NA,经半定量RT-PCR检测样品中BmW CPs的表达水平显著上调。依据上述研究结果初步认为,用蜕皮激素直接处理12 h后再常规培养18 h的脉冲作用,可诱导基因组中成簇分布的BmW CPs在翅原基组织中大量表达,以利于家蚕完成翅原基的变态发育。
- 朱子丹章佳玲冯启理邓惠敏
- 关键词：家蚕蜕皮激素
- 果蝇翅原基发育分化的主要过程及分子机理被引量：2
- 2013年
- 翅原基发育分化与昆虫的个体发育紧密联系,对昆虫翅发育的研究有助于阐述昆虫的发育过程。另外,翅的形成是一些农林害虫泛滥的主要原因之一,研究翅发育分化有助于我们从翅发育的角度控制农林害虫。目前,翅发育分化在果蝇Drosophila中研究已较为深入详细。果蝇翅发育分化主要包括4个阶段:翅原基(wing disc)的确定,前-后(antero-posterior,A-P)和背-腹(dorso-ventral,D-V)组织中心(organizing center)的建立,翅区(wing region)的确定,以及翅区的进一步分化。具有homeobox序列的基因(homeobox基因)如Engrailed(En)、Apterous(Ap)和Ultrabithorax(Ubx),分泌蛋白如Wnt家族成员Wingless(Wg)及TGF-β超家族成员Decapentaplegic(Dpp)和Hedgehog(Hh),以及翅原基特有的核蛋白编码基因Vestigial(Vg),共同调控了翅原基的正常发育分化。本文综述了果蝇翅原基发育分化的过程及分子机理方面的研究发现,为翅原基的研究提供了参考。
- 欧俊郑思春冯启理刘琳
- 关键词：果蝇发育分化分子调控分泌蛋白
- Autophagy precedes apoptosis during the remodeling of silkworm larval midgut
- Although several features of apoptosis and autophagy have been reported in the larval organs of Lepidoptera du...
- Eleonora FranzettiZhi-Jun HuangYan-Xia ShiKun XieXiao-Juan DengJian-Ping LiQing-Rong LiWan-Ying YangWen-Nian ZengMorena CasartelliHui-Min DengSilvia CappellozzaAnnalisa GrimaldiQingyou XiaQili FengYang CaoGianluca Tettamanti
- 关键词：APOPTOSISAUTOPHAGYINSECTSMETAMORPHOSISMIDGUT
- MET Is Required for the Maximal Action of 20-Hydroxyecdysone during Bombyx Metamorphosis
- Little is known about how the putative juvenile hormone(JH) receptor,the bHLH-PAS transcription factor MET,is ...
- 郭恩Qianyu HeShumin LiuLing TianZhentao ShengQin PengJingmin GuanMingan ShiKang LiLawrence I.GilbertJian Wang曹阳李胜
- 关键词：MET20-HYDROXYECDYSONEMETAMORPHOSIS
- 文献传递
- 家蚕Bmyan基因的克隆表达和作为microRNA7靶基因的验证被引量：4
- 2015年
- microRNAs(miRNAs)是一类长约22 nt的非编码RNA,通过与其靶基因3′端非翻译区(3′-UTR)的结合来调节各项生命活动。克隆表达家蚕Bmyan基因,验证其是否是bmo-miR-7的靶基因对于深入研究家蚕变态发育机制有重要意义。基于同源性检索和PCR扩增,克隆了家蚕Bmyan基因CDS全长,编码476个氨基酸。序列分析表明,家蚕YAN蛋白的氨基酸序列保守,含SAM-PNT和ETs结构域。芯片数据、RT-PCR和定量PCR的检测结果表明,Bmyan在五龄3 d的家蚕头部、体壁、卵巢中高量表达,在其余组织中低量表达或不表达。在幼虫期,Bmyan表达水平相对较低,但在上蔟期和蛹期前4 d高量表达。通过3′RACE克隆了Bmyan基因的3′-UTR。RNAhybrid在线软件预测了其3'-UTR上bmo-miR-7的两个靶位点。构建了含有Bmyan基因3′-UTR和荧光素酶报告基因的转染载体,将该载体与bmo-miR-7的mimics序列共转染到家蚕胚胎细胞系BmE中,通过测定荧光素酶的活性,证明了Bmyan基因是bmo-miR-7的靶基因。本研究为进一步揭示bmo-miR-7和Bmyan在家蚕体内的生物学功能奠定了基础。
- 刘仕平黄亚玺尹纪云吴小燕周兰庭王伟夏庆友
- 关键词：家蚕克隆表达MICRORNA靶位点
- Biochemical characterization and functional analysis of the POU transcription factor POU-M2 of Bombyx mori
- POU-M2 is a homeodomain transcription factor which plays important roles in the development and silk synthesis...
- Liu linaLi yuWang yejingZhao pengWei shuguangLi zhenzhenChang huaipuHe huawei
- 关键词：TRANSCRIPTIONAL
- 文献传递
- 利用Bac-to-Bac杆状病毒系统超量表达家蚕let-7簇microRNAs
- 2016年
- 【目的】利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统超量表达家蚕(Bombyx mori)let-7簇(cluster)micro RNAs:bmo-let-7、bmo-mi R-100和bmo-mi R-2795,为研究家蚕micro RNA的功能提供参考。【方法】克隆家蚕let-7 mi RNA簇(bmo-let-7 cluster,bmo-let-7-C)上各mi RNA前体(pri-let-7、pri-mi R-100与pri-mi R-2795)和bmo-let-7-C全长序列,以红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)基因为报告基因,昆虫细胞表达载体p Fast Bac1为穿梭载体,通过Tn7转座子把目的基因和报告基因转座到杆状病毒A.californica nucleopolyhedrovirus(Ac NPV)基因组上,获得各重组杆状病毒质粒(recombinant baculovirus plasmid,r Bacmid):Bac-let-7、Bac-mi R-100、Bac-mi R-2795和Bac-let-7-C。将重组Bacmid转染草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)卵巢细胞系Sf9,72 h后用荧光显微镜检查红色荧光蛋白信号,荧光定量PCR检测mi RNAs的表达。对转染的Sf9细胞进行离心、收集上清液,获得具感染力的重组病毒,用于侵染新培养的Sf9细胞和注射家蚕幼虫个体,72 h后用荧光显微镜检查红色荧光蛋白信号,荧光定量PCR检测mi RNAs的表达。【结果】成功将bmo-let-7-C上各mi RNA前体和bmo-let-7-C全长序列构建到杆状病毒基因组上,获得了各mi RNA及bmo-let-7-C的过量表达载体。将各重组过量表达载体分别转染草地贪夜蛾细胞系Sf9,72 h后在显微镜下观察到了红色荧光蛋白信号,荧光定量PCR检测结果表明各mi RNA显著过量表达;通过离心收集的各mi RNA重组过量表达病毒粒子感染新培养的Sf9细胞72 h后检测到了更强的红色荧光蛋白信号,定量PCR结果表明各mi RNA均显著过量表达。将各mi RNA的重组病毒注射到家蚕5龄1 d幼虫体内后,均能显著超量表达相应mi RNA,但注射Bac-let-7-C后只有mi R-2795显著过量表达,并有明显的组织差异性,在丝腺中没有过量表达,在脂肪体、血液和中肠中显著过量表达。【结论】利用杆状病毒过量表达系统在草地贪夜蛾细
- 何婷尹权王伟黄亚玺吴小燕夏庆友刘仕平
- 关键词：家蚕微小RNA杆状病毒表达系统
- 家蚕let-7 microRNA靶基因Bmlin-41的克隆表达与调控被引量：1
- 2016年
- 异时性基因调控细胞增殖和个体发育阶段的转换。家蚕异时性基因在家蚕变态发育过程中也很可能具有重要的调控作用,但它们的表达模式、生物学功能以及与micro RNA之间的关系却鲜有报道。本研究首先利用果蝇同源基因lin-41搜索家蚕基因组数据库中相似序列,设计引物扩增Bmlin-41的编码序列,克隆了家蚕Bmlin-41基因CDS,其长度为2 166 bp,编码721个氨基酸,含有B-box和NHL结构域;随后,利用RT-PCR、q PCR技术并结合已有的家蚕全基因组芯片数据研究了Bmlin-41在家蚕中的时空表达模式,发现Bmlin-41在从家蚕胚胎到成虫的发育过程中呈逐渐递增的表达趋势,在五龄3 d不同组织中,于卵巢里表达量最高,精巢和中肠次之,而其余组织中低量表达或不表达;最后,利用3′RACE克隆了Bmlin-41基因的3′UTR,全长1 434 bp,用在线软件RNAhybrid预测发现Bmlin-41的3′UTR上存在bmo-let-7靶位点,构建了含Bmlin-41 3′UTR的双荧光素酶报告基因载体,在S2细胞上共转染Bmlin-41 3′UTR和bmo-let-7的模拟物(Mimics)和拮抗剂(Antagomir),bmo-let-7 mimics显著下调Bmlin-41,bmo-let-7 antagomir显著上调Bmlin-41,证实了Bmlin-41是bmo-let-7的靶基因。以上研究结果为深入研究let-7 mi RNA和Bmlin-41的功能,揭示Bmlin-41和bmo-let-7在家蚕变态发育过程中的调控关系提供了新的线索。
- 周兰庭周挺高君凌王伟吴小燕黄亚玺夏庆友刘仕平
- 关键词：家蚕MIRNA靶基因
- 家蚕microRNA 7靶基因Bmhairy的鉴定和转录表达模式被引量：1
- 2016年
- 【目的】micro RNA是一类长约22个碱基的非编码RNA,通过与其靶基因的特异性结合来调控新陈代谢和生长发育等多种生命活动。鉴定家蚕(Bombyx mori)Bmhairy,比较Bmhairy和bmo-mi R-7的表达模式,验证Bmhairy是否为bmo-mi R-7的靶基因,为研究家蚕的变态发育机制提供线索。【方法】用家蚕胚胎反转期的总RNA反转录合成的c DNA模板,克隆Bmhairy编码区(coding DNA sequence,CDS)和3′端非翻译区(3′untranslated region,3′UTR)并进行序列分析。基于荧光定量PCR和芯片数据比较bmo-mi R-7和Bmhairy的表达模式。利用RNAhybrid和Mi RTif,预测和分析Bmhairy的m RNA 3′UTR上bmo-mi R-7的靶位点。构建荧光素酶报告基因载体,用家蚕胚胎细胞系(Bm E)进行共转染试验,验证bmo-mi R-7对Bmhairy的3′UTR结合位点。【结果】在家蚕中克隆了Bmhairy,含2个内含子和3个外显子,CDS长654 bp,编码217个氨基酸。Bmhairy的m RNA 3′UTR长366nt。Bmhairy高度保守,含有b HLH、ORANGE和WRPW结构域。Bmhairy与鳞翅目(Lepidoptera)蛱蝶科(Nymphalidae)中的黑脉金斑蝶(Danaus plexippus)相似度最高。Bmo-mi R-7在家蚕胚胎期高量表达,在5龄第3天的精巢中相对较高,而Bmhairy在成虫期的表达量最高,在5龄第3天的头部相对较高。Bmhairy m RNA 3′UTR上有bmo-mi R-7一个靶位点。共转染试验表明,bmo-mi R-7下调Bmhairy。【结论】Bmhairy的家蚕时期表达和5龄第3天组织表达均与bmo-mi R-7的表达呈相反的模式。靶基因预测和双荧光素酶转染试验表明Bmhairy是bmo-mi R-7的靶基因,为进一步研究bmo-mi R-7和Bmhairy在家蚕体内的生物学功能及调控关系提供了依据。
- 刘仕平吴小燕张丹宇黄亚玺王伟赵萍夏庆友
- 关键词：家蚕微小RNA靶基因
