国家自然科学基金(30670746)
- 作品数：2 被引量：7H指数：1
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- 中性内肽酶高表达对β-淀粉样肽诱导的PC12细胞凋亡的保护作用
- 2007年
- 目的确定中性内肽酶(NEP)高表达对β-淀粉样肽(Aβ)诱导的PC12细胞凋亡保护作用的分子机制。方法利用脂质体转染法建立可稳定表达NEP和失活NEP的PC12细胞系,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫印迹法(Western blot法)检测基因在细胞中的表达。利用Aβ_(25-35)诱导PC12细胞,CellTiter96^(?)AQueous单溶液检测系统(MTS)检测细胞存活率;分光光度法检测乳酸脱氢酶(LDH)含量、活性氧(ROS)生成量水平变化;化学发光法检测细胞三磷酸腺苷(ATP)生成量和Caspase- 3表达量的变化。结果在Aβ_(25-35)诱导PC12细胞凋亡中,NEP高表达可明显提高细胞存活率,降低培养基中LDH含量和ROS生成量;提高细胞ATP释放量;抑制Caspase-3在细胞凋亡中的激活,与正常PC12细胞相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。稳定表达失活NEP的PC12细胞则对细胞凋亡没有影响。结论NEP通过降低氧化应激反应对细胞线粒体的损伤,抑制凋亡关键蛋白Caspase-3的激活,从而提高Aβ_(25-35)诱导的神经细胞的存活率。
- 曾季平杨玲玲吴伟芳孔峰胡晓燕崔行
- 关键词：淀粉样Β-蛋白脱噬作用
- 以神经内肽酶为靶点筛选治疗阿尔茨海默症天然药物的实验研究被引量：7
- 2009年
- 目的筛选具有提高神经内肽酶(NEP)活性从而降低神经细胞β-淀粉样肽(Aβ)水平的药物,为临床治疗阿尔茨海默症(AD)提供实验依据。方法以脂质体LipofectamineTM2000介导瑞典突变型淀粉样肽前体蛋白(sweAPP)表达质粒pcDNA3.1-sweAPP转染神经母细胞瘤细胞SK-N-SH,G418筛选获得稳定表达细胞株作为AD模型细胞,采用蛋白印迹技术检测sweAPP表达情况,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养基中A4β0和A4β2含量变化,进而以MTT法检测各天然药物对SK-N-SH细胞增殖能力的影响,确定药物的有效浓度及最佳作用时间,以NEP肽酶实验检测药物对NEP酶活性影响,ELISA法检测药物对Aβ水平的影响。结果Western Blot结果显示,转染后SK-N-SH细胞高表达sweAPP蛋白;ELISA结果显示,转染后的SK-N-SH细胞分泌A4β0、A4β2明显升高,分别为转染前的7.26和3.27倍(P<0.05)。NEP肽酶实验检测结果显示,茶多酚、人参皂苷Rb1、Rg3能够明显提高NEP酶活性,分别为(117±2.8)%(、131±4.0)%和(121±1.6)%。ELISA结果显示,经茶多酚、人参皂苷Rb1、Rg3作用后,细胞培养基中A4β0和Aβ42水平明显降低,分别为对照组的(82±0.78)%和(85±2.21)%(、74±1.61)%和(99±3.31)%、(83±5.31)%和(76±6.74)%。结论成功构建AD模型细胞;茶多酚、人参皂苷Rb1、Rg3可提高NEP酶活性,从而有效降低Aβ的水平;本研究为茶多酚、人参皂苷Rb1、Rg3在临床上的应用以及分子机制研究提供了试验数据。
- 杨玲玲张静崔云燕胡晓燕孔峰崔行
- 关键词：Β-淀粉样肽阿尔茨海默症茶多酚人参皂苷
