国家自然科学基金(30800282)
- 作品数：2 被引量：9H指数：2
- 相关作者：崔磊周恒李宇琳孙剑刘广鹏更多>>
- 相关机构：上海交通大学医学院附属第九人民医院国家工程研究中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划上海市青年科技启明星计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 低温保存的GFP标记脂肪源性干细胞体外构建组织工程骨的研究被引量：3
- 2011年
- 目的研究经低温保存的GFP基因转染的犬脂肪源性干细胞(ASCs)在脱钙骨(DBM)支架材料上的生长特性及成骨分化潜能。方法胶原酶消化法分离获取并常规培养犬ASCs,用绿色荧光蛋白(GFP)重组逆转录病毒载体转染第2代ASCs,然后进行低温保存。-196℃液氮保存4周后,37℃复苏,测定细胞存活率。低温保存前后的ASCs接种DBM,用成骨诱导液诱导培养2周。激光共聚焦显微镜观察细胞在DBM上的生长情况,DNA定量(Hoechst33258法)测定细胞的体外增殖活性。通过测定碱性磷酸酶(ALP)活性和骨钙蛋白(OCN)含量,观察低温冻存对细胞在支架材料上成骨能力的影响。结果低温冻存复苏后细胞的存活率>90%,激光共聚焦显微镜显示细胞在材料上黏附生长良好。体外培养12d时细胞增殖达到平台期,ALP活性与OCN含量则随培养时间延长而不断上升,低温保存前后细胞的检测结果无显著差异(P>0.05)。结论低温保存对GFP标记的犬ASCs在脱钙骨上的体外生长及成骨能力无显著影响,可以作为组织工程骨的种子细胞。
- 刘广鹏孙剑李宇琳周恒崔磊
- 关键词：绿色荧光蛋白质类成体干细胞
- 低温冻存对人脂肪来源干细胞成骨能力影响的实验研究被引量：6
- 2010年
- 目的脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)是组织工程种子细胞的重要来源之一。探讨低温保存对hADSCs体外生长特性及成骨分化潜能的影响,验证冻存后的ADSCs作为组织工程骨种子细胞的可行性。方法取自愿捐献的经脂肪抽吸术获取人脂肪组织,采用胶原酶消化法分离hADSCs。取第2代hADSCs置于-196℃液氮保存4周后,37℃复苏并测定细胞存活率。实验分为两组,实验组为低温保存的hADSCs,对照组为未经低温保存的hADSCs;均用成骨诱导液诱导培养。采用DNA定量(Hoechst33258荧光比色法)测定细胞体外增殖活性,ALP染色及茜素红染色法测定ALP活性和Ca2+含量,观察低温冻存对细胞成骨能力的影响。结果低温冻存复苏后的hADSCs存活率为90.44%±2.62%。两组细胞数量随成骨诱导时间延长不断增加,7d达平台期;ALP表达活性也不断增加,于成骨诱导11d达平台期,且2周时ALP染色均呈阳性;成骨诱导3周时两组茜素红染色均呈强阳性反应。两组各时间点细胞数量、ALP活性和Ca2+含量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论低温保存的hADSCs体外生长及成骨能力未发生显著变化,可以作为组织工程骨的种子细胞。
- 刘广鹏李宇琳孙剑周恒崔磊
- 关键词：低温冻存脂肪来源干细胞成骨分化
