目的 :探讨松弛素(RLX)对TGF-β诱导的内皮细胞间质化现象的影响。方法:采用体外分离的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)作为体外细胞模型,通过TGF-β10 ng/mL诱导内皮细胞间质化,100 ng/mL和200 ng/mL RLX分别预处理,再与TGF-β联合培养48 h。光镜下观察细胞形态学改变,CCK-8实验和transwell实验检测细胞增殖和迁移能力,免疫荧光单双染技术观察vimentin和CD31的表达变化,蛋白免疫印迹技术观察各实验组vimentin、CD31、ve-cadherin和α-SMA的蛋白表达。结果:阴性对照组内皮细胞呈铺路石样生长,TGF-β诱导组细胞形态向梭形转化,呈扩散迁移趋势。与阴性对照组相比,TGF-β诱导组细胞增殖、迁移能力明显增强;而RLX可抑制TGF-β诱导的增殖和迁移。免疫荧光单染结果显示,与阴性对照组相比,TGF-β诱导组内皮细胞特异性蛋白CD31表达下调而间质细胞标志性蛋白vimentin明显上升;与TGF-β组相比,RLX联合TGF-β处理组CD31表达上调而vimentin表达下调。免疫荧光双染结果显示,阴性对照组以内皮性质的细胞为主,仅存在少量的CD31和vimentin双阳性细胞;TGF-β诱导组双阳性细胞明显增多;与TGF-β组相比,RLX联合TGF-β处理组间质效应的双阳性细胞下调,而内皮效应的双阳性细胞增多。蛋白免疫印迹结果显示,与阴性对照组相比,TGF-β诱导组内皮细胞特异性蛋白CD31(0.36±0.076 vs 0.88±0.086)和ve-cadherin(0.54±0.046 vs 1.09±0.13)表达下调而间质细胞标志性蛋白vimentin(0.72±0.102 vs 0.21±0.081)和α-SMA(0.88±0.084 vs 0.24±0.046)明显上升(P<0.05);与TGF-β组相比,RLX联合TGF-β处理组CD31(0.67±0.09、0.59±0.12 vs 0.36±0.076)和ve-cadherin(0.85±0.09、0.72±0.064 vs 0.54±0.046)表达上调,而vimentin(0.56±0.011、0.48±0.06 vs 0.72±0.102)和α-SMA(0.65±0.081、0.54±0.032 vs 0.88±0.084)表达下降(P<0.05),且呈剂量依赖性。结论:RLX可抑制TGF-β诱导的内皮细胞向间质化细胞转化。
