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国家自然科学基金(81071401)

作品数：7 被引量：9H指数：2
相关作者：樊建勇杨慧兰王颖龙朝钦张发洲更多>>
相关机构：广州军区广州总医院华南理工大学更多>>
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文献类型

  • 7篇中文期刊文章

领域

  • 6篇医药卫生
  • 2篇生物学

主题

  • 5篇细胞
  • 4篇单纯疱疹
  • 4篇单纯疱疹病毒
  • 4篇疱疹
  • 3篇HSV-2
  • 2篇单纯疱疹病毒...
  • 2篇蛋白
  • 2篇凋亡
  • 2篇疫苗
  • 2篇树突
  • 2篇疱疹病毒2型
  • 2篇细胞凋亡
  • 2篇免疫
  • 2篇基因
  • 2篇VERO细胞
  • 2篇LAT
  • 1篇疫苗免疫
  • 1篇疫苗制备
  • 1篇荧光
  • 1篇荧光蛋白

机构

  • 6篇广州军区广州...
  • 2篇华南理工大学

作者

  • 6篇樊建勇
  • 5篇杨慧兰
  • 4篇王颖
  • 2篇吕芳彪
  • 2篇李翠华
  • 2篇薛礼长
  • 2篇张发洲
  • 2篇龙朝钦
  • 2篇梁洁
  • 1篇刘艳华
  • 1篇张玲
  • 1篇浦洋
  • 1篇张丽

传媒

  • 2篇中华皮肤科杂...
  • 2篇现代生物医学...
  • 1篇医学研究生学...
  • 1篇南方医科大学...
  • 1篇实用皮肤病学...

年份

  • 1篇2021
  • 1篇2015
  • 1篇2014
  • 1篇2013
  • 2篇2012
  • 1篇2011
共 7 条 记 录，以下是 1-7
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排序方式：
HSV-2 LAT过表达vero细胞中microRNA的表达谱变化被引量：3
2012年
目的分析过表达疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)潜伏相关转录子LAT后vero细胞microRNA表达谱的表达变化。方法通过化学合成的方法获得LAT基因的全长序列。构建HSV-2 LAT逆转录病毒表达载体pRetroQ-AcGFP1-C1,包装获得HSV-2 LAT基因过表达的逆转录病毒。利用microRNA芯片技术,分析感染逆转录病毒HSV-2 LAT后vero细胞microRNA表达谱的变化,得到因LAT基因过表达而产生变化的microRNA。结果通过microRNA芯片分析,逆转录病毒HSV-2 LAT感染vero细胞后,可引起hsa-miR-23a*、kshv-miR-K12-3、hsa-miR-943、hsa-miR-634、hsa-miR-1270 5种microRNA2倍以上上调;使hsa-miR-181a-2*、hsa-miR-450b-5p、hsa-miR-31、hsa-miR-24、kshv-miR-K12-12*5种microRNA2倍以上下调。结论 LAT基因过表达后可引起vero细胞microRNA表达谱的变化。
王颖樊建勇杨慧兰陈剑云
关键词：LATMICRORNA逆转录病毒
单纯疱疹病毒2型潜伏相关转录体开放读码框3对Vero细胞凋亡的影响被引量：4
2012年
目的研究单纯疱疹病毒2型（HSV-2）潜伏相关转录体（LAT）开放读码框3（ORF3）对顺铂诱导的非洲绿猴肾细胞（Vero细胞）凋亡的影响。方法构建重组质粒pEGPF—ORF3，并转染Vero细胞，逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）验证目的基因的表达。顺铂诱导Vero细胞凋亡，通过荧光显微镜观察凋亡小体，Giemsa染色检测细胞核形态，噻唑蓝法（MTr法）检测细胞增殖，流式细胞仪分析细胞凋亡情况。实验结果采用SPSSl3．0进行分析，各组间两两比较采用单因素方差分析和t检验。结果成功克隆HSV-2333株ORF3基因，构建pEGFP—ORF3真核表达载体，RT—PCR验证该真核表达载体能在Vero细胞中高效表达。转染pEGFP—ORF3的Vero细胞经顺铂诱导凋亡后Giemsa染色，显示胞核蓝染，胞质淡浅，细胞形态正常。M．rr法分析显示，细胞增殖在转染pEGFP—ORF3组（2．56±0．21）与未经任何处理的正常对照组（2．66±0．13）比较，差异无统计学意义（P〉0．05），但高于顺铂诱导凋亡的正常对照组（1．65±0．11）和pEGFP—C2组（1．56±0．18），差异均有统计学意义（P〈0．05）；流式细胞仪分析细胞凋亡率，转染pEGFP—ORF3组（4．03％±1．04％）与正常对照组（2．13％±0．09％）比较，差异无统计学意义（P〉0．05），但低于空质粒pEGFP—C2组（19．45％±2．05％），且差异有统计学意义（P〈0．05）。结论HSV-2LATORF3在Vero细胞中具有抗顺铂诱导的凋亡作用。
杨慧兰薛礼长樊建勇张发洲龙朝钦张玲
关键词：开放读码框架细胞凋亡
HSV-2LATORF1在Vero细胞中的表达特性及其对细胞活性的影响
2013年
目的:研究单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)潜伏相关转录体(LAT)开放读码框1(ORF1)的表达特点及其对Vero细胞活性的影响。方法:双酶切和测序验证本实验室构建的HSV-2 LAT ORF1真核表达载体pEGFP-ORF1,并以转染试剂盒Xfect介导其转染至Vero细胞,通过RT-PCR和绿色荧光蛋白检验其在细胞中的表达,用MTT法进行细胞活性分析。结果:重组质粒表达的融合蛋白主要集中细胞核,而空质粒表达的绿色荧光蛋白在细胞核和细胞质中分布均匀;重组质粒对Vero细胞没有损伤作用。结论:HSV-2 LAT ORF1影响了绿色荧光蛋白的分布,可降低空质粒对细胞的损伤作用;其作用位点可能主要定位在细胞核中,为阐明HSV-2 LAT ORF1在潜伏复发中的功能奠定了实验基础。
吕芳彪杨慧兰樊建勇刘艳华张丽王颖
关键词：LAT转染绿色荧光蛋白
顺铂诱导非洲绿猴肾细胞凋亡模型的建立
2011年
目的:建立常见凋亡诱导剂顺铂(Cisplatin)诱导非洲绿猴肾细胞(Vero)凋亡的模型,为进一步研究抗凋亡基因在细胞凋亡中的分子机理打下基础。方法:分别以不同浓度的顺铂处理Vero细胞48h,用噻唑蓝(MTT)比色法、Gimesa染色、流式细胞术检测,观察处理后细胞的生长活力和凋亡情况。结果:以未处理的细胞作为对照组,1、2、3、4、5μg/mL的顺铂处理的Vero细胞生存率分别为(79.02±6.10)%、(68.84±4.42)%、(56.66±4.07)%、(46.83±3.76)%、(29.04±5.93)%(P<0.01);经顺铂诱导后细胞形态学发生明显改变,出现膜小泡和凋亡小体形成等凋亡细胞特征;流式细胞仪检测,0、1、2、3、4、5μg/mL的顺铂处理的Vero细胞后凋亡率分别为1.66%±0.19%、16.65%±1.26%、24.82%±1.03%、36.22%±1.04%、48.49%±1.24%、43.34%±1.17%(P<0.01)。结论:本实验成功建立顺铂诱导非洲绿猴肾细胞凋亡模型,将有助于进一步探讨目的基因在Vero细胞凋亡作用的的分子机制。
浦洋薛礼长吕芳彪樊建勇张发洲龙朝钦
关键词：非洲绿猴肾细胞细胞凋亡顺铂
腺病毒介导HSV-2 gD基因修饰的树突状细胞疫苗制备被引量：2
2015年
目的生殖器疱疹尚无彻底治愈的方法。研制有效的生殖器疱疹病毒疫苗是预防和治疗HSV-2感染的关键,文中探讨制备腺病毒介导的HSV-2 g D基因修饰的树突状细胞(dendritic cell,DC)疫苗的可行性。方法将HSV-2 g D蛋白基因克隆到质粒载体Shuttle-2,重组质粒酶切鉴定、测序鉴定后构建重组腺病毒p Adeno-HSV-2 g D。分离小鼠骨髓DC细胞,p Adeno-HSV-2 g D转染DC细胞后用流式细胞术检测DC表型,用免疫组化法、RT-PCR、SDS-PAGE和Western blot方法检测HSV-2 g D的表达情况。结果以HSV-2病毒DNA为模板,采用g D基因引物扩增出相应的目的片段。琼脂糖凝胶电泳显示,PCR产物g D基因同预期的大小一致(1182 bp)。p Adeno-g D DNA用脂质体法转染293细胞10 d,反复冻融获得p AdenoHSV-2 g D重组腺病毒,活性为4×1010IU/m L。流式细胞仪检测结果显示:成熟DC和腺病毒感染后DC,CD40含量为(74.2±3.9)%、(81.3±3.1)%,CD80含量为(73.9±4.1)%、(80.4±2.9)%,CD86含量为(76.1±5.5)%、(83.7±3.9)%,均较不成熟DC的CD40、CD80、CD86含量[(9.7±0.5)%、(7.5±1.2)%、(5.2±1.1)%]升高(P<0.01)。p Adeno-HSV-2 g D-DC和细胞因子刺激诱导成熟的DC细胞表面分子表达差异无统计学意义(P>0.05)。RT-PCR、免疫组织化学方法证明HSV-2 g D能在DC细胞内表达,表达产物的SDS-PAGE和Western blot分析发现,在相对分子质量为43000处有外源蛋白表达,与预期蛋白条带一致。结论成功制备了p Adeno-HSV-2 g D-DC疫苗。
樊建勇王颖杨慧兰梁洁李翠华
关键词：单纯疱疹病毒树突状细胞
单纯疱疹病毒2gD基因的树突细胞疫苗免疫效应研究被引量：1
2014年
目的 观察单纯疱疹病毒2 gD（HSV-2 gD）基因的树突细胞（DC）疫苗在动物实验中诱发特异性免疫应答情况.方法 用腺病毒介导的、HSV-2 gD基因修饰的DC（pAdeno-HSV-2 gD-DC）疫苗免疫BALB/c小鼠3次,末次免疫后第10天检测小鼠血清中gD IgG水平;同时,分离小鼠脾淋巴细胞,用HSV-2gD蛋白刺激,MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖情况、乳酸脱氢酶释放法测定细胞毒性T淋巴细胞（CTL）活性及ELISA法检测脾淋巴细胞培养上清中干扰素γ（IFN-γ）、白介素4（IL-4）水平.实验分为4组,pAdeno-DC组、pAdeno-HSV-2 gD-DC组、DC组、空白对照组,每组10只.结果 pAdeno-HSV-2 gD-DC组小鼠血清内可检测到高滴度针对HSV-2gD蛋白的抗体（A450值为0.313±0.034）,与pAdeno-DC组（0.034±0.009）、DC组（0.028±0.009）、空白对照组（0.026±0.010）比较,差异有统计学意义（P＜0.05）.pAdeno-HSV-2 gD-DC可以诱导小鼠脾淋巴细胞增殖（刺激指数为1.600±0.215）、有效杀伤靶细胞（CTL活性为37.1％）,与pAdeno-DC组（分别为1.063±0.070和16.0％）、DC组（1.056±0.063和14.9％）、空白对照组（1.020±0.051和15.7％）比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）.pAdeno-HSV-2 gD-DC组小鼠分离的脾细胞培养上清可以检测到高水平IFN-γ（A450值为0.568±0.031）和IL-4（A450值为0.544±0.043）,与pAdeno-DC组（0.266±0.021和0.278±0.037）、DC组（0.271±0.023和0.275±0.044）、空白对照组（0.252±0.012和0.245±0.051）比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 构建的pAdeno-HSV-2 gD-DC疫苗可以在小鼠中产生较强的特异性免疫应答.
樊建勇王颖杨慧兰梁洁李翠华
关键词：树突细胞
单纯疱疹病毒2型gD蛋白-结核杆菌热休克蛋白70 DNA疫苗的免疫效应研究
2021年
目的研究单纯疱疹病毒2型gD蛋白-结核杆菌热休克蛋白70(Hsp70-HSV2gD)DNA疫苗诱导BALB/c小鼠出现的特异性免疫反应.方法用制备的Hsp70-HSV2gD DNA疫苗免疫小鼠3次,最后1次免疫后第4周测定小鼠血中特异性gD IgG抗体;分离小鼠脾淋巴细胞,用HSV2gD蛋白刺激后用MTT法测定小鼠脾淋巴细胞增殖水平,用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定脾淋巴细胞培养液中干扰素(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-4浓度,用流式细胞仪检测小鼠脾淋巴细胞CD4+、CD8+T细胞亚群.结果gD、gD+Hsp70和Hsp70-HSV2gD 3组均可刺激小鼠产生靶向HSV2gD蛋白抗体,诱导CD4+T细胞与CD8+T细胞增殖,刺激脾淋巴细胞增殖并分泌IFN-γ、IL-4.Hsp70-HSV2gD组在抗体水平、诱导CD4+T细胞与CD8+T细胞增殖、刺激脾淋巴细胞增殖及分泌IFN-γ、IL-4均明显高于gD+Hsp70组、gD组,差异有统计学意义(P<0.05).结论Hsp70-HSV2gD DNA疫苗可以刺激小鼠产生比gD、gD+Hsp70组更强的特异性免疫反应,Hsp70-HSV2gD DNA疫苗中的Hsp70对HSV2gD抗原诱导的特异性免疫应答可能有促进作用.
樊建勇田晨王兴旺张功恺高睿籍丽玥陈韦君杨慧兰
关键词：病毒单纯疱疹热休克蛋白70DNA疫苗
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