国际科技合作与交流专项项目(2011DFA32900)
- 作品数：19 被引量：145H指数：5
- 相关作者：王全凯胡太超苏凤艳陶荣珊张晶更多>>
- 相关机构：吉林农业大学吉林省中韩动物科学研究院长春中医药大学附属医院更多>>
- 发文基金：国际科技合作与交流专项项目吉林省科技发展计划基金吉林省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 梅花鹿IFN-β1基因的克隆与分子进化分析被引量：3
- 2014年
- 根据GenBank中牛干扰素-β1（IFN-β1）基因序列（E00137）,设计并合成了1对引物,以梅花鹿肝脏组织DNA为模板,采用PCR技术扩增梅花鹿IFN-β1全基因,并克隆、测序。结果表明：梅花鹿IFN-β1基因全长561 bp,编码186个氨基酸,含有6个与二硫键形成有关的半胱氨酸,3个糖基化位点,成熟蛋白含有4个α螺旋,3个β折叠区,7个β转角。序列比较分析发现,梅花鹿IFN-β1基因序列与GenBank发表的23种IFN-β1基因核苷酸序列同源性为3.2%~91.1%,氨基酸序列同源性为21.9%~79.7%。梅花鹿与其他23种动物的IFN-β1基因序列分析和系统进化树分析表明,IFN-β1基因存在种属特异性。梅花鹿INF-β1基因的成功克隆,为进一步研究梅花鹿INF-β1基因表达、生物学活性和应用奠定了基础。
- 苏凤艳李哲刘存发宗颖曾范利王全凯
- 关键词：梅花鹿分子进化
- 梅花鹿TLR10基因克隆与序列分析被引量：2
- 2013年
- 为系统了解梅花鹿免疫系统,用Trizo法提取梅花鹿肝脏总RNA,采用兼并引物RT-PCR方法克隆了梅花鹿TLR10基因并进行了系统的生物信息学分析。RT-PCR结果显示,dTLR10基因完整ORF区长2 439 bp,编码812个氨基酸(GenBank序列号为:HQ260630)。同源分析显示,dTLR10基因序列与其他物种TLR10基因高度同源,与同属于偶蹄目反刍类的牛和羊同源性高达95%以上。蛋白功能结构域分析显示,不同物种间TLR10蛋白结构域数量及分布上高度相似,蛋白三维结构预测比较显示,dTLR10蛋白胞外区结构与人类TLR10结构相似,两者均表现为经典的马蹄形结构。
- 张立春王全凯曹阳金海国陈尚武
- 关键词：梅花鹿克隆
- 超声波辅助酶解鹿皮胶原蛋白被引量：3
- 2014年
- 本文以鲜鹿皮为原材料,采用超声波辅助酶解法对其蛋白的提取进行了研究。文中考察了超声时间、超声温度、超声功率及料液比对鹿皮蛋白溶出的影响,并通过响应面设计进行试验优化从而确定了最佳工艺参数,当料液比为1∶15、超声温度为544℃、超声时间为43min和超声功率为200W时所得的胶原蛋白提取率最大,提取率为56.86%。
- 殷涌光齐越闫晓侠李旭光金虹旭姜薇
- 关键词：超声波鹿皮胶原蛋白
- 鹿皮胶原蛋白的提取及特性研究被引量：2
- 2014年
- 胶原蛋白因具有独特的氨基酸组成和结构,被广泛地应用于医疗、食品及美容等领域。选取鹿皮为原料,通过酸水解和酶水解结合法提取胶原蛋白,其提取率可达32.38%,进一步分离纯化,通过测定原料中羟脯氨酸的含量换算后得出其所含胶原蛋白含量为9.912%。通过SDS-PAGE测定胶原蛋白的分子量为30万,并对其自由基清除能力进行了研究,在测定范围内,随着胶原蛋白浓度的增加,其自由基清除能力均增大,高浓度时其清除能力较强。
- 胡太超陶荣珊苏凤艳张晶李庆杰王艳梅王全凯
- 关键词：胶原蛋白SDS-PAGE自由基清除能力
- 梅花鹿IFN-α基因的克隆与原核表达研究被引量：3
- 2015年
- 为研究梅花鹿IFN-α的抗病毒功能和分子机制,根据GenBank中牛IFN-α基因序列(A00145),设计并合成1对引物,以梅花鹿肝脏组织DNA为模板,采用PCR技术扩增梅花鹿IFN-α全基因核苷酸序列。序列分析表明梅花鹿IFN-α基因全长570 bp,编码189个氨基酸,其中含18个氨基酸的信号肽和169个氨基酸的成熟多肽,存在1个潜在跨膜区,基因随不同物种发育进化地位表现出种属间的差异性。在此基础上,合成1对引物,扩增梅花鹿IFN-α成熟肽核苷酸序列,构建pET28a-IFNα原核重组表达质粒并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中。SDS-PAGE和Western blotting检测结果表明,在24 kd左右出现特异性蛋白带,表达产物主要为不溶性的包涵体,表达量占菌体总蛋白的34.04%,且表达产物与抗His标签抗体可发生特异性反应。将Ni柱纯化的pET28a-IFNα诱导表达产物复性后,细胞病变抑制法检测表明表达产物具抗病毒活性。研究结果为梅花鹿IFN-α蛋白抗病毒分子机制的研究及抗病毒药物的开发奠定了基础。
- 苏凤艳李哲王晓霞刘存发曾范利宗颖王全凯
- 关键词：梅花鹿原核表达
- 结核分枝杆菌酯酶Rv1400c原核表达及表达产物的酶活性分析被引量：2
- 2014年
- 为探究结核分枝杆菌酯酶Rv1400c活性，以进一步研究Rv1400c的结构和功能。以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板，对 Rv1400c 基因进行扩增，并将其克隆到 pET28b （＋）原核表达载体上，构建pET28b－Rv1400c重组质粒，然后将构建的重组质粒转化到BL21（ DE3）表达菌株中，增菌后用IPTG进行诱导表达再用亲和层吸树脂法进行纯化，利用不同底物、不同pH、不同温度对纯化后的Rv1400c酯酶进行活性分析。结果表明：成功构建出pET28b－Rv1400c重组质粒；SDS－PAGE和Western blot显示，Rv1400c以包涵体形式表达，蛋白分子质量为39 ku；在对8种底物的筛选中发现Rv1400c在C2～C14中具有活性，其中以在C2中活性最好；在以C12为底物、pH 8？0、37℃条件下酯酶活性最高。
- 陶荣珊李金伟刘思国王全凯
- 关键词：包涵体酯酶活性
- 梅花鹿干扰素-β1在MDBK细胞中表达及抗牛病毒性腹泻病毒活性检测被引量：1
- 2016年
- 为真核表达梅花鹿干扰素β1(IFN-β1)并检测其抗牛病毒性腹泻病毒(BVDV)活性,本研究以梅花鹿肝脏基因组为模板,通过PCR扩增出IFN-β1的编码区序列,克隆于真核表达载体pVAX1中,构建重组真核表达质粒pVAX1-IFNβ1,并转染MDBK细胞进行表达。结果显示,将pVAX1-IFNβ1转染MDBK细胞后经western blot和间接免疫荧光法检测和鉴定证实,转染的重组质粒能够在MDBK细胞中正确表达目的蛋白,表达的重组蛋白约为25 ku。此外,采用细胞病变抑制法检测表明转染后重组细胞表达的IFN-β1具有抗BVDV活性。本研究为梅花鹿IFN-β1蛋白抗病毒分子机制的研究及抗病毒药物的开发奠定了基础。
- 刘千辉李哲苏凤艳曾范利王全凯
- 关键词：梅花鹿真核表达
- 鹿茸多肽提取分离纯化及药理作用研究进展被引量：19
- 2014年
- 鹿茸多肽具有抗炎、抗氧化、增强免疫并能促进细胞分化、伤口愈合、抑制肿瘤细胞、促进神经系统、周围神经系统组织的再生等药理作用,是鹿茸中最有效的成分之一。文中对鹿茸多肽的提取,分离纯化及药理作用研究进展进行了综述,希望为鹿茸多肽的研究和开发提供参考。
- 陶荣珊胡太超李金伟顾效瑜王全凯
- 关键词：鹿茸多肽分离纯化药理作用
- 茸鹿经济杂交后代生长发育研究
- 为确定茸鹿经济杂交后代的生长发育情况,本研究对东北梅花鹿与天山马鹿三种形式经济杂交繁育而成的初生仔鹿与180日龄幼鹿体重体尺进行了测定,并与亲本进行了日增重对比。研究结果表明,在亲本和杂交后代体重及体尺各项指标中,公鹿最...
- 赵列平韩欢胜王全凯张嘉保
- 关键词：经济杂交生长发育
- 文献传递
- 结核分枝杆菌Rv1400c多抗制备及反应原性分析被引量：1
- 2015年
- 将pET28b-Rv1400c重组表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,筛选出阳性菌株并增菌培养后IPTG诱导表达,离心后沉淀用SKL变性溶解,用亲和层吸树脂纯化Rv1400c蛋白,通过SDS-PAGE和Western-blot分析目的蛋白表达与纯化情况;利用Rv1400c蛋白免疫新西兰兔,制备多克隆抗体;Western-blot分析鹿结核阳性血清的反应情况。SDS-PAGE和Western-blot结果显示:Rv1400c以包涵体形式表达,蛋白分子质量为39 ku;目的蛋白免疫新西兰兔后,ELISA检测血清效价达到1∶51 200。纯化的Rv1400c重组抗原蛋白能与鹿的阳性血清发生体外结合反应。
- 陶荣珊胡太超李金伟刘思国王全凯
- 关键词：结核分枝杆菌包涵体复性反应原性
