江苏省重大科技成果转化项目(BA2009124)
- 作品数：4 被引量：13H指数：3
- 相关作者：孙凌云王丹丹钱晖沈俐史云燕更多>>
- 相关机构：南京医科大学南京大学医学院附属鼓楼医院江苏大学更多>>
- 发文基金：江苏省重大科技成果转化项目国家自然科学基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 脐带间质干细胞心肌样分化中干细胞标志物的表达
- 2011年
- 目的:探讨人脐带间质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hucMSCs)在体外特定条件下是否可以定向分化为心肌样细胞及干细胞标志物的表达变化。方法:采用脐带组织块贴壁培养方法分离人脐带间质干细胞,用第2代hucMSC进行体外心肌细胞诱导分化;采用RT-PCR、透射电镜等鉴定心肌细胞,流式细胞术、实时荧光定量PCR及蛋白质印迹分析干细胞相关基因及蛋白表达。结果:RT-PCR显示诱导组细胞转录心肌钙蛋白T、β-肌球蛋白重链、心房利钠多肽水平增加;在透射电镜下,诱导后细胞具有条索状肌丝结构;流式细胞仪检测未见细胞表面标志改变;而实时荧光定量PCR及蛋白质印迹显示干细胞相关基因及蛋白Nanog、Oct4、Sox2、Sall4在5-氮胞苷(5-azacytidine,5-Aza)诱导后的hucMSCs中表达显著下降。结论:人脐带间质干细胞体外经5-氮胞苷诱导可定向分化为心肌样细胞,其分化可能与干细胞相关基因及蛋白表达下调有关,为深入研究hucMSCs心肌分化机制奠定了实验基础。
- 钱茜徐哲史云燕沈俐孙靖张徐毛飞朱伟钱晖许文荣
- 关键词：人脐带间质干细胞心肌样细胞分化干细胞标志物
- 脐带间充质干细胞对系统性红斑狼疮患者Thl7细胞的调节被引量：4
- 2011年
- 目的探讨脐带间充质干细胞（UC-MSCs）体内外对系统性红斑狼疮（SLE）患者CD3^＋CD8^-ILl7A^＋T淋巴细胞及相关细胞因子的调节作用。方法UC-MSCs移植治疗14例SLE患者，观察移植前后的临床表现及实验室指标的变化。采用流式细胞术检测各时间点患者外周血CD3^＋CD8-ILl7A^＋T细胞百分率，酶联免疫吸附试验（ELISA）测定血浆白细胞介素（IL）-6、转化生长因子（TGF）-B、IL-17A、IL-22表达水平。10例SLE患者外周血单个核细胞（PBMC）分别与UC—MSCs按不同比例体外共培养72h，流式细胞术检测PBMC中CD3^＋CD8-ILl7A^＋T细胞百分率。采用配对t检验和独立样本t检验。结果UC—MSCs移植后患者疾病活动指数评分（SLEDAI）在3个月（7．8±1．2，t=2．19）及6个月（6．9±0．9，t=4．2）均显著低于移植前（10.4±0．9，P〈O．05）；尿蛋白定量（24h）移植后6个月显著下降[（1489±260）与（2454±322）mg，t=2．6，P〈0．05]；血清白蛋白水平在移植后1、3、6个月均显著高于移植前（尸〈0．05），补体c3移植后持续升高。UC—MSCs移植后1个月及6个月，患者外周血CD3^＋CD8-ILl7A^＋T淋巴细胞百分率显著下降（P〈0．05）。UC—MSCs与SLE患者PBMC共培养可显著下调CD3^＋CD8-ILl7A^＋T淋巴细胞百分率（P〈0．05），但无剂量依赖性。UC—MSCs移植后患者血浆IL-6、TGF—β、IL-17A、IL-22水平与移植前比，差异无统计学意义（P〉O．05）。结论UC—MSCs移植治疗SLE有效，移植后SLE患者PBMC中CD3^＋CD8-ILl7A6＋T淋巴细胞水平显著下降。
- 刘慧青孙凌云王丹丹汤郁张继云
- 关键词：红斑狼疮间质干细胞移植T淋巴细胞
- 脐带间充质干细胞上调系统性红斑狼疮患者调节性T细胞的机制研究被引量：5
- 2013年
- 目的探讨脐带间充质干细胞（UC-MSC）上调系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血调节性T细胞（Treg）的作用机制。方法20例SLE患者及正常人外周血单个核细胞（PBMC）分别与UC-MSC以不同比例共培养72h，流式细胞术检测PBMC中CIM’CD25’Foxp3’Treg细胞比例。分别以SLE患者及正常人PBMC及血清刺激UC-MSC，实时荧光定量聚合酶链反应检测UC-MSCTGF-B1mRNA表达水平，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测共培养上清TGF-p1表达水平。并构建TGF-B1小干扰RNA（siRNA）干扰UC-MSCTGF-p1表达及在共培养体系中加入TGF-B1抑制剂，探讨UC-MSC对SLE患者Treg细胞的调节作用。结果UC-MSC呈剂量依赖性上调SLE患者外周血Treg细胞，且不依赖细胞直接接触，而对正常人外周血Treg细胞无调节作用。与无刺激组及健康志愿者PBMC刺激组相比，SLE患者PBMC显著促进UC-MSCTGF-β1mRNA表达（1．00±0．09，1．95±0．62，4．20±2．34，P〈0．05），细胞培养上清TGF-β1水平显著升高。SLE患者血清（5％）促进UC-MSC表达TGF-β1mRNA（12．19±4．49），显著高于胎牛血清及正常人血清培养组（1．33±0．06，2．53±0．72），P〈0．01。TGF-β1siRNA干扰的UC-MSC对SLE患者外周血Treg细胞无上调作用（SLEPBMC＋TGF-β1siRNAUC-MSC组2．33％±0．99％，SLEPBMC组1．80％±0．65％，P〉0．05）。此外，TGFN特异性抑制剂SB431542显著抑制UC-MSC对SLE患者外周血Treg细胞的调节作用（UC-MSC＋SIM31542组4．58％±2．10％，UC-MSC组7．85％±3．54％，P〈0．05）。结论SLE患者免疫微环境可显著刺激UC-MSC表达TGF-β1，后者在UC-MSC上调SLE患者Treg细胞中发挥重要作用。
- 鲁琳王丹丹李霞曾小峰孙凌云
- 关键词：间充质干细胞调节性T细胞转化生长因子Β1
- 人脐带间质干细胞来源的外切体对大鼠心肌细胞缺血/再灌注损伤的作用被引量：4
- 2012年
- 目的:研究人脐带间质干细胞来源的外切体(hucMSC-exosome)对大鼠缺血/再灌注(I/R)损伤心肌细胞的修复作用。方法:在体内,建立大鼠I/R模型:经冠状动脉左前降支(LAD)结扎缺血30 min后取消结扎恢复灌注,与此同时,尾静脉注射hucMSC-exosome。在体外,建立大鼠H9C2(2-1)心肌细胞缺氧/复氧(H/R)模型:细胞于无血清低糖培养基中缺氧(5%CO2/93%N2)24 h后,用含hucMSC-exosome的高糖10%FBS培养液复氧24 h。采用MTT法、TUNEL法、心肌酶谱以及线粒体膜电位等方法检测大鼠心肌细胞的增殖和凋亡状况。结果:在体内,心肌细胞经I/R损伤后,hucMSC-exosome与hucMSC处理组较PBS处理组血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)值均下降;TUNEL结果显示,前两组较PBS处理组心肌细胞凋亡明显减少;在体外,心肌细胞经H/R损伤后,MTT实验表明细胞增殖显著减弱,hucMSC-exosome作用后,TUNEL及线粒体膜电位(ΔΨm)结果分别显示受损心肌细胞凋亡以及膜电位下降明显减少。结论:hucMSC-exosome能有效抵抗心肌细胞因缺血/再灌注损伤而引起的细胞凋亡。
- 史云燕沈俐高硕周颖纪润璧李伟钱晖朱伟许文荣
- 关键词：人脐带间质干细胞
