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国家自然科学基金(30670784)

作品数:6 被引量:14H指数:3
相关作者:刘美玲贾孟春王介东石心泉成毅明更多>>
相关机构:中国医学科学院北京协和医学院国家人口计生委科学技术研究所空军航空医学研究所更多>>
发文基金:国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
相关领域:医药卫生生物学更多>>

文献类型

  • 6篇中文期刊文章

领域

  • 5篇医药卫生
  • 1篇生物学

主题

  • 3篇精子
  • 3篇基因
  • 2篇凋亡
  • 2篇生精
  • 2篇生精细胞
  • 2篇睾丸
  • 2篇精细胞
  • 2篇精子发生
  • 2篇大鼠睾丸
  • 1篇蛋白
  • 1篇多克隆
  • 1篇多克隆抗体
  • 1篇抑制性
  • 1篇抑制性消减杂...
  • 1篇荧光
  • 1篇荧光实时定量
  • 1篇荧光实时定量...
  • 1篇生精细胞凋亡
  • 1篇生物学
  • 1篇生物学特征

机构

  • 4篇中国医学科学...
  • 4篇国家人口计生...
  • 2篇空军航空医学...
  • 1篇北京大学

作者

  • 4篇贾孟春
  • 4篇刘美玲
  • 2篇成毅明
  • 2篇石心泉
  • 2篇王介东
  • 1篇姜辉
  • 1篇周万灏
  • 1篇隋玉洁
  • 1篇袁任培
  • 1篇杜颖
  • 1篇陈茜

传媒

  • 3篇生殖医学杂志
  • 1篇中华男科学杂...
  • 1篇生理学报
  • 1篇Asian ...

年份

  • 2篇2011
  • 1篇2010
  • 1篇2009
  • 2篇2008
6 条 记 录,以下是 1-6
排序方式:
兔抗大鼠LM23蛋白合成肽多克隆抗体的制备与初步应用被引量:2
2009年
目的制备大鼠精子发生相关蛋白LM23的合成肽多克隆抗体,对其特性进行初步鉴定,并对LM23多克隆抗体进行初步应用。方法利用生物信息学方法分析选择LM23蛋白的多肽序列。应用Fmoc法化学合成大鼠LM23蛋白N端第1~20和第274~291个氨基酸多肽(接近C端),经C18的RP-HPLC纯化后,通过高碘酸钠法,将纯化的LM23蛋白的多肽与KLH交联,免疫新西兰大耳白兔,获得LM23蛋白的多克隆抗体。用ELISA方法鉴定多克隆抗体效价。通过Western blot方法鉴定LM23多克隆抗体的特异性并研究LM23在大鼠睾丸中的表达;通过免疫组化方法研究LM23在大鼠睾丸组织和细胞中的定位。结果化学Fmoc法分别合成大鼠LM23蛋白N端第1~20,第274~291个氨基酸多肽,纯化后两条多肽纯度都达到90%以上,符合免疫用抗原标准。将多肽与KLH交联,用于免疫动物。经ELISA鉴定,两种多克隆抗体的效价分别达到1:64 000和1:128 000。应用大鼠睾丸组织切片进行LM23-18肽多克隆抗体的免疫组织化学研究,发现精母细胞有阳性颗粒反应,且LM23主要表达于细胞核。Western blot研究证实,LM23-18肽多克隆抗体可特异识别大鼠睾丸组织中相对分子量(Mr)约为36 kD的LM23蛋白。结论所制备的LM23合成肽多克隆抗体可用于ELISA、Western blot及免疫组化研究。LM23合成肽多克隆抗体的制备为进一步研究LM23的功能和作用机制提供了有力支持。
成毅明刘美玲石心泉王介东贾孟春
关键词:合成肽精子发生多克隆抗体
LM23,Speedy/Ringo家族的新成员,处于生与死的十字路口被引量:4
2011年
LM23 is a gene specifically expressed in the testis of Rattus norvegicus, as previously reported by our laboratory. The aim of the study is to further investigate the biological function of LM23. Several bioinformatic tools were utilized, including PROSITE and BLAST. To determine the subcellullar localization of LM23, a polyclonal antibody specific for LM23 was generated via the immunization of rabbits. The LM23gene was cloned from rat testis tissue, and LM23 protein was expressed in Escherichia co/i. The biological function of LM23 was analyzed with microarray analysis and immunohistochemistry, using a rat model of LM23 gene knockdown. The results suggested that LM23 belongs to the Speedy/Ringo family. LM23 regulated the GI/S and G2/M transitions of the cell cycle during spermatogenesis. Downregulation of the LM23gene during spermatogenesis could lead to the activation of both the Fas-FasL pathway and the mitochondrial pathway. These novel findings indicate that LM23 has a diverse array of functions that are important in both the life and death of the spermatogenic cell.
Yi-Ming ChengMei-Ling LiuMeng-Chun Jia
关键词:SPERMATOGENESIS
LM23基因沉默引起大鼠睾丸生精细胞凋亡被引量:3
2010年
目的研究LM23基因敲低后生精细胞的凋亡状况及与凋亡相关基因表达改变。方法用TUNEL方法检测睾丸细胞的凋亡情况,用大鼠全基因组表达谱芯片检测LM23基因敲低后凋亡相关基因的表达改变。结果 TUNEL结果显示,LM23基因敲低侧大鼠睾丸生精小管内大量生精细胞发生凋亡。大鼠全基因组表达谱芯片分析结果显示,许多促凋亡基因如Bcl-2家族的促凋亡基因表达上调,而抗凋亡基因如Faf1和Zfp91基因的表达明显下调。结论敲低大鼠的LM23基因,启动了Bcl-2家族介导的线粒体凋亡途径,引发了生精细胞发生大量凋亡。
石心泉贾孟春刘美玲
关键词:生精细胞细胞凋亡CASPASE-3
大鼠睾丸特异表达基因Ube1的分离鉴定及生物学特征(英文)被引量:3
2008年
本研究采用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)和cDNA快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术从大鼠A型精原细胞和粗线期精母细胞中成功克隆出大鼠泛素激活酶(ubiquitin-activating enzyme)基因Ube1(GenBank登录号EF690356)。该基因序列全长3433bp,其中开放阅读框有3171bp,编码一个含1057个氨基酸的蛋白质。Blast比对显示,Ube1与小鼠泛素激活酶基因Ube1y1的同源性为93%,与人泛素激活酶基因UBE1的同源性为82%。Ube1基因编码的蛋白质含泛素激活酶信号位点和泛素激活酶活化位点,这些位点也存在于人类和小鼠的泛素激活酶1中。RT-PCR分析显示,Ub e1在睾丸中大量表达,而在心、肝、脾、肺、肾、肌肉、脑、卵巢中没有表达。荧光定量PCR分析不同生精细胞中Ube1的表达,显示Ube1在A型精原细胞中大量表达,在粗线期精母细胞、圆形精子细胞和支持细胞中微弱表达。以上结果提示,Ube1是大鼠睾丸特异表达基因,可能通过参与泛素/蛋白酶体途径来影响精子发生。
杜颖刘美玲贾孟春
关键词:精子发生抑制性消减杂交逆转录-聚合酶链反应
LM23基因降调激活Fas-FasL和线粒体通路使精母细胞凋亡被引量:3
2011年
目的通过LM23基因RNA干扰(RNAi)动物模型,探讨LM23基因降调对大鼠生精细胞凋亡的影响。方法使用本实验室建立的LM23基因RNAi大鼠动物模型,分别通过苏木精-伊红染色(HE)和原位末端标记方法(TUNEL)检测LM23基因降调后生精细胞的凋亡发生情况;基因芯片技术,分析LM23基因降调后凋亡相关基因的差异表达;免疫组织化学技术检测LM23基因降调后caspase3蛋白分子在生精细胞中的表达。结果 TUNEL结果显示,LM23基因降调后大量精母细胞发生凋亡;基因芯片分析结果,LM23基因降调后Fas-FasL信号转导通路和线粒体信号转导通路被激活;免疫组织化学技术发现,LM23基因降调后,caspase3蛋白分子在大鼠睾丸精母细胞中的表达量显著增加。结论 LM23基因降调后,可能激活Fas-FasL信号转导通路和线粒体信号转导通路,从而导致大量精母细胞发生凋亡。
成毅明刘美玲王介东贾孟春
关键词:生精细胞凋亡
生育男性和白细胞精子症患者精子线粒体基因缺失和含量的研究被引量:4
2008年
目的:测定生育男性与白细胞精子症患者精子线粒体DNA(mtDNA)含量、mtDNA4977bp缺失及精浆活性氧(ROS)水平,探讨精液中白细胞增加、ROS水平升高与精子mtDNA变化的相关性。方法:选取门诊白细胞精子症患者78例(病例组)、正常生育男性31例(对照组),采用Percoll梯度离心法将精液样本分为上清层、30%层和80%精子层,分别应用荧光实时定量PCR技术对每个精子mtDNA含量及mtDNA4977bp缺失进行定量分析,同时应用流式细胞术测定精浆ROS水平。结果:病例组精浆中ROS含量显著高于对照组(P<0.01)。与对照组比较,病例组各层精子mtDNA含量均显著升高,其P值均<0.01。在上清层和80%层,病例组mtDNA4977bp缺失与对照组差异不显著;而在30%层,病例组mtDNA4977bp缺失明显高于对照组(P<0.01)。对照组与病例组各样本中ROS含量分别与30%层精子和80%层精子的mtDNA含量间呈显著正相关(r=0.347,P<0.01;r=0.456,P<0.01),与上清层精子mtDNA含量无相关性。结论:白细胞增多和ROS升高可能是导致精子mtDNA含量显著增高的原因之一,但是对于mtDNA4977bp缺失没有显著影响。
周万灏马旭姜辉袁任培陈茜隋玉洁贾孟春
关键词:白细胞精子症活性氧荧光实时定量PCR
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