国家自然科学基金(30800226)
- 作品数：4 被引量：10H指数：2
- 相关作者：张志宏刘冉录徐勇孙建涛李胜芝更多>>
- 相关机构：天津医科大学天津市泌尿外科研究所更多>>
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- 靶向沉默核干因子对前列腺癌PC-3细胞增殖能力的影响被引量：5
- 2009年
- 目的:检测前列腺癌PC-3、LNCaP及DU145细胞中核干因子(Nucleostemin,NS)基因的表达,研究NS基因沉默后对PC-3细胞增殖能力的影响。方法:采用免疫细胞化学法及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测NS蛋白及mRNA在3种前列腺癌细胞中的表达。用NS特异性小发夹RNA表达质粒转染PC-3细胞,分别用RT-PCR及Western印迹方法检测转染后细胞(简称NS-shRNA-PC-3)中NSmRNA及蛋白的变化。比较NS基因沉默前后PC-3细胞体外、裸鼠体内增殖能力及凋亡情况的变化。结果:3种细胞中均显示NS基因高表达。转染后NS-shRNA-PC-3细胞中NS表达显著降低,细胞增殖速度减慢,G0/G1期细胞百分率显著升高,早期凋亡细胞增多。体内致瘤实验显示,NS基因沉默后,PC-3细胞在裸鼠体内增殖能力显著降低。结论:NS在前列腺癌细胞系中呈高表达,RNA干扰沉默NS基因后PC-3细胞增殖能力显著降低,凋亡细胞增多。
- 刘冉录徐勇张志宏王萌孙建涛张玥李胜芝
- 关键词：核干因子前列腺癌PC-3RNA干扰
- 靶向沉默核干因子对前列腺癌PC-3细胞全基因组表达谱变化的影响被引量：2
- 2009年
- 目的探讨核干因子（NS）基因在前列腺癌恶性增殖中的作用机制。方法采用表达谱基因芯片技术，分析前列腺癌PC-3细胞NS基因表达下调后全基因组表达谱的变化，筛选与NS相互作用的差异表达基因及信号通路。采用实时荧光定量聚合酶链反应对重要的差异表达基因进行验证。结果共筛选出219个差异表达的基因，这些基因涉及到细胞周期、细胞增殖、信号转导、细胞凋亡和细胞分化等多个方面。NS基因表达下调后主要引起周期素依赖激酶4抑制因子（INK4）家族基因（p15、p16和p18）的上调，以及cyclinD1和HDAC1基因的下调，其主要作用点位于CDK4／6-cyclin D和pRb—E2F1复合体上。结论在前列腺癌PC-3细胞中，NS基因可能主要通过抑制p15、p16和p18等INK4家族的肿瘤抑制基因的表达，从而促进肿瘤的发生和发展；NS基因是细胞周期G1／S期检查点的重要调控因子。
- 刘冉录徐勇张志宏王萌孙建涛张玥李胜芝
- 关键词：核干因子前列腺肿瘤
- Tf-PEG-PEI载细胞特异性干扰质粒靶向沉默前列腺癌核干因子的体外实验研究被引量：3
- 2012年
- 目的探讨非病毒基因转移载体转铁蛋白一聚乙二醇一聚乙烯亚胺（Tf-PEG-PEI）载前列腺特异性膜抗原增强子／启动子（PSMAe／p）为驱动序列的干扰质粒的细胞特异性沉默效果。方法应用聚乙二醇（PEG）修饰聚乙烯亚胺（PEI），偶联转铁蛋白（Tf）合成靶向载体Tf-PEG-PEI。以Tf-PEG-PEI为载体将细胞特异性干扰质粒pPSMAe／p-shNS-ploy（A）转入前列腺癌LNCap和PC-3细胞中，观察细胞形态变化，检测核干因子（NS）基因和蛋白水平、细胞增殖情况以及细胞周期的变化。结果成功修饰靶向载体Tf-PEG-PEI，细胞转染后，表达前列腺特异性膜抗原的LNCap细胞中NS表达水平显著降低，细胞膜边缘突起增多，更趋向于分化，细胞增殖速度减慢。在LNCaP细胞中，干扰组S期细胞的百分率[（14．17-4-0．32）％]明显低于载体组[（19．65±0．64）％]和对照组[（20．614-0．80）％，均P〈0．01）]；干扰组G，期细胞的百分率[（74．69±1．01）％]高于载体组[（71．06±0．38）％]和对照组[（70．17±0．32）％，均P〈0．01]。而在各组PC-3细胞中，干扰组、载体组和对照组处于S期的百分率分别为（28．86±1．13）％、（29．47±0．47）％和（29．864-0．36）％，差异无统计学意义（P〉0．05）；处于G1期的百分率分别为（63．34±0．81）％、（62．56±0．62）％和（61．71±1．07）％，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论非病毒载体Tf-PEG-PEI具有高效基因转移的能力，PSMAe／p驱动shRNA靶向干扰NS基因具有细胞特异性，使用细胞特异性启动子是实现前列腺癌靶向基因治疗的有效策略。
- 刘冉录王文滪张志宏徐勇
- 关键词：前列腺特异性膜抗原核干因子
- PSMAe／p特异性驱动shRNA靶向干扰前列腺癌LNCap细胞的研究
- 2011年
- 目的:探讨前列腺特异性膜抗原增强子/启动子(PSMAe/p)驱动短发夹RNA(shRNA)靶向干扰前列腺癌细胞的特异性。方法:运用RNA干扰技术,以转铁蛋白-聚乙二醇-聚乙烯亚胺(Tf-PEG-PEI)作为基因转移载体,以前列腺癌LNCap细胞为研究对象,并以前列腺癌PC-3细胞、膀胱癌T24细胞及人胚肾HEK293细胞做为对照,将外源增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因及以PSMAe/p为启动序列靶向EGFP的干扰质粒转入培养细胞,以实时定量PCR(qRT-PCR)及Western blot分别检测EGFP基因及蛋白在4种细胞各组中的表达情况,研究PSMAe/p驱动shRNA靶向干扰前列腺癌细胞的特异性。结果:在前列腺癌LNCap细胞组中,与单独转入EGFP基因(pEGFP-C1)的细胞组(A组)及转入EGFP基因(pEGFP-C1)+空载体质粒组(pPSMAe/p-UPRT)(C组)相比,转入EGFP基因(pEGFP-C1)及干扰质粒[pPSMAe/p-shEGFP-poIy(A)]组(B组),EGFP基因表达及蛋白表达水平下调,分别与对照组(A组、C组)相比差异具有统计学差异(P<0.05),而转入EGFP基因(pEGFP-C1)的细胞组(A组)和转入EGFP基因(pEGFP-C1)+空载体质粒组pPSMAe/p-UPRT)(C组)间比较差异无统计学意义(P>0.05);而在前列腺癌PC-3细胞、膀胱癌T24细胞及人胚肾HEK293细胞中EGFP基因及蛋白表达水平在实验组与对照组、对照组间比较差异无统计学意义(p>0.05)。结论:PSMAe/p驱动shRNA具有细胞特异性,其可驱动特异基因片段在前列腺癌LNCap细胞中表达,从而实现基因治疗的细胞特异性,可作为前列腺癌基因治疗的靶向策略之一。
- 王文滪刘冉录徐勇张志宏鞠培泉
