国家自然科学基金(30800219)
- 作品数：11 被引量：41H指数：4
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- 阳离子磷酸胆碱聚合物负载siRNA进行细胞转染的可行性被引量：1
- 2010年
- 目的探讨新型阳离子磷酸胆碱聚合物(MPC30DEA70)负载短片断干扰RNA(siRNA)进行细胞转染的可行性以及生物学效应。方法 MTT法分析MPC30DEA70对HepG2.2.15细胞的毒性;设计特异性siRNA,以MPC30DEA70负载红色荧光标记的siRNA转染HepG2.2.15细胞,在荧光显微镜下观察该载体携带siRNA能否进入细胞中及在该细胞中的转染效率。在此基础之上,观察对荧光素酶基因表达的抑制效应。结果在MPC30DEA70的浓度为0.5、1、3、5μl时,未发现对HepG2.2.15细胞产生明显的毒性,细胞存活率均在80%以上,并且能够携带siRNA进入细胞内,在48h的转染效率达(52.33±1.97)%,转染后能够有效地抑制荧光素酶质粒在HepG2.2.15细胞内的表达。结论 MPC30DEA70携带的siRNA在HepG2.2.15细胞中有着较高的转染效率,并发挥一定的生物效应,有望成为有效的siRNA载体。
- 孙莉莉张卓琦曹希传杨帆李秀华潘修成
- 关键词：细胞转染
- 替米沙坦干预心房颤动模型猪的右心房心肌靶蛋白鉴定
- 2011年
- 目的 研究替米沙坦（TMST）对实验性心房颤动（AF）模型猪的影响,分离并鉴定右心房组织差异表达蛋白.方法 健康家猪18只完全随机法分为3组,每组6只：正常对照（NC）组右心房植入电极不起搏,房颤（AF）组右心房植入电极并快速起搏,替米沙坦（TMST）组右心房植入电极快速起搏并给予TMST干预.实验前及2周后测量各组实验猪心室收缩末期左、右心房面积（LAESA、RAESA）.实验结束时进行右房组织Masson染色观察,双向蛋白质电泳分离各组右心房心肌差异表达蛋白质,采用基质辅助激光解吸电离-飞行时间-质谱技术鉴定靶蛋白.结果 AF组采用快速右心房起搏成功建立AF猪模型.与AF组比较,TMST干预可以减少AF诱发率和胶原纤维表达,并使LAESA和RAESA缩小[LAESA：（630.6±10.9）mm2比（744.3±29.9）mm2;RAESA：（553.4±13.7）mm2比（677.9±26.3）mm2,均P＜0.05].双向蛋白质电泳及质谱分析鉴定出翻译起始因子5A、热休克蛋白27、NADH脱氢酶铁硫蛋白8在TMST组表达减少.结论 翻译起始因子5A、热休克蛋白27、NADH脱氢酶铁硫蛋白8可能是与TMST减低实验猪AF诱发率、抑制心房重构相关的靶蛋白.
- 李飞张卓琦张超群徐晤王志荣
- 关键词：替米沙坦基质辅助激光解吸电离快速心房起搏
- 羟基红花黄色素A减轻大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤被引量：18
- 2018年
- 目的观察羟基红花黄色素A(HSYA)对乳鼠原代心肌细胞缺氧复氧(A/R)损伤的保护作用及其与磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/糖原合成酶激酶3β(PI3K/Akt/GSK3β)信号通路的关系。方法分离大鼠的乳鼠心肌细胞,孵育48 h,待细胞贴壁后,分为:对照组(Con组)、缺氧复氧组(A/R组)、HSYA处理组(A/R+H组)、PI3K抑制剂(LY294002)处理组(A/R+L组)和HSYA+LY294002处理组(A/R+H+L)。测培养基上清液LDH;流式细胞仪检测凋亡率;Western blot检测Bcl-2、Bax、Akt、p-Akt(Ser473)、GSK3β和p-GSK3β(Ser9)的蛋白表达水平。结果与对照组比较,A/R后LDH释放量和凋亡率增加(P<0.001),促凋亡蛋白Bax表达增加(P<0.001),而抗凋亡蛋白Bcl-2、p-Akt(Ser473)、p-GSK3β(Ser9)蛋白表达减少(P<0.001);HSYA处理后LDH释放量和凋亡率降低(P<0.001),Bax表达减少(P<0.001),而Bcl-2、p-Akt(Ser473)和p-GSK3β(Ser9)蛋白表达增加(P<0.001);与A/R+H组比较,A/R+H+L组Bax表达增加(P<0.001),而Bcl-2、p-Akt(Ser473)和p-GSK3β(Ser9)蛋白表达减少(P<0.001)。结论 HSYA可以通过调控PI3K/Akt/GSK3β信号通路保护大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤。
- 沈冰冰张松朱启仁王志荣张卓琦
- 双嵌段磷酸胆碱基聚合物作为c-myc AS-ODN基因运输载体研究被引量：1
- 2011年
- 目的 探讨双嵌段磷酸胆碱基聚合物MPC30-DEA70 作为反义寡核苷酸（AS-ODN）运输载体的安全性和有效性.方法 将载体MPC30-DEA70（N）与c-myc AS-ODN（P）在不同N/P比值的条件下复合,应用DNA凝胶电泳法、荧光显微镜、流式细胞术和四甲基偶氮唑盐（MTT）法对复合物溶液进行检测,观察复合物在HeLa细胞中的转染情况.结果 c-myc AS-ODN能与载体MPC30-DEA70电性中和,N/P比值越大复合物正电性越强;MPC30-DEA70/AS-ODN复合物能够进入细胞,转染效率随着N/P比值增大而增大;同时随着N/P比值增大复合物对细胞的增殖抑制作用显著增强.结论 MPC30-DEA70可以有效负载和运输c-myc AS-ODN,抑制HeLa细胞增殖,是一种新型的、安全有效的非病毒类转基因载体.
- 孙甜甜鲁永织张琪陈敏敏赵侠张敏王志荣杨煜刘加立张卓琦曹希传
- 关键词：C-MYC反义寡核苷酸细胞转染基因治疗
- 磷酸胆碱聚合物载TGF—β1反义寡核苷酸转染血管外膜成纤维细胞对TGF—β1的影响
- 2014年
- 目的观察新型阳离子磷酸胆碱聚合物MPC30-DEA70能否有效地转染针对转化生长因子β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）的反义寡核苷酸（AS—ODN）进入到血管外膜成纤维细胞中及转染后对血管外膜成纤维细胞内TGF-β1表达的影响，为MPC30-DEA70，聚合物作为药物基因治疗载体在心血管疾病中的运用奠定基础。方法组织贴块法培养大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞；应用共聚焦激光扫描显微镜（CLSM）观察MPC30-DEA70／TGF-β1AS-ODN（FAM标记）在细胞内的分布和定位；流式细胞仪（FCM）检测二者的细胞转染效率、荧光强度；免疫印迹实验（Western blot）检测TGF-β1细胞内表达。结果①原代培养的细胞呈纺锤形，多角形或者不规则形，细胞核较大，数量1～2个不等，轮廓清楚，核仁大而明显，呈椭圆形；②激光共聚焦显微镜观察到FAM标记的基因复合物多数分布在细胞核周围；③流式结果显示转染效率及荧光强度随N／P比增加而明显增大；④Western blot结果显示随着N／P比值的增大，TGF-β1的蛋白表达明显下降（P〈0．05）。结论MPC30-DEA70，能够携带TGF-β1-AS—ODN进入离体培养的大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞，并能下调TGF—β1蛋白的表达。
- 李菲王志荣张卓琦程明月张超群
- 关键词：反义寡核苷酸转化生长因子Β1非病毒基因载体
- 磁性介孔纳米粒子的制备及对抗癌药紫杉醇的传输被引量：5
- 2014年
- 以十六烷基溴化铵(CTAB)为结构导向剂,正硅酸乙酯(TEOS)为硅源,在碱性环境下经过自组装过程对单分散性磁性Fe3O4纳米粒子进行包覆,制备出磁性硅基介孔纳米粒子Fe3O4@SiO2.结合X射线衍射、傅里叶变换红外光谱(FTIR)、透射电子显微镜(TEM)以及氮气吸附-脱附等技术对Fe3O4@SiO2粒子进行表征.结果表明Fe3O4@SiO2纳米粒子具有球形形貌,平均直径约为150 nm,蠕虫状介孔结构,比表面积为932 m2/g,孔径为2.5 nm且分布较均匀,包覆后Fe3O4的结构得以保持,同时材料具有很好的磁响应能力.以抗癌药紫杉醇(Paelitaxel,TXL)为模型药物进行负载,实验结果表明,Fe3O4@SiO2对TXL的负载能力为80 mg/g,TXL-Fe3O4@SiO2对TXL的缓释时间持续120 h以上,累积释放量达到30 mg/g.通过噻唑蓝比色(MTT)法测量了TXL-Fe3O4@SiO2粒子对体外培养的HeLa细胞的细胞毒性,与相同浓度的TXL相比,TXL-Fe3O4@SiO2对HeLa细胞的抑制率明显增高.
- 张卓琦耿浩然宣瑞飞陈敏敏陈辉刘爱辉曹希传
- 关键词：紫杉醇HELA细胞FE3O4纳米粒子
- 心房颤动电重构机制中相关microRNA的表达差异被引量：7
- 2016年
- 目的通过体外培养原代心房肌细胞，快速电刺激模拟心房颤动（房颤）模型，筛选、分析与房颤电重构机制中相关的microRNA（miRNA）表达。方法采用胰酶与I型胶原酶双酶法及差速贴壁法分离培养乳鼠心房肌细胞，OL-横纹肌肌动蛋白抗体免疫荧光鉴定。乳鼠心房肌细胞在频率为4Hz、电压为15V、脉冲为5ms的快速电场刺激中培养24h模拟心房肌细胞房颤模型。心房肌细胞随机分为对照组、房颤组，提取各组RNA，运用实时荧光定量PCR（qPCR）TaqMan探针法检测房颤电重构机制中相关miRNA的差异性表达。结果与对照组相比，房颤组miR-101a、miR-101b、miR-26a、miR-26b表达显著下调（P〈0．01），miR-21、miR-328、miR-499表达显著上调（P〈0．01），而miR-1表达略有下调，但与对照组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。结论房颤电重构机制相关miRNA存在表达性差异，其中miR-101a、miR-101b、miR-26a、miR-26b低表达，miR-21、miR-328、miR-499高表达，它们有可能成为早期预警诊断房颤的生物学标志物，并有可能成为未来治疗房颤的干预靶点。
- 李艳茹张琼瞿晓雅张少利王鲁静李道远张松沈冰冰曹希传王志荣张卓琦
- 关键词：心房颤动MIRNA电重构
- 磷酸胆碱聚合物载反义c—myc寡核苷酸对兔髂动脉球囊损伤后血管狭窄的影响被引量：1
- 2013年
- 目的探讨局部转运磷酸胆碱聚合物MPC30-DEA70载反义c—myc寡核苷酸（c—mycAS—ODN）基因复合物对兔髂动脉球囊损伤后血管狭窄的影响。方法40只家兔随机分为对照组、多聚赖氨酸（PLL）组、裸c—mycAS—ODN组、PLL载基因复合物N／P=3：1组和N／P=5：1组，每组各8只。构建兔髂动脉球囊损伤模型，于血管损伤段行PLL、c—mycAS—ODN、PLL载N／P=3：1和N／P=5：1基因复合物的局部转运。24h后应用共聚焦显微镜观察基因复合物在髂动脉的分布情况；4周后苏木精-伊红染色光镜下观察髂动脉的组织形态学变化，包括新生内膜面积（NIA）、中膜面积（MA）和新生内膜／中膜面积比（I／M）；Western blot法检测各组损伤血管处c—myc蛋白的表达情况。结果共聚焦显微镜可见转染N／P=3：1、N／P=5：1基因复合物的血管内膜有均匀的绿色荧光分布。苏木精-伊红染色光镜下对照组、PLL组、裸c—mycAS—ODN组均可见显著的内膜增生，组间比较NIA、I／M无显著性差异（P〉0．05）；与对照组比较，N／P=3：1组和N／P=5：1组NIA、I／M均明显减少（P〈0．05），后两组间比较无显著性差异（P〉0．05）。Western blot显示对照组、PLL组、裸c—mycAS—ODN组c—myc蛋白表达均明显增高，组间比较无显著性差异（P〉0．05）；与对照组比较，N／P=3：1组和N／P=5：1组c—myc蛋白表达明显减少（P〈0．05），后两组间比较无显著性差异（P〉0．05）。结论多聚赖氨酸可促进MPC30-DEA70／c—myc AS—ODN复合物进入髂动脉血管，有效抑制球囊损伤后新生内膜的过度增生，为基因治疗血管内狭窄提供了新型的非病毒类转基因手段。
- 冯辉王霞林雪烽徐建荣孙敏程莹徐晤杨煜王志荣张卓琦
- 关键词：血管狭窄基因载体
- 羟基红花黄色素A通过抑制Mst1激酶活化对心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用被引量：6
- 2017年
- 目的观察羟基红花黄色素(Hydroxysaffl or yellow A,HSYA)对乳鼠原代心肌细胞缺氧复氧(anoxiareoxygenation,A/R)损伤的保护作用,并进一步探讨该作用与Mst1/YAP信号中Mst1激酶之间的关系。方法分离新生SD大鼠心肌细胞,孵育48 h,细胞贴壁,然后进行分组实验。正常对照组(Con组):正常条件下孵育36 h;缺氧复氧组(A/R组):正常孵育24 h后行缺氧10 h复氧2 h;羟基红花黄色素处理组(A/R+H组):正常孵育24 h后行缺氧10 h同时加用HSYA,后复氧2 h;Mst1si RNA后缺氧复氧组(Mst1si RNA+A/R组):小干扰转染后6 h,换正常培养基,孵育18 h,缺氧10 h复氧2 h。收集各组心肌细胞培养基上清测LDH,流式细胞仪检测活性氧水平及凋亡率,Western blot检测Mstl,cleaved caspase-3,Caspase-3蛋白表达变化。结果与Con组比较,A/R组ROS升高,凋亡率增加,活化Mst1的表达增加,cleaved caspase-3蛋白表达增加,差异有统计学意义;与A/R组比较,A/R+H组ROS水平降低,凋亡率下降,P-Mst1蛋白表达下降,cleaved caspase-3蛋白表达减少,差异有统计学意义。与A/R组比较,Mst1si RNA组ROS无明显变化,凋亡率下降,总Mst1及P-Mst1的蛋白表达下降,cleaved caspase-3下降,差异有统计学意义;与A/R+H组比较,Mst1si RNA组ROS水平较高,心肌细胞凋亡率增加,且差异具有统计学意义。结论 HSYA处理能减轻原代心肌细胞的氧化应激水平,减少心肌细胞凋亡,其机制可能部分依赖于抑制Mst1蛋白激活有关,但存在其他通路。
- 张琼李艳茹张松沈冰冰张卓琦
- 关键词：羟基红花黄色素A缺氧复氧
- 快速右房起搏制备猪房颤模型及其心肌组织中抗凝血酶测定的研究
- 2011年
- 目的观察快速右房起搏法制备猪房颤(AF)模型的可靠性及AF易并发血栓形成的可能机制。方法将12只健康家猪随机分为模型组和对照组各6只,模型组以闭胸法快速右房起搏建立AF模型并采用程序刺激或Burst刺激进行鉴定,对照组仅植入电极,不予起搏。两组均于心脏电生理检查结束后迅速开胸取心肌组织,采用双向凝胶电泳分离心肌差异表达蛋白,采用图像分析及质谱法测定抗凝血酶表达情况。结果模型组均成功建立AF模型,且其心肌组织中抗凝血酶表达明显低于对照组(P<0.05)。结论快速右房起搏法制备猪AF模型稳定可靠;AF易并发血栓形成的可能机制为其心肌组织中抗凝血酶表达降低。
- 李飞张卓琦张超群徐晤王志荣
- 关键词：双向电泳质谱分析心房颤动抗凝血酶
