中央高校基本科研业务费专项资金(JKQ2011046)
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
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- 产L-5-甲基四氢叶酸工程菌自动诱导培养基的优化
- 2012年
- 考察了自动诱导培养基代替异丙基-β-D-巯基半乳糖苷(IPTG)培养基诱导四氢叶酸还原酶在重组大肠杆菌BL21(DE3)中表达的可行性,对自动诱导培养基自诱导时的乳糖浓度和葡萄糖添加量进行优化,并与IPTG诱导培养基进行比较,确定了自动诱导培养基配方:葡萄糖1.8 mmol/L、乳糖3 mmol/L、胰蛋白胨10 g/L、酵母膏5g/L、NaCl 10 g/L。HPLC结果显示,自诱导与IPTG诱导条件下的L-5-甲基四氢叶酸产量接近。
- 刘娅梅卞筱泓许激扬赵刚刚
- 关键词：基因工程菌
- 重组亚甲基四氢叶酸还原酶代谢工程菌发酵工艺的优化被引量：1
- 2013年
- 目的优化重组亚甲基四氢叶酸还原酶代谢工程细菌株的发酵工艺,以提高此菌株中L-5-甲基四氢叶酸的累积量。方法通过单因素实验和正交实验研究此菌株的最优发酵工艺。结果此菌株的最优发酵工艺为:蔗糖为3%,酵母浸粉为1.0%,无机盐为NaCl-K2HPO4-MgSO4(1.26%∶0.42%∶0.02%),磷酸二氢铵为1.0%,接种量为5%,初始pH为7.5,诱导时机为2.5 h,诱导剂浓度为1.4 mmol·L-1,诱导温度为37℃,诱导时间为6 h,诱导剂添加次数为2次。优化后与优化前相比,此菌株的细菌生长量提高了36.4%,亚甲基四氢叶酸还原酶比活力提高了46.8%,L-5-甲基四氢叶酸的累积量提高了66.1%。结论本实验为此菌株的发酵罐中试放大提供了实验依据。
- 邵飞卞筱泓阙哲夫许激扬尤晓清赵玉成刘为营
- 关键词：亚甲基四氢叶酸还原酶代谢工程发酵工艺
- 菌体中L-5-甲基四氢叶酸的HPLC法检测被引量：2
- 2012年
- 目的:建立高效液相色谱法测定菌体中L-5-甲基四氢叶酸(L-5-MTHF)的方法。方法:加热法破碎细胞,强碱性阴离子交换树脂纯化,高效液相色谱柱为C18反向柱,流动相为K2HPO4(0.02 mol.L-1,pH7.2)-甲醇(84∶16)溶液,流速为1.0 mL.min-1,柱温为40℃,检测波长为290 nm。结果:L-5-MTHF在0.5～50μg.mL-1范围内线性良好,r=0.999 5,RSD为1.11%。结论:色谱法灵敏、准确、重现性好,可用于菌体中L-5-甲基四氢叶酸的定性与定量。
- 卞筱泓刘娅梅许激扬陈宗梦
- 关键词：高效液相色谱菌体
- 重组甘氨酸脱羧酶基因工程菌生产L-5-甲基四氢叶酸被引量：1
- 2013年
- 目的:针对叶酸代谢通路中的甘氨酸脱氢酶(GDC)构建高效表达GDC的重组菌E.coli BL21(pET22b-gcvP)并检测L-5-甲基四氢叶酸(L-5-MTHF)的增加量。方法:采用PCR法获得GDC基因gcvP,分别在其两端加上HindⅢ和XhoⅠ酶切位点,经HindⅢ和XhoⅠ双酶切后,连接到经同样双酶切的表达载体pET22b中,经限制性内切酶酶切和测序验证正确后,转化至E.coli BL21中。乳糖诱导重组蛋白表达,进行SDS-PAGE电泳,HPLC检测L-5-MTHF产量。结果:经双酶切与测序鉴定证实原核重组载体pET22b-gcvP构建成功,表达产物相对分子质量约为104×103,与GDC大小相符。与原始菌相比,重组菌的L-5-MTHF的产量增加了23.1%。结论:重组甘氨酸脱羧酶基因工程菌能够提高L-5-MTHF产量。
- 韩林许激扬卞筱泓邵飞吴东儿朱虹
- 关键词：原核表达双酶切
