国家自然科学基金(30670594)
- 作品数：12 被引量：79H指数：5
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- 慢病毒介导的增强型绿色荧光蛋白报告基因对间充质干细胞的标记被引量：10
- 2010年
- 目的 探讨慢病毒介导的增强型绿色荧光蛋白（EGFP）标记间充质干细胞（MSC）是否影响其细胞生物学特性,以及EGFP基因能否持久稳定表达.方法 以不同病毒感染复数（MOI）实行EGFP慢病毒对MSC的感染,通过流式细胞分析法（FACS）检测EGFP的阳性率,并在荧光显微镜下观察EGFP在MSC的表达情况;通过锥虫蓝染色、MTT比色法、Hoechst染色和FACS检测细胞活力、增殖、凋亡和周期;EGFP慢病毒感染MSC体外持续培养2、4、8、16周时通过FACS检测EGFP的阳性率和荧光强度,以评价EGFP基因在MSC表达的稳定性.结果 EGFP慢病毒以MOI=20感染MSC 96 h,EGFP阳性率达97.39%±0.68%;与对照MsC相比,EGFP慢病毒感染MSC时,对细胞活力、增殖、凋亡和周期均没有影响（P＞0.05）;EGFP-MSC在体外持续培养2,4、8、16周,EGFP阳性率分别为97.50%±0.54%、97.32%±0.51%、97.39%±0.11%、97.48%±0.13%,荧光强度（A值）分别为440 ±13、445±12、458±13、456±16,均能够保持稳定水平.结论 EGFP慢病毒能够高效标记MSC,并且不影响其生物学特性,EGFP基因在MSC能够持久稳定表达,可以用于下一步的细胞示踪研究.
- 李丹朱康顺周斌王劲颜荣华李征然孟晓春黄明声姜在波单鸿
- 关键词：干细胞慢病毒属增强型绿色荧光蛋白
- KAI1基因在人胰腺癌MiaPaCa-2细胞中诱导的自噬的机制研究
- 2012年
- 为观察KAI1诱导的自噬对人胰腺癌MiaPaCa-2细胞增殖和生存的影响，通过感染AD5-KAI1，使无KAI1表达的MiaPaCa一2细胞表达KAI1，CCK8检测细胞增殖，AnnexinV—FITC／PI双染法检测细胞凋亡，Westernblot检测Beclin1蛋白的表达情况。结果表明，感染AD5KAI1后MiaPaCa-2细胞KAI1蛋白表达增加、自噬形成增加和凋亡均明显增多，细胞增殖明显受到抑制。自噬阻断剂3-MA预处理可以有效地抑制KAII诱导的自噬，同时加强KAI1对细胞增殖的抑制和凋亡的诱导。结论：KAI1诱导的自噬拈抗KAI1诱导的凋亡，保护细胞，促进生存。
- 吴春燕郭晓钟
- 关键词：肿瘤转移抑制基因KAI1自噬胰腺癌
- 细胞高浓度磁性标记导致细胞外大量纳米颗粒聚集物的形成被引量：1
- 2009年
- 细胞移植在修复和替代受损器官、改善组织功能和基因治疗方面具有重要作用。活体细胞示踪是分子影像学的任务之一，能够实时监测移植细胞靶向迁移、迁移速度以及细胞在靶器官停留时间，有助于指导细胞移植技术在临床的合理应用。MRI具有组织和空间分辨率高、无放射损伤等优点，成为活体细胞示踪的重要研究手段。
- 李丹许杰华周斌朱康顺王劲孟晓春姜在波单鸿
- 关键词：细胞外细胞移植技术磁性细胞示踪
- 氢质子波谱成像对热缺血再灌注损伤大鼠移植肝细胞再生能力的评价作用被引量：2
- 2008年
- 目的 探讨磁共振氢质子波谱（1H-MRS）评价大鼠原位肝移植（OLT）热缺血模型肝细胞再生能力的意义，以及热缺血对于移植肝再生能力的影响。方法以实验组热缺血10min的大鼠肝移植模型和对照组无热缺血大鼠肝移植模型各30只为研究对象，移植术后分6个时间点（6h、1d、3d、7d、14d、30d）对每只大鼠行肝脏常规T1wI、T2wI成像及氢质子波谱扫描。扫描后取肝脏，测定肝细胞的细胞增殖核抗原（PCNA）表达，同时检测肝酶代谢水平。结果 术后5个时间点实验组的肝细胞PCNA阳性率、胆碱峰与水峰的峰高比值均高于对照组，实验组和对照组胆碱峰／水峰峰高比值均与相应PCNA的阳性率呈显著正相关（r实验=0．819，P〈0．01;r对照=0．543，P〈0．01）。实验组和对照组的血清ALT、AST术后明显升高，尤以术后6h～3d最为显著，实验组的ALT、AST明显高于对照组。结论 热缺血再灌注损伤对于移植后肝细胞的再生能力有明显的影响，１H-MRS的胆碱峰可以无创伤地评价移植肝的肝细胞再生能力。
- 张亚琴单鸿孔庆聪王劲孟晓春孙强杨扬陈规划邢海芳
- 关键词：肝移植肝细胞热缺血波谱
- 大鼠骨髓间充质干细胞的超顺磁氧化铁颗粒标记及MR成像被引量：8
- 2008年
- 目的描述超顺磁氧化铁(SPIO)颗粒标记大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)后对细胞的影响及MR成像特点,评价其标记效果。方法分离、纯化并培养大鼠BMSCs,使用多聚赖氨酸(PLL)对细胞进行SPIO(50μgFe/ml,48h)标记,采用普鲁士蓝染色、细胞内铁含量检测等评定SPIO标记BMSCs的效率;通过台盼蓝染色、二甲基亚砜比色法检测细胞活力和增殖情况,通过Hoechst染色观察细胞凋亡情况,评价SPIO是否影响BMSCs的生物学特性;并对标记的BMSCs进行MR成像(序列:T1SE、T2FSE及T2*GRE)。结果细胞标记率达100%,标记细胞铁含量明显高于未标记细胞;细胞活力、增殖、周期和凋亡检测显示标记细胞与未标记细胞间无统计学差异(P>0.05);MR成像显示标记细胞数目大于5×103个细胞时,3个序列图像均能够观察到信号变化,以T2*WI最为明显。结论大鼠BMSCs可以被SPIO(50μgFe/ml,48h)有效标记,且对细胞的生物学特性无明显影响;1.5TMR能够在体外观察到标记后的细胞。
- 周斌于春鹏李丹姜在波钱结胜朱康顺庞鹏飞单鸿
- 关键词：间充质干细胞超顺磁氧化铁磁共振成像
- 钴60放射法制备免疫功能抑制大鼠模型被引量：3
- 2007年
- 目的通过系统的钴60放射计划,对大鼠免疫功能抑制的合适剂量进行评估,为干细胞移植研究提供合适的的动物模型。方法SD大鼠随机分为12.5Gy、10Gy、7.5Gy、5Gy4个剂量组,10只/组。计算放射后2个月的死亡率。检测白细胞数量,评价各剂量组动物的白细胞参考值范围。结合死亡率和白细胞参考值范围,确定合适的放射剂量。通过对外周血中性粒细胞(PMN)吞噬实验和外周血白细胞移行抑制实验(MIT),对细胞免疫功能进行检测。结果行12.5Gy照射的大鼠,3d内全部死亡;10Gy放射后的大鼠在1个月内全部死亡;7.5Gy照射的大鼠2个月内死亡1只;5Gy照射的大鼠没有死亡情况发生。设定95%作为可信区间,计算白细胞数量参考值范围(109个/L),未放疗组:16.978+1.96×6.46;5Gy放疗组:4.93+1.96×0.72;7.5Gy放疗组:2.313+1.96×0.782;10Gy放疗组:1.03+1.96×0.507。t检验表明,随着放疗剂量的增加,各实验组的白细胞数量显著减少。对于细胞免疫功能的检测,外周血中性粒细胞(PMN)吞噬实验结果表明,机体全身免疫功能降低;外周血白细胞移行抑制实验(MIT)表明,机体T细胞免疫功能降低。结论7.5Gy可以一定程度上抑制大鼠的免疫功能,为合适的放疗剂量。
- 王晓红吕文天孟晓春孔庆聪王劲单鸿
- 关键词：钴60免疫功能动物模型
- 肝硬化分子影像学研究中门静脉入路的选择被引量：2
- 2008年
- 目的探索经大鼠肝脏门静脉实施骨髓间充质干细胞(MSC)输入的入路,并建立合理的经门脉介入给药动物模型。方法20只正常SD大鼠和20只肝硬化大鼠为实验动物模型。选择盲肠静脉、脾静脉,脾脏和肠系膜下静脉的适合穿刺点,分别实施门静脉DSA造影。确定合适的门静脉DSA造影入路,建立门脉介入给药动物模型。结果通过各入路的DSA比较表明,盲肠静脉作为入路,DSA下可以清晰显示门静脉,穿刺成功率100%,大鼠门脉给药动物模型存活均72 h。结论经盲肠静脉入路进行肝脏给药安全、可行,为肝脏MSC移植的分子影像学研究提供了合适的入路。
- 吕文天姜在波钱洁胜于春鹏庞鹏飞周斌李征然王劲朱康顺单鸿
- siRNA干扰人胰腺癌T3细胞系KAI1基因的表达被引量：1
- 2008年
- 目的应用小分子干扰RNA（small interference RNA，siRNA）干扰KAI1基因在人胰腺癌T3细胞系的表达，为基因治疗胰腺癌打下基础。方法针对KAI1基因CD82片段序列设计A、B、C、D4个siRNA靶序列，构建针对KAI1基因（CD82）含siRNA片段的慢病毒载体。以脂质体2000转染T3细胞，测定病毒滴度。以空载体、含不同靶序列siRNAd1载体的病毒感染T3细胞（MOI=5），采用实时PCR方法检测CD82mRNA的表达。结果正常对照组、空载体对照组、A靶序列组、B靶序列组、C靶序列组和D靶序列组CD82mRNA表达量分别为1．398±0．242、1．311±0．048、0．664±0．093、0．345±0．032、0．641±0．049和0．147±0．049，各靶序列组的表达量明显低于空载体对照组（P〈0．01）。结论府用RNAi可有效抑制r13细胞KAI1基因CD82片段的表达。
- 弭延斌郭晓钟刘峰徐建华田宏夏春莲吴开春樊代明
- 关键词：小分子干扰KAI1基因细胞系
- 在CCl_4诱导的大鼠肝脏纤维化模型中肝功、肝脏纤维化程度的监测被引量：9
- 2007年
- 目的对肝纤维化实验动物模型的肝功能和肝纤维化程度等指标进行评估。方法肝纤维化大鼠模型的制备,肝纤维化指标。血清透明质酸(HA),层粘连蛋白(LN),Ⅲ型前胶原(PCⅢ),Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)。肝功能指标:①反映肝细胞蛋白合成代谢功能的指标:总蛋白TPROT(g/L),白蛋白ALB(g/L),球蛋白GLB(g/L);②肝细胞受损的指标:谷草转氨酶AST(U/L),谷丙转氨酶ALT(U/L),胆碱脂酶CHE(U/L);③反映肝脏胆排泄、分泌及解毒功能的指标:总胆红素TBILI(μmol/L),直接胆红素DBILI(μmol/L),间接胆红素IBILI(μmol/L),总胆汁酸TBA(μmol/L);④胆汁淤积指示酶:谷氨酰转肽酶GGT(U/L),碱性磷酸酶ALP(U/L)。结果纤维化肝脏的形态学和病理学结果显示的大鼠的肝纤维化处于终末期状态;对于肝纤4项,除层粘连蛋白(LN)外,正常组和肝纤维化组的大鼠有显著性差异;对于肝功15项,除了总蛋白(TPROT)和胆碱酯酶(CHE)外,正常组和肝纤维化组的大鼠有显著性差异。结论肝纤维化大鼠的肝纤维化和肝功指标对对照组相比有显著性差异,与肝纤维化的病理和形态学检测相一致。
- 徐川董云旭吕文天赵大兵王劲姜在波张建生朱康顺单鸿
- 关键词：肝纤维化动物模型肝纤维化指标肝功能指标
- 磁性／荧光量子点双功能纳米粒子标记大鼠骨髓间充质干细胞被引量：7
- 2010年
- 目的利用磁性／荧光量子点双功能纳米粒子双标记大鼠骨髓间充质干细胞（BMSC），探讨标记效率和可行性。方法分离、纯化及培养大鼠BMSC。制备二氧化硅（SiO2）同时包裹四氧化三铁（Fe3O4）和碲化镉（CdTe）荧光量子点的磁性／荧光双功能纳米粒子Fe3O4@CdTe@SiO2，利用铁浓度为25μg／ml的Fe3O4@CdTe@SiO2标记BMSC，未标记的BMSC作为对照组。通过荧光显微镜观察细胞内纳米粒子的荧光表达情况。双标记后的BMSC分成8个不同数量级（3×10^6～1×10^3个），应用1．5T磁共振扫描仪进行T1WI、T2WI和T2^＊WI3个序列成像。分光光度计测量细胞铁含量，普鲁士蓝染色显示细胞内铁。结果荧光显微镜下可见双标记组细胞内Fe3O4@CdTe@SiO2纳米粒子显示为红色荧光，细胞标记率达到90％以上。磁共振成像可见3×10^6～5×10^4双标记组细胞较对照组T2WI、T2^WI信号减低，两组之间的信号差异随数量级减小而相应减小，T2^＊WI信号变化最明显，T2WI次之。细胞铁含量为（14．05±4．15）pg／细胞，普鲁士蓝染色可见双标记细胞胞质内蓝染的含铁颗粒。结论Fe3O4@CdTe@SiO2纳米粒子可同时对大鼠BMSC进行磁性和荧光双标记，有望成为磁共振和光学成像活体示踪移植后BMSC的有效手段。
- 颜荣华单鸿聂立波李丹王劲朱康顺王红飞马栋张黎明
- 关键词：干细胞磁共振成像放射性示踪剂
