湖北省教育厅重点项目(D200624001)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 相关作者：李蓓孙竞吴鹏吴均竹郭建华更多>>
- 相关机构：郧阳医学院太和医院军事医学科学院更多>>
- 发文基金：湖北省教育厅重点项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 解脲脲原体多条带抗原在大肠埃希菌中的表达和重组抗原的抗原性分析被引量：1
- 2009年
- 目的利用大肠埃希菌体外表达系统克隆、表达解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum,Uu)多条带抗原(MB抗原)并对其抗原性进行分析。方法将MB抗原基因的5′端保守性序列克隆到Gateway系统表达载体pDEST17上,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达。通过载体携带的6×His标签,纯化体外表达重组蛋白。并将重组蛋白与临床感染Uu的患者血清反应检测重组蛋白的抗原性。结果DNA序列分析证明MB抗原基因5′端414 bp的保守序列成功克隆至表达载体上,SDS-PAGE显示在大肠埃希菌中表达的重组蛋白与MB抗原大小符合。免疫印迹结果表明,体外重组表达的MB抗原能够与Uu感染的患者血清反应,提示其抗原性良好。结论解脲脲原体MB抗原的体外表达及其良好的抗原性,有助于建立Uu感染的血清学检测方法。
- 孙竞吴鹏李蓓吴均竹
- 关键词：解脲脲原体抗原性
- 解脲脲原体上转换发光免疫层析试纸条的制备被引量：1
- 2010年
- 目的:获得抗解脲脲原体外膜多条带蛋白(MB蛋白)的多克隆抗体,制备能够用于解脲脲原体检测的上转换发光免疫层析试纸条。方法:以体外表达的解脲脲原体外膜MB蛋白N端保守性序列为抗原,免疫小鼠制备抗MB蛋白的抗体,ELISA检测免疫动物血清抗MB抗体滴度,并以小鼠抗体标记上转换发光体颗粒(UCP颗粒),制备能够检测解脲脲原体的上转换发光免疫层析试纸条。结果:解脲脲原体多条带蛋白免疫动物血清抗MB的IgG抗体滴度均超过1∶25600,以此抗体为基础建立的解脲脲原体上转换发光免疫层析试纸条能够识别1～200μg/L的解脲脲原体MB抗原。结论:初步制备的上转换发光免疫层析试纸条能够检测解脲脲原体。
- 孙竞郭建华李蓓周蕾吴鹏
- 关键词：解脲脲原体免疫血清
- 解脲脲原体MB蛋白在大肠埃希菌中的表达与纯化
- 2009年
- 目的在大肠埃希菌中克隆、表达解脲脲原体种特异性抗原（MB）蛋白并纯化出重组蛋白.方法利用Gateway系统将MBA蛋白5’端保守性序列克隆到表达载体pDEST17上，并通过载体自身所带6XHis标签，利用Ni—NTA纯化出相应的重组蛋白.结果MB蛋白5’端414bp的保守序列成功地克隆到pDET17载体上并且表达出相应大小的目的蛋白.通过Ni—NAT纯化出重组表达的MB蛋白，其纯度达到93%，浓度为0．6mg/ml.结论解脲脲原体的MB蛋白的体外表达，为下一步制备相应抗体从而建立解脲脲原体的血清学检测方法打下基础.
- 孙竞刘靖晶吴鹏吴均竹李蓓
- 关键词：解脲脲原体纯化
