国家自然科学基金(30670541)
- 作品数：13 被引量：48H指数：4
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- 相关机构：暨南大学西南大学吉林农业大学更多>>
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- 体外构建毒性检测用皮肤模型InspecskinⅡ的初步研究
- 本文探讨了原代角质形成细胞（PHK）与成纤维细胞（Fb）共培养构建人工皮肤InspectskinⅡ的方法,为新型毒性检验用皮肤模型的建立奠定基础。分离原代人PHK和Fb,采用筏式培养技术,先将Fb与复合胶原凝胶支架共培养...
- 程树军秦瑶焦红温巧玲
- 关键词：角质形成细胞组织工程皮肤
- 文献传递
- 胶原的体外缓释性能研究
- 2008年
- 目的:探讨经聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物(PLGA)改性的水溶性胶原在体外对牛血清白蛋白(BSA)的缓释性能。方法:将PLGA、胶原和BSA制备成复合物,用ELISA法检测本复合物对BSA的缓释性质。结果:本复合物约以6.61ng/d的速率稳定地缓释BSA,在30天的考察期内,BSA累积释放率达到43%,本复合物形态保持完好。结论:本PLGA-胶原复合物有望发展成为一种体内植入型,具有对生物活性物质长效缓释性质的组织工程支架。
- 冯成利刘彬蒲德永黄亚东林绍强王艳萍李校堃
- 关键词：缓释胶原
- 非促分裂haFGF对H_2O_2损伤的人RPE细胞的保护作用被引量：4
- 2008年
- 目的研究非促分裂人酸性成纤维细胞生长因子（nm-haFGF）对H2O2损伤的人视网膜色素上皮（RPE）细胞的保护作用。方法利用H2O2建立人RPE细胞氧化损伤模型,采用MTT法检测RPE细胞的存活率,核染色观察RPE细胞的核形态,流式细胞仪检测RPE细胞死亡率以及Western blot检测bcl-2的表达。结果nm-haFGF预处理可以提高H2O2损伤的REP细胞的存活率;nm-haFGF质量浓度在0-10mg/L的范围内,RPE细胞存活率从67.4%上升至92%;nm-haFGF刺激后,RPE细胞的bcl-2表达增加。结论nm-haFGF对H2O2氧化损伤RPE的细胞具有保护作用,并在一定范围内呈质量浓度依赖性。其保护机制可能是通过bcl-2的增加而产生抗凋亡作用。
- 湛敏黄亚东丁长才张敏静朱德勇苏志坚
- 关键词：视网膜色素上皮细胞
- 体外构建新型化妆品检测用皮肤InspectskinⅠ的初步研究被引量：4
- 2008年
- 目的探讨ES源表皮干细胞（ESC）与高分子材料构建人工皮肤Inspectskin Ⅰ的方法，为化妆品皮肤毒性检验替代模型奠定基础。方法采用嵌入式培养法，先将3-羟基丁酸-co-3-羟基戊酸共聚物（PHBV）支架与原代小鼠成纤维细胞共培养5d构建真皮，再于表面放置ESC细胞，气-液界面培养7—10d，形态学和β1整合素、CK10、CK19免疫组化观察。结果成纤维细胞可在真皮支架内粘附，ESC细胞可在支架表面增殖分化形成含基底层、棘层和角化层的复层表皮结构，免疫组化表明基底层以上细胞中表达CK10明显增多，基底层有些细胞仍呈β1整合素和CK19阳性。结论Inspectskin Ⅰ替代皮肤模型是由ESC细胞分化形成的角化复层表皮结构和PHBV真皮结构共同构成的全层皮肤模型。
- 程树军焦红秦瑶
- 关键词：化妆品组织工程皮肤
- 树突状细胞提取与鉴定方法的研究进展被引量：3
- 2008年
- 黄亚东程树军
- 关键词：树突状细胞抗原呈递细胞因子
- bFGF/胶原蛋白复合海绵的研制及体内外药理学研究被引量：3
- 2010年
- 目的:研制碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)/胶原蛋白复合海绵并对其体外活性和体内过敏性进行研究。方法:以新鲜猪皮和bFGF为原料,制成bFGF/胶原蛋白复合海绵,并检测其理化性质,采用MTT法测定其浸提液对小鼠胚胎成纤维细胞3T3小鼠细胞的体外促增殖活性,采用迟发型超敏反应封闭贴敷试验研究其体内过敏作用。结果:高低剂量bFGF/胶原蛋白复合海绵的表观密度等理化性质指标与空白海绵比较均没有显著性差异;电泳检查结果表明复合海绵在约18kD处具有明显的条带;体外活性检测表明高低剂量bFGF/胶原蛋白复合海绵生理盐水浸提液均对3T3细胞具有明显的促细胞增殖作用,与PBS对照组比较具有显著性差异(P<0.01,P<0.05)。在过敏试验中,高低剂量bFGF/胶原蛋白复合海绵组以及生理盐水浸提液组动物在诱导和激发期间均未见过敏症状,病理检查结果表明,动物皮肤未见炎症病变;而阳性对照2,4-二硝基氯苯组动物过敏反应发生率为100%,且具有明显的炎症病变。结论:bFGF/胶原蛋白复合海绵理化性质较好,具有明显的促细胞增殖活性,对皮肤无过敏反应,有望开发成为新型外用治疗创伤的材料。
- 李燕梅黄亚东项琪曲红艳苏志坚赵文
- 关键词：理化性质过敏试验
- 酶联免疫法测定人碱性成纤维细胞生长因子脂质体的包封率被引量：5
- 2008年
- 建立了一种灵敏的定量检测人碱性成纤维细胞生长因子（hbFGF）脂质体中hbFGF含量的酶联免疫（ELISA）方法,应用于测定hbFGF脂质体的包封率。通过用hbFGF标准品溶液包被酶标板,加入特异性的鼠抗人hbFGF抗体（一抗）和山羊抗鼠IgG（二抗）,采用多因素棋盘滴定方法确定最佳实验条件为：一抗浓度200μg/L,二抗浓度50μg/L。本方法的检出限为0.86μg/L,工作浓度范围1.0~10μg/L,批内RSD为3.95%~4.27%,批间RSD为4.19%~7.21%,不同操作者批内和批间的RSD分别为6.21%和9.12%,可重复性良好。本方法测定hbFGF脂质体超滤液和氯仿提取液中hbFGF含量分别为（3.325±0.193）μg/L和（18.454±1.063）μg/L,组内RSD分别为4.69%和4.52%。hbFGF脂质体包封率为82.06%。本方法特异性高、重复性好、快速、简便,可用于hbFGF脂质体包封率及其它含hbFGF制剂的含量测定。
- 黄亚东张宏波赵文苏志坚曲红艳项琪张卉
- 关键词：酶联免疫法人碱性成纤维细胞生长因子脂质体包封率
- 酸性成纤维细胞生长因子的促细胞增殖作用和对实验秃毛大鼠的疗效研究被引量：3
- 2008年
- 利用大肠杆菌菌株表达出高纯度的酸性成纤维细胞生长因子,并对其促3T3细胞的增殖作用和对实验秃毛大鼠的疗效进行了研究。结果表明,在体外实验中,1.95ng/ml～1000ng/ml的aFGF溶液可以促进balb/c3T3细胞的分裂增殖,与PBS组比较具有显著性差异(P<0.05,P<0.01);在体内实验中,在第7天,4μg/mlaFGF组大鼠毛发长度变长,与模型对照组比较有显著性差异(P<0.05);在第14天,2μg/ml和4μg/mlaFGF组大鼠毛发长度继续变长,与模型对照组比较有显著性差异(P<0.05)。病理检查结果显示aFGF可以促进实验秃毛大鼠的毛囊数目增多,毛囊无萎缩变小现象,血管无充血现象,基本恢复到正常水平。由此得出aFGF可以促进3T3细胞的分裂增殖,以及促进实验秃毛大鼠的毛发生长。aFGF具有很好的开发前景。
- 李燕梅黄亚东曲红艳项琪赵文
- 关键词：酸性成纤维细胞生长因子细胞增殖疗效
- 体外构建的皮肤模型Inspectskin Ⅰ修复裸鼠全层皮肤缺损被引量：5
- 2009年
- 【目的】探讨胚胎来源表皮干细胞构建的人工皮肤模型InspectskinⅠ修复全层皮肤缺损的作用,为构建含皮肤附属结构的检验用皮肤奠定基础。【方法】将人羊膜和BMP-4定向诱导小鼠胚胎细胞分化为表皮干细胞,采用筏式培养在体外与PHBV和成纤维细胞共培养构建组织工程皮肤,经短暂培养后移植于裸鼠皮肤缺损创面,对移植物进行形态学和免疫组织化学观察。【结果】移植物可封闭皮肤缺损,在其表面可形成复层表皮样结构,真皮部分可见大小不等的由单层或复层上皮样细胞构成的管状和泡状结构、汗腺样结构和毛囊样结构。免疫组化和免疫双标结果表明新生表皮的基底层分别呈CK19和CK10阳性,腺管样结构分别呈CEA和CK18阳性。【结论】体外重建的人工皮肤能修复裸鼠全层皮肤缺损,胚胎来源表皮干细胞具有分化为复层扁平上皮、汗腺样结构和毛囊样结构的潜能。
- 程树军黄锦桃李海标焦红
- 关键词：表皮干细胞组织工程皮肤毒性试验
- TAT-aFGF融合蛋白在大肠杆菌中的表达及其生物活性测定被引量：3
- 2010年
- 构建表达Tat与人酸性成纤维细胞生长因子(acidic fibroblast growth factor,aFGF)融合蛋白的重组质粒pET3c Tat-aFGF14-154和pET3c-Tat-aFGF27-154,并转化大肠杆菌BL21(DE3)中。37℃,1mmol/L的IPTG诱导4h后,获得分子量约为18kDa的融合蛋白,表达量分别占菌体总蛋白的42%和24%。利用阳离子交换(CM-Sepharose FF)、肝素亲和层析(Heparin-Sepharose CL-6B)以及分子筛(Sephadex G-25)联用的方法可获得纯度大于95%的目的蛋白,得率分别为93ml/L和78mg/L。Tat-aFGF14-154及其对照蛋白aFGF14-154对Balb/c3T3细胞有明显促细胞增殖的作用,最佳作用浓度分别为1280ng/ml和160ng/ml。而Tat-aFGF27-154及其对照蛋白aFGF27-154则几乎没有促细胞增殖活性。免疫荧光分析结果表明,Tat-aFGF14-154及Tat-aFGF27-154均能穿过PC12、Balbc/3T3、HaCaT和海马神经元细胞的细胞膜,并主要定位于细胞浆中。此外,四种重组蛋白均能降低Aβ25-35对大鼠海马神经元细胞的毒性,在剂量为1000ng/ml时,Tat-aFGF14-154、Tat-aFGF27-154、aFGF14-154及aFGF27-154细胞存活率分别为90.66%、81.87%、85.71%和78.02%,而Aβ25-35模型组的存活率仅为56.87%。
- 林健聪张敏静苏志坚陈红霞邱壮伟娄国锋项琪黄亚东
- 关键词：穿膜肽人酸性成纤维细胞生长因子融合蛋白
